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[目的]本文旨在探索猪血管紧张素转化酶2(ACE2)在大肠杆菌中最佳表达条件和纯化蛋白的最佳方法。[方法]将已构建好的猪重组表达载体p ET-32a-ACE2转染至大肠杆菌BL21(DE3),通过改变IPTG诱导浓度以及诱导时间来对诱导表达条件进行筛选,实现目的蛋白高效表达后选用Ni~(2+)-NTA亲和层析和KCl染色切胶2种方法,对获得的重组猪p ET-32aACE2融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE和免疫印迹等分析鉴定表达产物。[结果]当IPTG浓度为1 mmol·m L-1、诱导时间为10 h时,ACE2蛋白在BL21(DE3)中表达量最高,以包涵体形式存在。表达产物的相对分子质量约为100×103,与预期目的蛋白大小相符。选用的Ni~(2+)-NTA亲和层析和KCl染色切胶2种方法纯化重组p ET-32a-ACE2融合蛋白包涵体,均能得到可溶性的重组蛋白,但KCl染色切胶法纯化获得的可溶性重组蛋白浓度及纯度都更佳,纯化蛋白经Western blot鉴定具有良好的抗原性。[结论]本试验建立猪p ET-32a-ACE2重组蛋白诱导表达的最佳条件:IPTG浓度1 mmol·m L-1,诱导时间为10 h。并且以KCl染色切胶法纯化该重组p ET-32a-ACE2融合蛋白包涵体效果更好。 相似文献
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以双低菜籽油为基料油，选用12-羟基硬脂酸、蜂蜡、葵花蜡、硬脂酰乳酸钠、单甘酯、豆甾醇、薯蓣皂素、肉桂酸作为凝胶剂，在不同浓度（2%，4%和6%，m/m）条件下制备菜籽油基凝胶油，通过持油率、流变特性测定、偏光显微镜、X-射线衍射和傅里叶红外等技术表征其物理特性及微观结构。经外观及持油率结果表明，除蜂蜡与肉桂酸以外，其余的凝胶剂均能在低浓度（2%）下形成稳定凝胶油，且当浓度为6%时，除薯蓣皂素与肉桂酸外，其他体系所形成的凝胶油持油率均能达到94%以上；经流变分析发现，12-羟基硬脂酸凝胶油G′值大且结构不易受外力而改变，豆甾醇形成的凝胶油热稳定性最好（相转变温度93.4°C）；微观结构结合红外分析表明，12-羟基硬脂酸在菜籽油中形成致密纤维状的网络结构，豆甾醇、薯蓣皂素在油中形成棒状晶体，而肉桂酸呈稀疏片状晶体，其他凝胶内部为小颗粒结晶，且凝胶油的晶型及晶体之间的作用力主要取决于凝胶剂的分子结构。 相似文献