猪TLR4基因在F18大肠杆菌抗性型和敏感型资源群体间的差异表达分析   总被引：2，自引：1，他引：1  

包文斌  潘章源  朱璟  叶兰  杜子栋  蔡家嘉  黄小国  朱国强  吴圣龙 《畜牧兽医学报》2011,42(2)

本研究旨在检测TLR4基因mRNA在猪各个组织的分布以及在F18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间差异表达水平,为探讨该基因在免疫识别和F18大肠杆菌抗性中发挥的作用提供理论依据。本试验运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术进行定量测定。首先,各取8头35日龄F18大肠杆菌抗性型和敏感型苏太仔猪组织样,包括心脏、肝脏、脾脏等11个组织,提取总RNA,以GAPDH基因为内参基因,进行实时荧光定量PCR。对TLR4基因mR-NA进行均一化处理,利用荧光阈值(Ct值)计算TLR4基因mRNA在各个组织以及F18大肠杆菌抗性型和敏感型群体间表达量。结果显示,TLR4 mRNA在猪各种组织中广泛表达,在肺、淋巴结、肾脏和脾脏等免疫器官中表达量较高,F18大肠杆菌敏感型的TLR4基因表达量普遍高于抗性型个体的表达量,在各个组织中(除胃外)TLR4表达量差异倍数从1.083到2.980不等;在肺、淋巴结、肾脏和胸腺组织中,F18大肠杆菌敏感型的TLR4基因表达量显著高于抗性型个体的表达量(P<0.05)。本研究结果表明,TLR4基因通过天然免疫识别机制对猪F18大肠杆菌病等革兰氏阴性疾病有一定的影响,TLR4基因表达量...  相似文献   

重组质粒pACYC184-hok/sok的构建及稳定性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

康小燕  蒋志伟  郁磊  羊扬  舒燕  姚丰华  朱国强 《中国兽医学报》2011,31(3)

以低拷贝质粒pACYC184为载体,将hok/sok基因插入到载体BamH Ⅰ位点,构建重组质粒pACYC184-hok/sok稳定系统,同时构建hok/sok基因缺失突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M).通过对构建的重组菌进行连续传代和对不同代次的重组质粒进行SphⅠ酶切,分析hok/sok基因的引入对宿主细胞生长的影响.结果表明,重组质粒pACYC184-hok/sok在无抗生素筛选压力下连续传代,传至第135代时质粒稳定率仍是100%,且传代前后的质粒SphⅠ酶切图谱没有发生变化,DNA序列测定表明,插入的hok/sok基因没有发生任何突变.突变重组质粒pACYC184-hok/sok(M)传代前后的质粒SphⅠ酶切结果虽没有发生变化,但其相应的重组菌传至第15代,质粒几乎完全丢失.生长曲线的测定结果表明,与舍pACYC184重组菌生长曲线相似,pACYC184-hok/sok重组菌生长较快,而pACYC184-hok/sok(M)重组菌生长缓慢.以上结果表明,含hok/sok稳定系统,其稳定性明显高于无hok/sok稳定系统的质粒pACYC184以及突变质粒pACYC084-hok/sok(M).重组质粒pAqCYC184-hok/sok具有良好的结构稳定性和分离稳定性.  相似文献   

重组型番鸭细小病毒JH10株的分子特征解析     

王志仙  秘清灵  凌珏怡  贾婧宇  鲍芳  王昱  王钜华  王建业  朱国强 《中国动物传染病学报》2020,(2):66-71

为了解析番鸭细小病毒(MDPV)分离株JH10的分子特征,本研究对该毒株全基因组进行了扩增、测序、重组分析及遗传进化树的构建。结果显示:JH10株基因组由5071个核苷酸组成,P9启动子区和VP3基因内部约1.1 kb区域经历了重组,GPV鹅胚化弱毒株SYG61v参与了P9启动子区的重组,而GPV强毒株LH、B和SYG61v不同程度地参与了VP3基因内部的重组;以VP3基因重组片段构建遗传进化树,JH10株与8个经典型GPV株处于同一个进化分支中,而以毗邻的上下游非重组区片段分别构建的遗传进化树中,JH10株则与4个经典型MDPV株处于同一分支。本研究结果表明,JH10株为经典型MDPV和GPV之间的重组产物,该研究结果为进一步阐明重组型MDPV的致病机理奠定了基础。  相似文献   

