CRISPR/Cas13d介导猪胎儿成纤维细胞SUV39H1/SUV39H2基因敲降     

毕登峰  王煜  姚婧  赵建国 《中国畜牧兽医》2021,48(6):1957-1966

研究旨在利用CRISPR/Cas13d系统对猪胎儿成纤维细胞（PEF）中的胚胎发育相关基因SUV39H1/SUV39H2进行RNA水平的敲降，从而在猪上建立CRISPR/Cas13d介导的基因敲降系统。根据SUV39H1、SUV39H2基因的编码序列各设计3个靶向编码链的sgRNAs，并以单链寡核苷酸的形式合成，退火后与BspQⅠ线性化的sgRNA表达载体进行连接，构建SUV39H1-sgRNA和SUV39H2-sgRNA表达载体，用Sanger软件进行测序；将Cas13d表达载体和靶向SUV39H1/SUV39H2基因的sgRNA载体按照1∶1、1∶2、1∶4、2∶1和4∶1比例转染猪胎儿成纤维细胞，48 h后收集细胞，用流式细胞术分选检测细胞转染效率，用半定量PCR和实时荧光定量PCR检测敲降效率；用半定量PCR和免疫荧光检测敲降SUV39H1/SUV39H2基因后，靶基因转录水平及组蛋白H3K9me3水平的变化。测序结果表明，针对2个基因设计的各3条sgRNAs均成功连入载体中；流式细胞术分选结果显示，转染效率约70%；半定量PCR结果表明，与对照组相比，3个sgRNAs均极显著降低了SUV39H1和SUV39H2基因的表达（P<0.01），其中SUV39H1-sgRNA-2和SUV39H2-sgRNA-1均可使SUV39H1和SUV39H2的表达降低50%；Cas13d∶sgRNA为1∶1、1∶2和1∶4组细胞的存活率高于2∶1和4∶1组；实时荧光定量PCR结果表明，Cas13d∶sgRNA为1∶2、1∶4、2∶1和4∶1组敲降效率均显著高于1∶1组（P<0.05），且Cas13d∶sgRNA为1∶2组敲降效率最高（70%）。半定量PCR结果显示，转染SUV39H1-sgRNA-2和SUV39H2-sgRNA-1极显著降低SUV39H1和SUV39H2的表达，表达量为对照组的25%~30%（P<0.01）。免疫荧光检测结果表明，敲降SUV39H1和SUV39H2基因后，组蛋白H3K9me3水平显著降低（P<0.05）。因此，本研究利用CRISPR/Cas13d系统在猪胎儿成纤维细胞中成功敲降SUV39H1和SUV39H2，并下调其催化的H3K9me3水平。  相似文献   

Influence of TiCN/Fe metal ceramic coating by reaction nitrogen arc cladding on wear resistance of agricultural tools     

赵建国  李建昌  郝建军  马跃进  冯宪琴 《农业工程学报》2012,28(23):84-89

针对农业刀具易磨损、失效频繁的现状,采用TXⅡ500型TIG焊机,以工业纯氮作为反应气体和保护气体,利用反应氮弧熔覆技术在表面预涂工业钛粉和石墨粉的Q235试件上成功制备了TiCN/Fe金属陶瓷复合涂层。利用扫描电镜、XRD射线衍射仪、显微硬度计着重分析了熔覆速度对涂层形貌、涂层物相、涂层显微硬度的影响,并与农业刀具进行了耐磨对比试验。结果表明：熔覆速度较小时涂层表面成形良好,但涂层中TiCN含量低、涂层硬度小;随着熔覆速度的增加,涂层表面成形变差,但涂层硬度增大。涂层近表层显微硬度最高可达HV0.5 1089,约是Q235硬度的3倍多,与农业刀具常用材料65 Mn相比,磨损量仅为65 Mn的1/2,涂层有较好的耐磨性。  相似文献   

早春甘蓝套种玉米高产栽培技术     

丁莉  赵建国  刘娟 《蔬菜》2014,(1):56-57

早春甘蓝套种玉米一年两种两收高产栽培技术是宁夏中宁县产业结构调整的有效途径,在解决黄河来水偏少,节省水资源,提高复种指数,增加农民效益等方面发挥着重要作用。  相似文献   

深松作业深度检测方法研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

卢祺  王安  赵建国  郝建军 《农机使用与维修》2017,(7):6-7

作为一项重要的保护性耕作技术,深松整地对于改善耕地质量、提高作物产量意义重大。深松深度是评价深松作业质量的一个重要指标。对目前常用的深松作业深度检测方法基本原理进行分析,并对其优缺点进行了对比。  相似文献   

种蛋管理的细节控制     

赵建国 《中国禽业导刊》2014,(14):76-77

随着畜牧业综合生产能力目益凸显，带动作用明显增强的情况下，众多养殖场不断扩大，致使市场竞争日益加剧，要想在如此激烈的竞争中利于不败之地，产品质量尤为重要。  相似文献   

反应氮弧熔覆TiN/Fe基涂层及耐磨耐蚀性能     

马璐萍  张旭  赵建国  李建昌  郝建军  马跃进 《河北农业大学学报》2017,40(2)

