猪干扰素α在昆虫细胞中分泌表达及其抗病毒活性检测   总被引：3，自引：1，他引：2  

王彦彬  崔保安  陈红英  王亚宾  张红英  魏战勇 《中国农业科学》2009,42(4):1435-1441

 【目的】为获得重组猪干扰素α。【方法】本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码成熟猪干扰素α基因插入供体质粒pFastBacⅠ多克隆位点,置于pH启动子控制下,昆虫可识别的蜂素信号肽（honeybee melittin signal peptide,HBM）取代猪干扰素α原有信号肽以实现分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化。将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。【结果】重组蛋白通过间接免疫荧光、Western-blot证明重组蛋白在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中获得分泌表达。通过在猪肾细胞（PK-15）上抑制水泡性口炎病毒（VSV）致病变作用检测重组蛋白的抗病毒活性,结果表明：昆虫细胞上清的抗病毒效价达到1.07×105 U?ml-1,昆虫细胞裂解液的抗病毒效价为3.15×104 U?ml-1。【结论】应用蜂素信号肽实现猪干扰素α在昆虫细胞上分泌表达,为临床上防治猪病毒性疫病奠定了基础。  相似文献   

板蓝根多糖对体外培养的猪脾脏淋巴细胞增殖及分泌细胞因子和NO的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

张红英  王亚宾  王学兵  陈红英  赵现敏  金钺  崔保安 《河南农业大学学报》2009,43(2)

用MTS比色法测定了不同质量浓度的板蓝根多糖对体外培养的猪脾脏淋巴细胞增殖的影响,分别用ELISA法和硝酸还原酶法测定了板蓝根多糖对猪脾脏淋巴细胞分泌IL-2,IL-4,IFN-γ和NO的影响.结果表明,板蓝根多糖能显著促进猪脾脏淋巴细胞的增殖.同时又能协同ConA或LPS诱导的猪脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05);能显著促进由ConA诱导的猪脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ,抑制IL-2的分泌,对IL-4分泌的影响不明显;低剂量板蓝根多糖能显著促进NO的分泌(P<0.01).  相似文献   

猪源肠球菌两种致病基因和表型的检测     

刘磊  崔保安  王亚宾  程金平  王中明  郭敏 《勤云标准版测试》2009,29(1)

为调查53株猪源肠球菌2种致病基因和2种表型的分布,应用聚合酶链反应检测53株肠球菌的2种致病基因,用50ml/L兔血平板和30g/L明胶平板检测β溶血和明胶溶解表型。检测结果表明,溶血素激活基因(cylA)明胶酶基因(gelE)为猪源肠球菌的主要致病基因;粪肠球菌2种致病基因和2种表型的检出率高于屎肠球菌;来源于新鲜猪肉中的粪肠球菌存在一定的致病力,提示注意食品卫生安全;在新鲜猪肉中检测到2株鸟肠球菌,基因型和表型检测说明其存在较弱毒力。  相似文献   

16S rRNA与Vitek-32对临床感染猪肠球菌鉴定结果比较     

王亚宾  崔保安  陈丽颖  张红英  程金平  刘磊 《勤云标准版测试》2009,29(6)

旨在利用两种常用的细菌分型方法对感染猪的肠球菌的鉴定结果进行比较和分析.将从河南洛阳、济源、许昌、南阳等地送检病猪体内分离的42株革兰阳性球菌纯培养后,分别用16S rRNA基因序列比较和Vitek-32全自动细菌鉴定系统进行鉴定.Vitek-32对42株分离茵中的34株鉴定到种的水平,分别是粪肠球茵(E.faecalis)10株、屎肠球菌(E.faecium)2株、铅黄肠球菌(E casseliflavus)22株;另有8株未成功鉴定.16S rRNA基因序列分析对42株分离菌成功的鉴定结果是为粪肠球菌12株,屎肠球菌30株.经比较发现,Vitek-32鉴定的10株粪肠球菌中除1株被16S rRNA鉴定为屎肠球菌外,其余9株均相同;Vitek-32鉴定的2株屎肠球菌与16S rRNA鉴定结果相同;Vitek-32鉴定的22株铅黄肠球菌除了1株被16S rRNA鉴定为粪肠球菌外,其余全部被鉴定为屎肠球菌;8株未能被Vitek-32鉴定的肠球菌被16S rRNA方法分别鉴定为粪肠球菌(2株)和屎肠球菌(6株).在感染猪的肠球茵分型鉴定中,Vitck-32对粪肠球菌鉴定结果与16S rRNA比较具有较高的一致性(75%);而对于屎肠球菌的鉴定结果与16SrRNA比较出现了较大的差异(93.3%).  相似文献   

