Dazl基因在绵羊不同发育期睾丸组织中的表达与细胞定位     

李讨讨  马友记  赵兴绪  高建锋  雒瑞瑞  陈灿灿  李东红 《农业生物技术学报》2018,(3)

类无精症缺失基因(deleted in azoospermia-like gene,Dazl)在雄性动物生殖细胞分化过程中起重要调控作用,但对于不同物种或处于不同发育阶段的同一物种而言,其调控机制存在差异。为了探讨Dazl在绵羊(Ovis aries)不同发育期睾丸组织中的表达、定位及调控作用,本实验选取0、2、5、12和24月龄健康的绵羊15只,每组3只,采取睾丸、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉组织。运用实时荧光定量PCR(quantitative Real time PCR,q RT-PCR)检测了0、2、5、12和24月龄绵羊睾丸组织及12月龄绵羊的不同体组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉)中Dazl m RNA的表达量,利用Western blot技术对Dazl基因编码蛋白的表达量进行检测,并采用免疫组织化学染色方法检测Dazl蛋白的阳性信号在不同月龄睾丸组织中的分布情况。结果显示,对于不同月龄睾丸组织,从m RNA和蛋白水平均检测到了Dazl基因的表达,并且二者的趋势基本相似。在0、2和5月龄睾丸中Dazl m RNA及蛋白表达量较低,12月龄中表达量较高且极显著高于0、2和5月龄(P0.01),而在24月龄中Dazl m RNA及蛋白的表达量均出现不同程度的下调现象。12月龄绵羊各组织的q RT-PCR检测结果显示,Dazl m RNA只在睾丸组织中高表达,在心脏中表达量很低,而在其他组织中不表达。免疫组织化学染色结果显示,Dazl蛋白在初情期前(0、2和5月龄)定位于睾丸间质细胞,而在12和24月龄定位于睾丸间质细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞。研究结果表明,Dazl基因在性成熟前公羊的睾丸间质细胞及成年羊的睾丸间质细胞、精母细胞和精细胞中表达,并且在他们的增殖过程中起调控作用。由此推测,在绵羊睾丸发育过程中,Dazl基因可能通过直接作用(调控精母细胞的成熟分裂)和间接作用(调控睾丸间质细胞的增殖)共同调控精子发生。本研究为进一步研究Dazl基因在雄性动物精子发生过程中的调控机制提供了科学依据和参考。  相似文献   

高等农业院校在文化大发展大繁荣中的历史使命     

陈映江  张新虎  赵兴绪  魏彦明 《中国农业教育》2012,(5):1-4

党的十七届六中全会将文化建设推向一个历史性的新高度。文化传承创新是高等学校的重要功能之一。在新的时代条件下,高等学校要以高度的文化自觉和文化自信勇于承担起推动社会主义文化大发展大繁荣的时代使命,努力建设社会主义文化强国。甘肃农业大学作为甘肃省惟一的高等农业院校,要不断优化专业结构,发挥学科专业优势,创新人才培养模式,开发优质课程资源,大力弘扬和传播农耕文明,为社会主义文化大发展大繁荣作出应有的贡献。  相似文献   

奶牛乳腺组织亚细胞组分的双向凝胶电泳分析     

王建锋  赵兴绪  张勇 《中国兽医学报》2010,30(12)

利用超速离心结合梯度离心法分离亚细胞组分的技术路线,以提高奶牛乳腺组织蛋白双向凝胶电泳的分离效率。奶牛乳腺组织液氮研磨破碎后,差速离心分离成细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体4个亚细胞组分,Nyco-denz纯化,2-DE分离蛋白,PDQUest8.0软件分析凝胶图谱。结果显示,奶牛乳腺组织细胞经亚细胞分离后,电泳分辨率大大提高,特别是细胞核蛋白质检出效率明显提高。不同亚细胞蛋白质组电泳图谱的差异显示了其蛋白质组构成的不同。由此可见超速离心结合梯度离心是一种有效的奶牛乳腺亚细胞组分分离手段,亚细胞蛋白质组学克服了蛋白质组的一些缺陷并可将蛋白质组研究引向亚细胞水平。  相似文献   

健康奶牛与临床型乳腺炎奶牛乳腺核蛋白组差异表达分析     

王建锋  赵兴绪  张勇  徐铁山 《畜牧兽医学报》2010,41(1)

亚细胞蛋白质组的优点在于对低丰度蛋白的研究,运用亚细胞蛋白质组学的研究策略,可以提高低丰度蛋白质在双向电泳中的检出数量.通过分析奶牛乳腺炎乳腺与正常乳腺核蛋白组差异表达情况,为奶牛乳腺炎发病机理研究寻找尽可能多的生物标记分子.经超速离心法分离细胞核,双向凝胶电泳分离蛋白,用PDQuest7.4软件分析寻找差异蛋白质斑点,高效液相色谱串联离子阱质谱鉴定蛋白质.从核蛋白组2-DE图谱中筛选出22个差异表达的蛋白质斑点,质谱鉴定出17个差异表达的蛋白质,2个蛋白质在乳腺炎发病过程中下调,7个上调,5个只在正常情况下表达,3个只表达在乳腺炎组织中,筛选出的差异表达蛋白质涉及细胞骨架构成、代谢调节及凋亡调控等许多方面.表明奶牛乳腺炎发生时乳腺组织核结构和代谢状态都发生了的变化.  相似文献   