为了提高农业机械入土部件表面性能,采用氮弧熔覆技术在45钢表面反应合成了TiN/Fe金属陶瓷复合涂层。利用扫描电镜、XRD射线衍射仪、显微硬度计、摩擦磨损试验机、电化学工作站分析了涂层形貌、涂层物相、涂层显微硬度及其耐磨耐蚀性能。结果表明:涂层主要由TiN、Fe组成,TiN呈颗粒状,涂层为良好的冶金结合;与45钢相比,涂层硬度提高了约3倍;磨损量降低了约1/2;在3.5%NaCl溶液和5%H2SO4溶液中,45钢的腐蚀速率分别约为TiN涂层的3倍和2倍,TiN涂层具有较好的耐磨耐蚀性能。  相似文献   

可以自疗治愈的几种病     

赵建国 《农村新技术》2006,(9):47

一、下颌脱落每日早晚用两手食指尖按摩耳前颌关节挂钩下凹处肌肉,正旋50次,反旋50次。坚持按摩1周。平常不要养成闲时以手撑下颔的不良习惯。本人的下颌频繁脱落就是采用上法治愈的。  相似文献   

用奶山羊改良贵州本地山羊效果好     

赵建国 《农技服务》2006,(9):29-29

用吐根堡奶山羊做父本,杂交改良贵州本地山羊,基础母羊头胎(一代杂交羊)平均体重达27.5公斤,最重为32公斤;一代杂交公羊8月龄平均体重达28.7公斤(不饲喂精料);二代杂交羊3月龄平均体重达17公斤,最重为21公斤。经过2年的实践,笔者认为用奶山羊杂交改良贵州本地山羊,除了和杂交波  相似文献   

碱基编辑器介导的猪IGF2基因高效定点突变     

王煜  宋瑞高  赵建国  王彦芳 《中国畜牧兽医》2020,47(11):3427-3435

本研究旨在利用碱基编辑器在巴马猪胎儿成纤维细胞（porcine fetal fibroblast cells,PFFs）中对生长性状相关基因胰岛素样生长因子2（insulin-like growth factor 2,IGF2）进行高效、精确的定点编辑。通过PCR扩增和测序对巴马猪和大白猪的IGF2基因序列进行鉴定,构建靶向巴马猪的sgRNA-IGF2表达载体,进而通过细胞转染、混合细胞编辑效率检测、单克隆细胞筛选及基因型鉴定等技术手段研究不同碱基编辑器对猪IGF2基因靶点的编辑效率及突变类型。结果显示,巴马猪和大白猪IGF2基因第3内含子存在第3 072 bp处的单核苷酸多态性（SNP）位点,设计靶向巴马猪IGF2基因的单链寡核苷酸序列。单链寡核苷酸经退火后与BsaⅠ线性化的pGL3-U6-sgRNA质粒进行重组连接,构建sgRNA-IGF2表达质粒,重组质粒测序结果表明,sgRNA序列已经精确连入U6启动子和sgRNA骨架之间。将rA1-BE3、hA3A-BE3、hA3A-BE3-Y130F和hA3A-eBE-Y130F 4种胞嘧啶碱基编辑器分别与sgRNA-IGF2表达质粒共转染至猪胎儿成纤维细胞中,对混合细胞编辑效率进行检测结果表明,对于IGF2基因靶点,hA3A-BE3系列碱基编辑器C到T的编辑效率显著高于rA1-BE3（P<0.05）。流式分选、单克隆细胞培养及鉴定结果表明,虽然有71.43%的hA3A-BE3单克隆细胞已被编辑,但有42.86%的细胞存在插入和缺失（indels）;hA3A-BE3-Y130F和hA3A-eBE-Y130F的编辑效率（56.86%和40.38%）虽低于hA3A-BE3（71.43%）,但是indels的效率也较低（31.37%和21.15%）。测序结果分析表明,利用碱基编辑器高效筛选到IGF2基因靶点纯合点突变的单克隆细胞。碱基编辑器作为新的基因编辑工具,可以对猪基因组中与经济性状关联的SNP位点进行高效、精确的基因修饰,为加速猪经济性状的遗传改良提供理论与实践基础。  相似文献   

硅、钙对花生新品种郑农花9号的生育及产量的影响     

陈华乔旭  史芹赵建国  张果果 《中国土壤与肥料》2011,(6):54-57

以花生品种郑农花9号为材料进行硅、钙基肥试验,基施硅钙镁肥、高效硅肥、钙肥,探讨硅、钙元素对花生生长及产量的影响。结果表明:3种肥料均可使花生茎秆粗壮、生长旺盛、抗逆性增强,病害发生率降低;硅钙镁肥使花生出苗期提前2 d,出苗率、单株结果数优于钙肥和高效硅肥。所有处理荚果产量增产41.7～717.0kg/hm2,增产幅度0.85%～14.7%。钙肥对花生产量构成因素的影响最大,第一对侧枝的平均长度最长,单株饱果数平均11.15个,平均百果重273.25 g、百仁重117.25 g,出米率和单株饱果数都是最高,钙肥的平均单产为5 386.01 kg,其3个处理增产极显著,硅钙镁肥的平均单产为5 260.95 kg,其两个处理增产极显著,高效硅肥的平均单产为5 190.08 kg。含钙的肥料组合较之无钙的肥料对产量及其构成因素的影响显著,更为可靠。  相似文献