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鸡白细胞介素-18(ChIL-18)重组蛋白的生物学活性检测 总被引：2，自引：0，他引：2
对含有鸡白细胞介素-18(ChIL-18)基因的质粒在大肠杆菌(Escherichia coli)内进行诱导表达,经亲和层析法对表达产物进行纯化,用微量细胞病变抑制法CEF-VSV系统,检测其对SPF鸡脾淋巴细胞诱导产生γ-干扰素(IFN-γ)的活性和其对病毒的抑制效果;用3H-TdR掺入法和MTT法分别检测其对T淋巴细胞诱导转化和NK细胞杀伤活性的作用。结果表明,经诱导表达出分子量44kD的目的蛋白(与GST融合表达),纯化后得到去除菌体蛋白的高纯度目的蛋白;该蛋白能够诱导脾细胞产生IFN-γ,当浓度为250ng/mL时诱导IFN-γ的活性最高,可达1×106U/mL;但该蛋白不能直接抑制水疱性口炎病毒(VSV)在鸡胚成纤维细胞(CEF)上生长;能够刺激淋巴细胞显著增殖,浓度为250ng/mL时效果最佳;适当浓度的rChIL-18蛋白能促进NK细胞的杀伤活性,浓度为150ng/mL时,作用最强。利用原核表达的重组鸡白细胞介素-18蛋白与天然鸡IL-18蛋白一样具有较广泛的生物学活性。 相似文献
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减蛋综合征病毒基因组HindⅢ酶切片段的克隆及酶谱分析 总被引：9，自引：0，他引：9
以ＰＵＣ１９质粒为载体,采用鸟枪法克隆减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）基因组的ＨｉｎｄⅢ酶切片段,用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ标记的ＥＤＳＶＨｉｎｇⅢ片段探针打点杂交,证实１３个克隆插入了ＥＤＳＶＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ片段。酶切分析结果表明,克隆到了Ａ、Ｂ、Ｆ、ＧＨ、Ｉ、Ｊ７个不同大小的片段,选取上述插入片段的、具有代表性的７个相应质粒ＰＵＨＡ、ＰＵＨＢ、ＰＵＨＦ、ＰＵＨＧ、ＰＵＨＨ、ＰＵＨＩ、ＰＵＨ 相似文献
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鸭疫里默氏杆菌病 ,原称鸭疫巴氏杆菌病 ,又名鸭传染性浆膜炎 ,是由鸭疫里默氏杆菌所致的一种接触性传染病。本病呈急性或慢性经过 ,以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪性输卵管炎和脑膜炎为特征。 2 0 0 0年 5～ 8月 ,山东省济宁、菏泽、泰安等地区的商品代肉鸭大量发生此病 ,造成了严重的损失。1 流行病学调查 2 0 0 0年 5～ 8月 ,山东济宁、菏泽、泰安的商品代肉鸭场相继发生一种传染病 ,主要发生于 1 0～ 40日龄的小鸭 ,大棚地面饲养 ,品种主要为樱桃谷商品代 ,发病率 2 0 %～ 80 % ,发病后抗生素控制疗效不佳 ,死亡率 1 5 %～ … 相似文献
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巢式PCR检测无乳链球菌16SrRNA方法的建立及应用 总被引：6，自引：0，他引：6
无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）引起的奶牛乳房炎主要表现为隐性型,需要通过实验室检查才能确诊。研究建立了一种特异、敏感和快速的巢式PCR方法用于检测奶样中的无乳链球菌。利用链球菌属（Sgeptococcus）16S rRNA基因的保守区设计通用引物作为链球菌属的阳性控制,在保守区内的可变区设计无乳链球菌特异的引物。研究结果表明,通过奶样中无乳链球菌的增菌培养,简便、快速提取DNA和特异性PCR反应,可以检测到奶样中1CFU／mL的无乳链球菌,可以用作牛群中无乳链球菌感染的早期流行病学调查。 相似文献
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将牛白细胞介素18(bovine interleukin-18,BoIL-18)的成熟蛋白基因亚克隆到原核表达载体pGEX6p-1中，并在宿主菌BL21（DE3）中进行表达；用BoIL-18在昆虫细胞中的表达产物制备的兔多克隆抗体作为一抗进行Western blot分析；采用亲和层析法，对表达产物进行纯化；利用MTT染色法研究重组BoIL-18（re BoIL-18）对牛外周血单核细胞(PBMC) 增殖的促进作用；采用双抗体夹心ELISA法研究reBoIL-18诱导脾淋巴细胞产生IFN-γ的情况；采用微量细胞病变抑制法检测reBoIL-18对VSV导致细胞病变的抑制作用。结果:得到了BoIL-18的高效表达产物，表达量为31.8％，Western blot 显示，在44KD处有一特异性条带；纯化后获得了纯度较高的reBoIL-18蛋白；纯化的BoIL-18对PBMC增殖具有明显的促进作用，并且能够促进IFN-γ的诱生和抑制VSV病毒的活性。 相似文献