绵羊精浆蛋白质组2-DE图谱的构建及初步分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

李鸿岩  赵兴绪  张勇  张红  王燕玲 《中国畜牧兽医》2011,38(4):127-131

本研究比较了丙酮沉淀法制备蛋白质不同上样量对绵羊精浆蛋白质二维电泳图谱的影响。结果显示,精浆总蛋白经SDS-PAGE电泳,得到分子质量在14.4~116 ku的28条蛋白质条带。二维电泳图经PDQuest 8.0分析,上样量为0.8、1.0、1.2 mg时检测出的蛋白质点分别为207±10、281±13和374±16个,分子质量基本分布在20~80 ku、等电点为4~9的区域内,随着上样量的增加,分子质量在20~80 ku的蛋白质点明显增多,但每个分子质量区间的蛋白质点所占的比率较为恒定。研究结果表明,采丙酮沉淀制备精浆蛋白结合合适的上样量能够建立绵羊精浆全蛋白质图谱,为进一步研究绵羊精浆蛋白质组学奠定基础。  相似文献   

绵羊精子冻融前后差异蛋白质组学研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

李鸿岩  赵兴绪  张勇  贺钰垣  杨永新 《中国农业科学》2011,44(24):5092-5099

 【目的】检测和分析绵羊精子冻融前后的差异蛋白质。【方法】用二维凝胶电泳分离精子蛋白,凝胶用考马斯亮蓝染色,用PDQuest8.0软件检测分析差异蛋白质斑点并经液相色谱串联离子阱质谱鉴定。【结果】鲜冻精凝胶图谱分析后得到 14个差异蛋白斑点,在国际生物信息学中心数据库搜索到相对应的5种蛋白质：推定的热休克蛋白70.1、转录因子AP-2α蛋白、烯醇酶、烯醇酶1和血清白蛋白前体。在解冻精子中,推定的热休克蛋白70.1、烯醇酶和烯醇酶1含量减少,转录因子AP-2α蛋白含量增加,血清白蛋白前体来源于精浆。【结论】绵羊精子经冷冻、解冻后,蛋白质存在差异,对差异蛋白质的研究有利于探索绵羊精子在冷冻过程中的生理状态,为进一步研究绵羊精子蛋白质组学及揭示精子冻伤机理提供依据。  相似文献   

16S-23S rDNA间隔区在奶牛乳房炎诊断中的应用   总被引：8，自引：0，他引：8  

曹随忠  杜立新  赵兴绪 《中国畜牧兽医》2005,32(2):26-27

以16S-23S rDNA间隔区为扩增靶序列的PCR技术是近年来发展的细菌分类和鉴定新方法，具有快速、敏感和特异性高的优点。作者综述了细菌16S-23S rDNA间隔区序列的特性及其在奶牛乳房炎病原诊断中的应用等研究进展。  相似文献   

奶牛阴性乳房炎诊断方法的比较     

赵兴绪  洪惠荣 《甘肃农业大学学报》1983,(4)

对武威某奶牛场43头成年母牛的172个乳区的乳汁,进行了体细胞计数。LMT检验,氯化物含量测定,沉淀试验等十种方法的检验。结果表明,与细菌学检查的符合率以氯化钙凝乳试验为最高(17.14％);阳性检出率以体细胞计数法为最高(55—71％),该法与细菌学检查的符合率也较高(62.86％);沉淀试验与氯化钙凝乳试验一样准确,与细菌学检查的符合率为70.00％,而且方面简便易行,可试用于阴性乳房炎的诊断。  相似文献   

奶牛乳腺组织蛋白质样品的制备及2-DE图谱分析     

杨永新  陶金忠  张勇  曹随忠  赵兴绪 《畜牧兽医学报》2007,38(8):846-850

本研究以奶牛乳腺组织为对象,采用了普通离心、超速离心、2-D clean-up kit和TCA/丙酮沉淀方法制备蛋白质样品,经二维凝胶电泳(2-DE)获得蛋白表达图谱。根据凝胶图谱上蛋白质斑点判断图谱的质量,并运用PDQuest7.4软件分析图谱。结果显示:普通离心法制备的蛋白样品的凝胶图谱蛋白质斑点较为清晰,但横向条纹较多;超速离心法纯化蛋白样品的图谱,蛋白斑点清晰且可检测到较多的斑点;TCA/丙酮沉淀和2-D clean-up kit方法纯化蛋白样品的凝胶图谱条纹减少,蛋白斑点清晰,但可检测到的斑点数量有所减少。研究表明,超速离心方法纯化的蛋白质样品适合建立奶牛乳腺组织的蛋白质表达图谱。  相似文献   

PPRV受体信号转导淋巴细胞激活分子V区功能蛋白的表达及活性分析     

王耀杰  吴锦艳  陈妍  王光祥  尚佑军  赵兴绪  张勇 《中国兽医学报》2018,(7)

信号转导淋巴细胞激活分子(SLAM)是小反刍兽疫病毒(PPRV)感染宿主的主要细胞受体,其N端V结构域的表达活化可以启动PPRV的入侵感染。本试验选用Slam/V结构域作为功能靶标进行表达,并分析其活性。分离山羊外周血淋巴细胞,提取其基因组RNA,应用RT-PCR方法扩增山羊SLAM/V基因,构建原核表达载体pGEX-6P-1/Slam/V。将获得的重组质粒pGEX-6P-1/Slam/V转化BL21(DE3)感受态细胞,通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和验证。结果显示,IPTG诱导浓度为0.1 mmol/L、37℃,诱导14h时,靶标蛋白表达量最高,融合蛋白相对分子质量约为39 800,且主要以包涵体形式存在。经山羊抗人SLAM蛋白多克隆抗体识别鉴定,证实其具有良好的免疫反应活性。本试验为建立稳定表达山羊SLAM/V功能区的阳性细胞克隆及PPRV侵染路径研究奠定了基础。  相似文献