原始生殖细胞的人类ES细胞的分离克隆   总被引：6，自引：0，他引：6  

华进联  窦忠英  张若平  李松  李相运  雷安民  杨春荣  高志敏 《农业生物技术学报》2002,10(1):T001-T006

本研究收集47例4-13周龄人流产胎儿分离PGCs，采用与其生殖嵴/腺或类似物胎儿成纤维细胞共培养的方式，获得了具小鼠ES细胞或EG细胞特征的人类ES细胞，该类细胞在体外可自发分化为类胚体，成纤维细胞样细胞，神经胶质细胞样细胞及心脏跳动样细胞团等，同样方法自4例大于17周龄胎儿未观察到人类ES细胞，研究表明，采用共培养法可以从4-13周龄流产儿的PGCs分离克隆到人类ES细胞，最适宜胎龄为7-10周龄。  相似文献   

小鼠胎儿和牛睾丸成纤维细胞的冷冻保存   总被引：5，自引：2，他引：3  

安立龙  杨奇  窦忠英  雷安民  杨春荣  邱怀  高志敏 《西北农业学报》2000,9(3):5-8

研究了冷冻保护液、平衡时间、降温速度、解冻液以及解冻方式对冷冻小鼠胎儿成纤维细胞和牛睾丸成纤维细胞活力的影响。结果表明,对小鼠胎儿成纤维细胞和犊牛睾丸成纤维细胞进行冷冻,冷冻液Ⅱ（０．４％ＢＳＡ）＋１．５ｍｏｌ／Ｌ乙二醇＋０．１ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的ＰＢＳ液）的冷冻效果优于冷冻液Ⅰ（１０％的ＮＢＳ＋１０％ＤＭＳＯ的ＤＭＥＭ液）。用冷冻液Ⅱ对小鼠胎儿成纤维细胞和犊牛睾丸成纤维细胞进行冷冻,平衡时间可从２．  相似文献   

农村鸡病的防治     

杨春荣  李先尧  王芳 《云南农业科技》2011,(4):63-64

鸡病在农村散养条件下普遍发生,特别是传染病发病率占整个发病数的90%以上,因此,做好鸡病的防控工作显得极为重要。农村多依靠房前屋后的闲置小块空地、房屋空间建舍养鸡,多数农户是散养、放养,给疫病的防治带来很大的难度,从科学养殖角度讲,也不符合养殖规范要求。但限于客观条件,针对特殊养殖条件,只有健全各种防疫制度,推广实用可行的防治措施,才能把鸡病造成的损失控制在最小范围。  相似文献   

牛胚胎在小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的生长行为     

安立龙  杨奇  窦忠英  雷安民  杨春荣  高志敏 《中国农业科学》2001,34(6):667-671

 比较了牛胚胎与小鼠胚胎在体外培养过程中的生长行为，结果表明，牛滋养层细胞与内细胞团（ｉｎｎｅｒ ｃｅｌｌｍａｓｓ，简称ＩＣＭ）连接不紧密，其迅速增殖，形成半透明囊腔结构；小鼠胚胎滋养层与ＩＣＭ密切相连，形成盘状结构，并推移原代小鼠胎儿成纤维细胞（Ｐｒｉｍａｒｙ ｍｕｒｉｎｅ ｅｍｂｒｙｏｓｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＰＭＥＦ）饲养层。牛ＩＣＭ形态呈现多样性，表现为团状、条状、网状和混合型；小鼠ＩＣＭ形态单一，多呈圆盘状。体外培养的牛胚胎发育速度比小鼠胚胎迟缓，牛ＩＣＭ初次传代时间为胚胎体外培养开始后５～６ｄ，小鼠ＩＣＭ初次传代时间为胚胎体外培养后３～４ｄ。牛ＩＣＭ分化程度由小到大依次为团状ＩＣＭ、条状ＩＣＭ、混合型正 和网状ＩＣＭ。牛和小鼠胚胎附着率及ＩＣＭ克隆率由大到小均依次为孵化胚、囊胚和桑褡胚，但桑褡胚和囊胚附着率和ＩＣＭ克隆率均无显著差异（Ｐ＞０．０５）。与全胚相比较，牛和小鼠裸胚（无透明带或透明带不完整的胚胎）贴壁时间提前，但ＩＣＭ形成率和ＩＣＭ的生长行为均无显著差异；小鼠和牛桑椹胚卵裂球（中、晚期）体外分化抑制培养，形成亚囊胚而不能获得 ＥＳ细胞；剥离牛胚胎滋胚层细胞，ＩＣＭ细胞更易分化。  相似文献   