鸡产蛋下降综合征的研究及防制   总被引：1，自引：0，他引：1  

朱国强  杨训伊 《江苏农业研究》1994,15(2):5-13

ＥＤＳ７６是近几年传入我国引起蛋鸡产蛋下降的主要原因。研究结果表明：该病由腺病毒引起，可通过垂直和多种水平途径传播，对２６－４３周龄产蛋鸡影响最大，只产薄壳蛋、无壳蛋，卵巢和输卵管是该病侵害的主要部位，从鸡体分离鉴定的３个毒株经血清学交叉试验证明，与ＥＤＳ７６ＡＶ１２７标准株密切相关，而与其它禽腺病毒无关，用ＡＶ１２７特异性单抗建立的荚心ＥＬＩＳＡ特异，灵敏。筛选的Ｈ９１－１毒株制备的油乳剂灭活苗  相似文献   

鸡产蛋下降综合征的研究及防制   总被引：1，自引：0，他引：1  

朱国强  王永坤  周继宏  金山  杨训伊  曹权  严勋  周葆生  孙银华  伍仁福 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》1994,(2)

ＥＤＳ_（７６）是近几年传人我国引起蛋鸡产蛋量严重下降的主要原因。研究结果表明：该病由腺病毒引起，可通过垂直和多种水平途径传播，对２６～４３周龄产蛋鸡影响最大，只产薄壳蛋、无壳蛋，卵巢和输卵管是该病侵害的主要部位。从鸡体分离鉴定的３个毒株经血清学交叉试验证明，与ＥＤＳ＿（７６）ＡＶ＿（１２７）标准株密切相关，而与其它禽腺病毒无关。用ＡＶ＿（１２７）特异性单抗建立的荚心ＥＬＩＳＡ特异、灵敏．筛选的Ｈ＿（９１－１）毒株制备的袖乳剂灭活苗在江苏大面积使用后有效地控制了该病的流行。  相似文献   

人工感染中间龙介虫导致产蛋鸡产蛋下降与粪便水分含量增加的研究     

李向红  朱国强 《中国禽业导刊》2000,17(6):25-26

螺旋体中龙介虫（Ｓｅｒｐｕｌｉｎａ）属的压氧性肠螺旋体定值于各种动物的大肠部位,其中有三种被认为是猪的病原体;一利为强溶血性猪痢疾螺旋体（Ｓ　ｈｙｏｄｙｓｅｎ－ｔｅｒｉａｅ）引起猪痢疾（Ｓｔａｎｔｏｎ, １９９２）,而弱溶血性Ｓ ｐｉ－ｌｏｓｉｃｏｌｉ和Ｓ． ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ分别引起猪肠螺旋体病（Ｔｒｏｔｔ等,１９９６）和一种尚未明确的定植感染即“螺旋体结肠炎”（Ｈａｍｐｓｏｎ和Ｔｒｏｔｔ,１９９５;Ｓｔａｎｔｏｎ等１９９７）。 最近几年,相继在荷兰（Ｄａｖｅ１ａａｒ等,１９９６;Ｄｗａｔｓ等,…  相似文献   

抗沙门菌PEG菌毛单克隆抗体的制备及初步临床应用     

杨溢  杨玮枫  张东  孟霞  潘夏雨  袁天梅  朱春红  朱国强 《中国预防兽医学报》2018,(5)

