牛PS ME1基因的电子克隆与序列分析     

曹随忠  李宏滨  姚学萍  赵兴绪  杜立新 《甘肃农业大学学报》2007,42(3):24-27

电子克隆是基因克隆的新策略.以人类PSME1基因完整编码序列(NM_006263)为种子序列电子克隆了牛PSME1基因完整编码序列.以奶牛外周血白细胞cDNA为模板,根据电子克隆序列设计引物进行RT-PCR验证,PCR产物克隆入质粒载体,阳性克隆测序得到的序列与电子克隆序列一致,已被GenBank收录,序列号为DQ010410.该基因最大开放阅读框34~783 bp,编码249个氨基酸,预测其编码的蛋白分子量为28.66 kD,等电点5.87.  相似文献   

双峰驼精清诱导排卵活性因子的阴离子交换柱Q Hyper D层析分离及生物活性鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

李喜龙  赵兴绪  陈北亨 《畜牧兽医学报》2002,33(3):226-229

利用阴离子交换柱QHyperD对双峰驼精清进行分离 ,大鼠垂体组织培养及母驼肌注活性组分 ,RIA法测定垂体组织培养液和母驼血浆中LH及FSH的浓度。实验结果表明 ,驼精清经QHyperD柱层析后 ,共得到 6个组分 (F1～F6 ) ,其中F3和F5在大鼠垂体组织培养实验中具有生物活性 ,可引起LH的明显释放 (P <0 .0 5 )。在体实验时给卵巢上有成熟卵泡的母驼分别肌注F3或F5 ,肌注后 5～ 7h ,LH的释放也明显增加 (P <0 .0 5 )。F3可引起母驼发生排卵 ,F5则不能 ,说明F3可能就是驼精清中的诱导排卵活性因子或其成分之一。另外 ,无论是F3或是F5 ,在体内外实验中均未能引起FSH的分泌发生显著变化  相似文献   

奶牛乳房炎抗性基因的反向Northern斑点杂交差异筛选     

曹随忠  李宏滨  姚学萍  王爱华  赵兴绪  杜立新 《家畜生态》2007,(3)

分别用地高辛标记患乳房炎奶牛和健康奶牛外周血白细胞cDNA探针,对已构建的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库应用反向Northern斑点杂交技术进行差异筛选,筛选出的50个差异表达克隆测序后获得48个EST序列。根据在GenBank非冗余核酸数据库(nr)和EST数据库中Blastn序列比对结果,将这些EST分为3类:第一类代表已知基因,共35个;第二类代表已知EST,共5个;第三类为新EST,共3个。35个代表已知基因的ESTs按照基因功能分为八类:信号转导与细胞间通信(8.57%)、细胞结构与运动(11.43%)、细胞凋亡(5.72%)、细胞与机体防御(20.00%)、物质转运(8.57%)、翻译与表达调控(20.00%)、代谢(14.20%)及其它(11.43%)。结合相关文献初步探讨了部分患乳房炎奶牛外周血白细胞差异表达基因的功能和意义,其中BNBD5、IgJ、MIP-3、MnSOD、AHCY、WIP等基因可能在奶牛乳房炎抗性中发挥重要作用。  相似文献   

不同生理状态乳牛卵巢卵母细胞基因的差异表达     

张进隆赵兴绪  陶金忠杨永新 张勇 《中国兽医科技》2008,38(2):151-154

为了研究不同生理状态下的卵巢卵母细胞基因的表达情况，采集乳牛的卵巢，分离了卵母细胞，以单个卵母细胞的mRNA作为模板，用设计的随机引物和锚定引物，采用一步法RT-PCR扩增了卵母细胞基因。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，发现有功能黄体和无黄体卵巢卵母细胞基因的电泳条带之间无明显差异，对一条明显差异条带进行回收、纯化，将纯化的PCR产物连接到T载体，阳性克隆经鉴定后，进行测序和同源性比较。结果显示，与体外培养的牛早期胚胎的一条序列具有很高的同源性。  相似文献   

绵羊松果体及生殖轴系褪黑素受体MT1的克隆     

张勇  朱家桥  李发弟  马友记  赵兴绪 《中国兽医学报》2009,29(11)

采用RT-PCR技术从绵羊松果体、下丘脑、垂体及卵巢组织中克隆到褪黑素受体MT1基因,扩增序列全长650 bp.同源性分析表明与GenBank中已知序列的同源性均达到99%,证明这些组织存在MT1基因的mRNA表达.序列分析发现绵羊下丘脑、垂体和卵巢组织中的基因序列为Mella α基因,而松果体组织中的基因序列为Mella β基因.绵羊卵巢组织中存在有MT1褪黑素受体,暗示褪黑素可能直接作用于绵羊卵巢,参与生殖功能的调节.  相似文献   