胎猪胰腺干细胞的分离与鉴定     

王赟  赵婷  乔海  杨春荣  张翊华  王华岩  窦忠英 《农业生物技术学报》2007,15(4):622-627

从胎猪胰腺分离得到一株细胞，该细胞经免疫组化检测表达PDX-1，GLUT-2，PCNA，Glucagon，somatostatin，polypeptide，弱表达nestin，目前细胞已传至58代。其在体外的生长行为有类似间充质干细胞样生长形态，经诱导后可分化为具有三维立体结构的类胰岛细胞团。成团后细胞强表达insulin、ck-19等标志，放免测定显示诱导成团后细胞胰岛素分泌量增加，显著高于未诱导细胞（P<0.05）。说明胰腺内存在着多潜能干细胞，本方法分离到胎猪胰腺干细胞，经诱导分化可形成有功能的胰岛样细胞团并释放胰岛素,有望为进一步研究异种胰腺干细胞移植治疗糖尿病提供材料。  相似文献   

草鱼BPI/LBP基因的克隆及特征研究          下载免费PDF全文

杨春荣  苏建国  黄腾 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2011,39(7):8-14

【目的】克隆草鱼杀菌通透性增加蛋白/脂多糖结合蛋白(Bactericidal permeability-increasing pro-tein/LPS-binding protein,BPI/LBP)基因的cDNA全长,分析其结构特征,研究其表达规律,为进一步探明其功能奠定基础。【方法】首先用同源克隆及快速扩增cDNA末端技术(RACE),克隆草鱼BPI/LBP基因的cDNA全长,然后用生物信息学方法分析BPI/LBP基因的结构特征,最后用半定量RT-PCR检测BPI/LBP基因在草鱼不同组织(血、脑、眼睛、前肠、中肠、后肠、鳔、鳃、头肾、中肾、心脏、肝胰脏、肌肉、皮肤和脾脏)中的表达模式。【结果】草鱼BPI/LBPcDNA全长1 568 bp,编码473个氨基酸,其中包括18个氨基酸组成的信号肽、BPI1结构域(BPI/LBP/CETP N-ter-minal domain)和BPI2结构域(BPI/LBP/CETP C-terminal domain)。该蛋白的分子质量为51 551 u,等电点为8.69。氨基酸序列同源性分析结果显示,草鱼与鲤鱼BPI/LBP的同源性最高(90%),其次为虹鳟(73%)、斑点叉尾鮰(73%)、香鱼(72%)等。在系统进化树中,草鱼BPI/LBP首先与鲤科的鲤鱼聚为一类。通过半定量RT-PCR分析可知,草鱼BPI/LBP基因在被检测的15个组织中都有表达,其中在鳃中的表达量最高,其次为头肾、中肾等。【结论】成功克隆了草鱼BPI/LBP基因的cDNA全长,该基因在草鱼体内不同组织中广泛表达。  相似文献   

利用成年母兔耳部皮肤上皮细胞生产克隆胚胎的研究          下载免费PDF全文

杨春荣  马霄飞  董书伟  刘淑娟  窦忠英 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2005,33(8):7-11