零售鲜猪肉中肠球菌的鉴定与毒力基因检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

段志刚  王亚宾  胡惠  金钺  崔保安 《中国农学通报》2009,25(24):20-23

2007年～2008年间,分别从郑州市5个农贸市场鲜猪肉销售摊点采集了52份猪肉样品,经细菌分离得到30株疑似肠球菌,通过细菌形态学和培养特性的观察,并采用Vitek-32全自动细菌鉴定系统对其进行分析,最终鉴定为肠球菌,其中粪肠球菌(E. faecalis)16株、屎肠球菌(E. faecium)4株、铅黄肠球菌(E.casseliflavus)6株、鸟肠球菌(E.avium)2株、鹑鸡肠球菌(E. gallinarum )2株。药敏试验结果表明：肠球菌对呋喃妥因、万古霉素、替考拉宁和氨苄青霉素有较高的敏感性,对四环索、卡那霉素和红霉索的敏感性较低。经过对肠球菌6种公认的毒力基因cylA、gelE、efaA、ace、AS和esp的检测,发现分离株携带毒力基因不同,7号粪肠球菌携带6种,而12号屎肠球菌则全部为阴性,其它菌株则携带1～5种不等的毒力基因。  相似文献   

多重PCR检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的研究   总被引：3，自引：1，他引：2  

胡慧  贾艳艳  杨春华  王亚宾  陈丽颖  张红英  崔保安 《河南农业大学学报》2010,44(4)

根据GenBank上已发表的猪伪狂犬病毒(PRV)的gH基因、猪细小病毒(PPV)的VP2基因序列和猪圆环病毒2型(PCV2)的ORF2基因序列,设计合成了3对特异引物,分别建立了PRV,PPV和PCV2的单项PCR诊断方法;通过对扩增条件的筛选,建立了PRV,PPV,PCV2的复合PCR诊断方法,利用1次PCR反应,即可同时扩增PRV的355 bp,PPV的195 bp和PCV2 487 bp的特异性片段,而猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、正常细胞(PK-15)扩增结果均为阴性,对PRV,PPV,PCV2的最低检出量分别为100 fg,1 pg和10 pg的DNA.该方法适合对PRV,PPV和PCV2的联合检测和鉴别诊断.  相似文献   

当前河南省猪病流行现状研究与分析     

王自振  卢中华  王亚宾  陈丽颖  金钺 《河南畜牧兽医(综合版)》2001,22(12)

从去年冬天养猪形势好转后，养猪场、户受经济利益驱动，有的为引进良种，有的为增加头数，使猪只流动频繁，加之检疫不严，为各种疫病传播提供有利条件。进入２００１年６月份以来，我省自南向北（先驻马店后许昌），自东向西（先商丘后开封）在大范围猪群中（包括母猪、小猪、断奶猪、育肥猪）流行一种发病率高、死亡率低、药物治疗效果差的疾病。病的主要特征是：无论大小猪，体温普遍升高，食欲减少或废绝，少数母猪流产，仔猪皮肤发红，粪便干硬。剖检全身淋巴结肿大、多汁。肝肿大质脆紫红色，有的出现白色坏死灶。肺脏心叶、尖叶肝变…  相似文献   

羊源链球菌的分离鉴定及致病性研究     

杨霞  陈丽颖  张红英  王亚宾  金钺  王川庆 《河南畜牧兽医(综合版)》2008,29(19)

从洛阳偃师某羊场单纯性流产羊的胎儿与羊水中分离到一株球菌,通过动物试验、细茵的形态特性、培养特性、生化特性等进行检测,确定为羊链球菌.同时对该细茵的耐药性进行检测,该茵对头孢噻肟、头孢唑啉极敏感,可作为治疗该病的首选药.  相似文献   

青贮饲料腐败问题的成因与预防措施     

傅彤  王亚宾  李改英 《中国乳业》2013,(4):30-31

本文分析了导致青贮饲料在制作过程中腐败的原因,并给出了预防措施,以减少青贮过程中的损失和浪费。  相似文献   

不同肠球菌基因组DNA提取方法对PCR鉴定的影响     

张祥  李晓博  谷素美  段志刚  王亚宾  胡慧  陈丽颖 《河南农业大学学报》2012,46(1):67-71

为研究肠球菌基因组DNA的不同提取方法对16SrRNA基因序列PCR、种属多重PCR、RAPDPCR等肠球菌鉴定结果的影响,分别采用6种基因组DNA提取方法(水煮法1、水煮法2、常规酚/氯仿抽提法、chelex-100法1、chelex-100法2和试剂盒法),对1株肠球菌标准菌株ATCC29212基因组DNA进行提取,以这些分别提取的DNA为模板在相同的扩增条件下进行PCR检测.结果表明,在16SrRNA基因序列PCR和种属多重PCR检测中以水煮法1进行肠球菌DNA的提取最适宜,而试剂盒法在RAPDPCR检测中效果最佳.  相似文献