为制备抗沙门菌PEG菌毛单克隆抗体(MAb),本研究从鸡白痢沙门菌(CVCC526)基因组中扩增菌毛蛋白基因peg A,将其克隆至原核表达载体pET-22b(+)中构建重组质粒pET-peg A,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白rPegA。应用该蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经间接ELISA筛选后获得1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株,命名为3D12,抗体亚类鉴定其属于IgG1亚类,腹水效价为1∶64 000。通过western blot和玻板凝集试验检测结果显示,该MAb与肠炎沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌呈阳性反应,而与鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌CE2、CE7、CE53、DH5α均不发生反应。以PEG菌毛MAb建立玻板凝集方法,检测本实验室临床分离保存的72份禽源沙门菌,同时以商品化沙门菌诊断血清作为平行对照,结果两种方法符合率达97.2%。本研究研制的MAb可用于沙门菌PEG菌毛基础研究和快速检测。  相似文献   

一株基因Ⅶ型新城疫病毒的分离及分子鉴定   总被引：12，自引：1，他引：12  

刘华雷  王永坤  朱国强  严维巍  田慧芳  周继宏 《中国兽医学报》2002,22(3):216-218

从一起新城疫暴发的病例中分离出1株新城疫病毒（NDV），命名为铜山分离株（TS）。运用RT-PCR技术，克隆了该分离株F基因的重要功能片段（约0.5kb)，并进行了序列测定。序列分析表明，TS分离株在F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为^112-R-R-Q-K-R-F^117，与NDV强毒株特征相符，且具有101外的K（赖氨酸）和121处V（缬氨酸）2个特征性氨基酸，与基因Ⅶ型NDV的特性完全相符。  相似文献   

鸡腺胃型IBV分离株血凝特性初探   总被引：6，自引：0，他引：6  

朱国强  庄国宏 《中国畜禽传染病》1997,19(6):30-31

从不同发病地区患鸡传染性腺胃病的鸡中分离出４株病毒，选择Ｈ９５和Ｓ９６两株流行株，采用胰蛋白酶和卵磷脂酶Ｃ处理，在不同条件下测定其血凝性，试验表明：用２％胰蛋白酶３７℃处理０．５小时后的病毒株对鸡的红细胞凝集价高达２＾１４，这种血凝性不能被抗Ｈ９５毒株的单克隆抗体、鼠、鸡特异性抗血清所抑制。经４单位／ｍｌ卵磷脂酶Ｃ３７℃处理３小时后血凝价可达２＾９，而能被相应的特异性单克隆抗体、鼠、鸡抗血清所抑制  相似文献   

一株H3N2亚型猪流感病毒株的分离鉴定及对猪的感染性研究     

路伟  张秀华  苏玮玮  武华  朱国强 《中国预防兽医学报》2018,(1)

为探究猪流感病毒(SIV)黑龙江分离株的基本特性,本研究将2007年从黑龙江省某猪场采集的鼻拭子样品接种10日龄SPF鸡胚进行病毒分离,经微量血凝试验、HA和NA基因RT-PCR扩增并测序确定其病原特异性,与Gen Bank已登录的序列进行比对分别分析HA和NA基因序列的同源性,进行动物回归试验确定该分离病毒对猪的致病力。结果显示,接种鼻拭子样品的SPF鸡胚尿囊液有凝集鸡红细胞的活性,经RT-PCR扩增出H3和N2目的基因片段,HA基因序列(HM765432)与A/swine/Korea/CAS07/2005(H3N2)(EU798791)的HA基因序列同源性为98%,NA基因序列(HM765434)与A/swine/Korea/CAS09/2006(H3N2)(EU798832)的NA基因序列同源性为98%,结果表明分离株为H3N2亚型SIV。动物回归试验结果显示,该分离病毒能够使80%猪发病,且与临床发病猪的症状类似,表明该分离病毒对猪具有较强的致病力,有望成为H3N2亚型SIV疫苗效力评价用效检病毒株。  相似文献