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为了明晰不同林分类型下土壤活性有机碳含量和分布特征,以杨树纯林(Populus euramericana)、杨树-石楠(Photinia serrulata)混交林及杨树-女贞(Ligustrum lucidum)混交林3种林分类型为研究对象,测定了不同土层中(0～20cm、20～40 cm、40～60 cm和60～80 cm)土壤有机碳(SOC)、可溶性有机碳(DOC)、易氧化有机碳(ROC)和微生物生物量碳(MBC)的含量,分析其与土壤基本性质间的关系.结果表明:3种林分类型的不同土层中活性有机碳含量均存在显著性差异(P＜0.05),杨树-女贞混交林的DOC含量最高,其次为杨树纯林,杨树-石楠混交林最低;ROC含量在杨树纯林中最高,其次是杨树-女贞混交林和杨树-石楠混交林;杨树-石楠的MBC＞杨树纯林＞杨树-女贞混交林.不同活性碳组分含量均表现出随着土层增加而降低的趋势.其中,各林分类型0～20 cm层中DOC含量与其他各土层均存在显著性差异(P＜0.05);4个土层中的ROC均存在显著性差异(P＜0.05),且随着土层的增加,不同林分类型间的差异减小;3种林分类型的MBC含量在不同土层中显著性差异不一致.3种活性碳组分均与pH、蔗糖酶活性呈显著相关性(P＜0.05),其中DOC还受含水率、土壤团聚体平均粒径的影响,SOC和C/N也是ROC的重要影响因素,MBC亦与SOC呈显著正相关.研究发现,林分类型是影响土壤活性有机碳含量的重要因素,混交林改变了活性有机碳的分布特征.总体上,混交林活性有机碳含量占SOC的比例低于纯林,对土壤碳库稳定性具有积极影响. 相似文献
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将鸡白细胞介素18成熟蛋白(mature chicken interleukin 18,mChIL-18)基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),并在大肠杆菌中高效表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化重组蛋白,免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb),并通过间接ELISA、间接免疫荧光(IFA)和Western blot等方法对mAb做初步鉴定.结果表明,试验成功表达了mChIL-18蛋白,并获得2株持续且稳定分泌抗体的杂交瘤细胞(1G9、2E6),其腹水ELISA效价分别为1∶5.12×10 5和1∶3.2×104,亚类鉴定结果均为IgM.Western blot结果显示,2株单抗均能特异性识别原核表达的mChIL-18蛋白,IFA分析表明它们均能与真核表达的mChIL-18发生特异性反应,ELISA叠加试验证实1G9与2E6针对2个不同的抗原表位.本研究所获单抗可以用于建立鸡IL-18的检测方法,为进一步开展其生物学功能研究奠定了基础. 相似文献
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参照聚集因子A(Clumping factor A,ClfA)和牛白介素18(BoIL-18)cDNA序列分别设计引物进行扩增,将ClfA基因和BoIL-18基因分别插入到真核双表达载体pBUDCE4.1的CMV和EF-1α2个启动子的下游,构建携带2个目的基因的重组真核双表达载体pBUDCE/ClfA/BoIL-18。在Cellfectin Reagent的作用下转染293T细胞,用间接免疫荧光试验检测ClfA和BoIl-18蛋白。结果表明,重组质粒pBUDCE/ClfA/BoIL-18在293T细胞中同时表达了ClfA和BoIL-18蛋白。该重组载体的成功构建为研究ClfA和BoIL-18重组共表达产物的生物学活性及其防治奶牛金黄色葡萄球菌性乳腺炎的作用奠定基础。 相似文献
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