植物基因分离方法及其评述     

江树业  陈启锋  方宣钧  李维明  吴为人 《福建农林大学学报(自然科学版)》2000,29(3):261-268

总结了目前植物基因分离的方法及其成就 ,概括出 6种植物基因分离的方法 ,即序列克隆法、功能克隆法、转座子标签法、图谱分离法、消减杂交法和差异表达分析法 (c DNA- RAPD、DD- PCR、RDA和 SSH) ,并对其特点和适用范围进行了评述 .  相似文献   

出芽短梗霉菌株紫外诱变及其发酵条件优化   总被引：12，自引：0，他引：12  

方宣钧  张英 《农业生物技术学报》1998,6(2):123-129

本研究应用紫外（ＵＶ）随机诱变获得了两株多糖产量高,色素低的出芽短梗霉突变株ＺＹ０４７和ＺＹ０７３,其产量分别为１５．１５和１４．２２ｍｇ／ｍＬ。发酵状况大大改善,产生大量的膨大细胞和厚垣孢子,通过短梗霉的培养基适宜碳氮化和发酵条件,获得优化的培养基方案为：蔗糖５％,ＫＨ２ＰＯ４０．５％,ＮａＣｌ０．１％,ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ０．０２％,（ＮＨ４）２ＳＯ４０．０３％,酵母浸出粉０．０９％,优化的发  相似文献   

水稻第2染色体上细菌性条斑病抗性QTL的检测   总被引：17，自引：0，他引：17  

郑景生  李义珍  方宣钧 《中国农业科学》2005,38(9):1923-1925

 用中抗和高抗细菌性条斑病（简称细条病）的两个籼稻品种明恢86和佳辐占为亲本构建了F2群体，应用SSR标记在水稻第2染色体的RM279～RM154之间检测到1个与水稻细条病抗性有关的QTL，其可解释遗传表型变异的13.7%，其加性效应为0.9576，来自抗病亲本佳辐占。  相似文献   

水稻成熟胚盾片诱导愈伤组织再生体系的建立   总被引：6，自引：0，他引：6  

伍成祥  宛煜嵩  徐俊  苏金  方宣钧 《热带作物学报》2002,23(3):88-95

采用水稻成熟胚盾片诱导愈伤组织作为分化再生的外植体，通过优化激素组合和调节培养基渗透压，建立了适合水稻遗传转化的高效再生体系，将水稻成熟胚诱导愈伤组织分化再生的过程划分为3个不同时期，即成熟胚盾片愈伤组织诱导，胚性细胞诱导保持，胚性愈伤组织分化再生，以CultureI(LS 2,4-D2.0mg/L)诱导成熟胚盾片愈伤组织，愈伤组织剥离后接种于Culture II-3(LS 2,4-D 2.5mg/L 山梨醇3g/L)上诱导胚性愈伤组织，继代后接种于Culture Ⅲ-2(MS NAA 0.5mg/L 6-BA 1.0mg/L Kinetin 2.0mg/L 山梨醇8g／L）上分化成苗，培养结果表明，该再生体系所获得的胚性愈伤组织分化再生率均在60％－80％之间，利用本研究建立的高效再生体系建立水稻外源基因遗传转化系统，使转化过程中所得转化愈伤组织高效再生成苗，从而顺利获得转化植株，可以提高水稻外源基因转化的效率，为水稻品种的定向遗传改良提供优良的遗传转化技术体系。  相似文献   

利用大豆分子连锁图定位大豆孢囊线虫4号生理小种抗性QTL   总被引：28，自引：0，他引：28  

蒙忻  刘学义  方宣钧 《分子植物育种》2003,1(1):6-21

大豆孢囊线虫 (SCN ,HeteroderaglycinesIchinohe)是一种土传的定居性内寄生线虫 ,是引起大豆黄萎病的病原 ,是大豆生产上危害最大的病害之一。SCN的生理小种多达十几种 ,在我国大豆孢囊线虫病原主要为 4号生理小种 ,它是现有生理小种中致病力最强的小种。经典遗传学研究已经确定大豆孢囊线虫抗性基因由 1- 4对核基因控制 ,估计有 10个以上的抗性座位。近年来分子标记技术及QTL定位方法的发展为深入研究该病害的抗性遗传规律提供了有效的手段 ,这对加速我国抗大豆抗孢囊线虫新品种培育具有重要意义。本研究以晋豆 2 3×ZDD2 315组合F2 群体 (2 5 3个单株 )为试验材料 ,其中灰布支黑豆 (ZDD2 315 )是我国山西省农家品种 ,对大豆孢囊线虫 4号生理小种表现为高抗。利用塑料钵柱法进行SCN抗性鉴定 ,构建大豆孢囊线虫抗性主座位所在区域的分子图谱 ,并进行SCN的QTL定位及遗传效应分析。根据已发表的大豆A和G连锁群的分子遗传图谱 ,应用BSA法 ,获得了 8个与SCN4号生理小种抗性基因相关的SSR标记 ,它们是Satt0 38(176bp/ 182bp) ,Satt30 9(130bp/ 135bp) ,Satt6 10 (2 4 0bp/ 2 2 2bp) ,Sat_14 1(189bp/ 184bp) ,Satt187(30 0bp/ 2 5 0bp) ,Satt315 (2 5 3bp/ 2 4 8bp) ,Satt6 32 (2 86bp/ 2 90bp)和Sat_16 2(2  相似文献   