以成年母兔耳部皮肤上皮细胞为核供体,对家兔体细胞核移植技术中融合、激活以及不同来源受体卵母细胞的选择等环节进行了研究,比较了不同电场强度对重构胚胎融合率、分裂率的影响。结果表明,200V/mm电场强度时重构胚胎的融合率(82.53%)显著高于160V/mm(59.73%),但与240V/mm(79.56%)无显著差异;200V/mm时重构胚胎的分裂率(71.43%)显著高于160V/mm(49.43%)和240V/mm(57.80%)。来源于输卵管卵母细胞组成的重构胚胎的融合率(84.71%)和裂解数与来源于卵巢大卵泡(78.75%)的无显著差异;但来源于输卵管的重构胚胎分裂率(73.68%)显著高于来源于卵巢大卵泡的(56.35%)。将646枚2~4细胞期重构胚移植到38只同期化及非同期化的受体后无幼仔出生。  相似文献   

卵母细胞的激活   总被引：2，自引：0，他引：2  

杨春荣  窦忠英 《畜牧兽医杂志》2002,21(2):13-15

哺乳动物卵母细胞人工激活的方法、机理及激活时间进行总结，目前使用卵母细胞去核前人工激活的方法较多，去核后移核前激活的次之，移核后激活的较少。  相似文献   

牛卵泡卵母细胞的体外成熟培养   总被引：4，自引：0，他引：4  

雷安民  高志敏  杨春荣 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2002,30(4):95-97

1997- 12～ 2 0 0 1- 0 8共进行了 97批牛卵母细胞体外成熟试验 ,总成熟率为 70 .75 % (35 6 1/ 5 0 33)。其中培养液为 TCM199+0 .12 g/ L 丙酮酸钠 +10 mm ol/ L Hepes+体积分数 8% NCS+10 mg/ L FSH+10 mg/ LL H+1mg/ L E2 (培养液 1组 )组进行 5 0批试验 ,成熟率为 6 5 .75 % (14 15 / 2 15 2 )。培养液 1组有 5批次未添加 Hep-es 盐 ,其成熟率为 75 .2 1% (88/ 117) ;另 4 5批次添加 Hepes盐 ,成熟率为 6 5 .2 1% (132 7/ 2 0 35 )。培养液为TCM199+体积分数 8%发情牛血清 +0 .12 g/ L 丙酮酸 (培养液 2组 )组进行 4 7批次试验 ,成熟率为 74 .4 9%(2 14 6 / 2 881)。培养液 2组中有 9批次添加了 4 0 m g/ L 的庆大霉素 ,其成熟率为 72 .15 % (342 / 4 74 ) ;另 38批次未添加庆大霉素 ,其成熟率为 74 .95 % (180 4 / 2 4 0 7)。试验同时表明 ,激素来源对卵母细胞成熟率无显著影响  相似文献   

草鱼BAC文库中TLR3基因的筛选及表达特征的研究     

杨春荣  苏建国  张荣芳 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2010,38(6):83-87

【目的】从草鱼的BAC文库中筛选TLR3基因的阳性克隆,研究该基因在草鱼体内的表达规律,为进一步研究奠定基础。【方法】用同位素P32标记的探针,对53 216个BAC克隆以双份平行形式制备的DNA尼龙膜进行杂交筛选,用半定量方法检测TLR3在草鱼不同组织(鳃、心脏、肠、肝胰脏、肌肉、皮肤、脾脏、头肾和中肾)中的表达模式,用实时荧光定量RT-PCR研究草鱼感染呼肠孤病毒后不同时间TLR3的表达规律。【结果】获得了2个TLR3基因的阳性BAC克隆,该基因在被检测的9个组织中都有表达,其中在脾脏、皮肤中的表达量较高。在感染呼肠孤病毒后24 h,草鱼肝胰脏中TLR3的相对表达量显著升高(P0.05);感染后48 h,其相对表达量恢复到正常水平(P0.05)。【结论】成功筛选到草鱼TLR3的BAC克隆,该基因在草鱼体内不同组织中有广泛表达,并且参与了草鱼抗呼肠孤病毒的过程。  相似文献