急性期蛋白及其在奶牛乳房炎发展中的作用   总被引：1，自引：1，他引：0  

伍涛  刘莉莉  杜然华  王映权  彭长江  赵兴绪 《中国奶牛》2010,(3):30-33

急性期蛋白(Acute Phase Protein,APP)属于血液蛋白的一种,检测其水平可作为一种估计动物机体对疾病的先天性免疫反应的方法。当炎症、感染和创伤发生时,动物血清急性期蛋白浓度会增加或减少25%以上,它可以作为判断预后、评价治疗效果、衡量动物健康和诊断疾病方面的定量标记物。就像直肠温度一样,虽然不能对疾病进行特异性诊断,而且影响因素较多,但在机体受到病理损伤时,却具有极高的敏感性。当奶牛发生乳房炎时,可以分析其血清和乳汁中急性期蛋白的水平,监督乳房组织的炎症状态。  相似文献   

亚细胞蛋白质组学研究进展     

王建锋  赵兴绪 《甘肃农业大学学报》2009,44(2)

亚细胞蛋白质组是蛋白质组学研究的新领域,是目前研究疾病发病机理的有效手段,研究的主要内容包括亚细胞结构的分级分离、纯化以及蛋白质组分析,目前几乎所有的亚细胞结构的蛋白质组学研究都有报道.本文就快速发展的亚细胞蛋白质组学以及揭示的生物学意义作以综述.  相似文献   

绵羊卵泡液蛋白质组2-DE图谱的构建及初步分析     

徐铁山  张勇  李鸿岩  林雍峰  赵兴绪 《湖南农业科学》2010,(7):149-151

为了获得绵羊卵泡液蛋白质组表达图谱,采用2-Dclean-upkit法和热的SDS直接裂解法制备卵泡液蛋白质样品,进行双向凝胶电泳,运用PDQuest8.0对图谱进行初步分析,最后与血浆蛋白质表达图谱做初步对比。结果显示：热的SDS直接裂解法处理的蛋白质样品图谱蛋白质斑点较多,更能真实反映卵泡液蛋白质组的全貌;卵泡液蛋白质图谱与血浆蛋白质图谱匹配率达75.62%。研究表明,热的SDS直接裂解法处理蛋白质样品效果较好;卵泡液蛋白质成分与血浆蛋白质成分比较相似,可以用处理血浆样品的方法来优化处理卵泡液蛋白质样品。  相似文献   

一种简单有效的提取外周血白细胞总RNA的方法     

曹随忠  姚学萍  赵兴绪 《安徽农业科学》2008,36(14):5786-5787

[目的]介绍了一种提取动物外周血白细胞总RNA的方法。[方法]对从健康奶牛和患病奶牛中分离的外周血白细胞,采用RNAlater样品储存液进行保存。采用RNAultra总RNA提取试剂盒提取白细胞总RNA,检测其浓度和纯度,并通过RT-PCR进一步检测其质量。[结果]提取总RNA中28 S和18 SRNA条带清晰,比例适当,OD260/OD280为1.8～2.0。以提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的牛G3PDH基因序列,未见非特异性产物。采用该方法提取的总RNA质量好、纯度高,能满足cDNA文库构建、分子克隆和基因表达等研究的需要。[结论]该方法具有简单有效、实用性强和重复性好的特点,值得广泛应用。  相似文献   

奶牛GV期卵母细胞OPS法和GMP法超低温冷冻效果     

王珂  郭海龙  桑国俊  赵兴绪 《动物医学进展》2009,30(3)

采用OPS管和GMP管对GV期的牛的卵母细胞进行玻璃化冷冻.在不同的前处理液中平衡5 min,然后在冷冻液(EFS30,EFS40,EDFS30或EDFS40)中平衡30 s,进行OPS法和GMP法玻璃化冷冻保存.结果显示,OPS法用EFS40液和EDFS40液冷冻后形态正常卵率为69.6%和76.1%,2组差异显著(P<0.05),成熟率最高达19.2%和33.3%,2组差异显著(P<0.05);GMP法用EFS40液和EDFS40液冷冻后形态正常卵率最高达75.6%和80.8%,2组差异显著(P<0.05),成熟率最高达15.6%和34.9%,2组差异显著(P<0.05).而采用EDFS40液,OPS法和GMP法对GV期卵母细胞体外发育的影响差异均不显著,但GMP法的冷冻效率较高.表明采用EDFS40液GMP法对GV期卵母细胞的冷冻效率优于OPS法.  相似文献