分子选择   总被引：19，自引：8，他引：11  

方宣钧  吴为人 《分子植物育种》2003,1(1):1-5

选择是指在一个群体中选择符合需要的基因型，它是育种实践中最重要的环节之一。在传统育种中。选择的依据通常是表现型，从表现型推断基因型。表型选择对寡基因控制的质量性状较为有效，而对多基因控制的数量性状则效率不高。随着现代分子生物学的迅速发展，分子选择技术为实现对基因型的直接选择提供了可能。本文概述了分子选择的原理、方法及应用，讨论了分子选择存在的问题和发展前景。  相似文献   

利用水稻基因组序列数据开发SSR标记的方法   总被引：12，自引：0，他引：12  

朱宏波  方宣钧  杨仁崔 《分子植物育种》2003,1(2):273-276

水稻基因组序列中存在着丰富的简单重复序列(SSR)，而已经开发利用的仅仅是一小部分。本文提出了通过搜索水稻基因组序列中的简单重复序列开发SSR标记的思路和方法，并介绍了应用本方法成功地在500kb范围内，获得22个SSR标记，其中10个在定位群体中扩增出多态带的SSR标记并将其定位，本实例验证了利用水稻基因组序列数据开发SSR标记是十分有效的。  相似文献   

莲雾乙烯受体基因保守序列的克隆及分析     

韩继成  冯志红  方宣钧 《华北农学报》2003,18(Z1):56-58

用莲雾的叶片提取基因组DNA作为模板,根据乙烯受体基因的保守序列设计引物,进行PCR扩增,得到长度约1.5kb的目的片段,将其克隆到pGEM T-easy载体转化大肠杆菌,提取质粒,进行限制性内切酶图谱分析及序列测定.结果表明,该目的片段全长为1400bp,与栽培稻(Oryza satzva)的osers基因组DNA可比对序列的一致性为98.68%.在所应用的12个内切酶中,该片段内部没有切点,根据序列特征和与其他乙烯受体基因序列比较,推测该片段有2个内含子和3个外显子片段组成,外显子总长为972 bp,编码324个氨基酸,其中第197～324氨基酸残基与组氨酸蛋白激酶的磷酸基团接受域有同源性.  相似文献   

基因枪转化MAR序列介导水稻bar基因的表达分析   总被引：7，自引：0，他引：7  

伍成祥  宛煜嵩  徐俊  苏金  方宣钧 《农业生物技术学报》2002,10(3):227-230,T001

以水稻（Oryza sativa L.) 成熟胚愈伤组织作为水稻遗传转化受体，采用带有MAR（matrix attachment region)和不带MAR的两种植物表达质粒进行基因枪轰击转化bar基因，获得抗basta转基因水稻。分析了MAR序列介导在转基因水稻中对转基因表达的影响。研究结果表明，利用MAR序列介导bar基因表达，获得的转基因系的数量比对照提高66．7％，单块抗性愈伤组织再生植株数比对照提高27．3％，MAR序列介导bar基因表达的转基因系中，bar基因的表达水平比对照高，并且不同转基因系间bar基因表达差异比对照小。  相似文献   

用AFLP标记饱和大豆SSR遗传连锁图   总被引：5，自引：0，他引：5  

吕蓓  张丽霞  宛煜嵩  肖英华  刘丕庆  方宣钧 《分子植物育种》2005,3(2):163-172

本研究将52个AFLP标记整合到由宛煜嵩等(2005)构建的含有227个SSR标记的大豆遗传连锁图上,绘制成一张基于SSR-AFLP标记的大豆遗传连锁图,总遗传图距为2512cM,相邻标记间的平均距离为9．0cM。AFLP标记的整合使得图谱的总图距增长了32％。在Dla、E、F、G、K连锁群上,AFLP标记主要整合在连锁群的末端,其中G连锁群尤为明显,末端增加了19个AFLP标记,使得G连锁群的长度由原来的121．2cM增加到259．1cM,相邻标记间的平均距离由原来的7．129cM变为7．197cM;在．A2、B1、C2、D2、H、J、L、N、O连锁群,由于加入了AFLP标记使得这些连锁群的标记密度有所增加,改善了标记分布的均匀性。A2连锁群上添加了1个AFLP标记,消除了1个间隙;D2连锁群上添加了2个AFLP标记,提高了原来的一个超过40cM的区间(Satt301和Satt186)标记密度;J连锁群上添加了2个．AFLP标记,消除了2个间隙。AFLP标记整合后,大多数连锁群上的SSR标记的顺序和遗传图距几乎与宛煜嵩等(2005)构建的大豆遗传连锁图上的顺序和图距一致,只有M、N和O3个连锁群上的SSR标记顺序发生了一些变化,如M连锁群上的Satt590、Satt20l和Sattl50及O连锁群上的Satt241和Satt479发生换位;N连锁群上的几个SSR标记的位置发生随机换位。我们认为构建一张理想的遗传图谱,需要来源于不同遗传背景的多种群体、多种类型的遗传标记配合。AFLP标记并非是遗传连锁图构建中常见的大区间、间隙及标记成簇分布等问题的完全解决方案,且认为AFLP标记是构建高密度的遗传连锁图的理想分子标记的看法也值得商榷。  相似文献