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猪瘟（Hogcholera）是由猪瘟病毒引起的一种热性高度接触传染性疾病，各个年龄阶段的猪群，不分品种对该病均易感，目前仍然是危害我国养猪业的主要传染病之一。猪瘟病毒只有一个抗原型，但是研究证明，猪瘟病毒存在血清学变种，包括强毒株、弱毒株和引起慢性猪瘟的低毒力毒株。我国研制的兔化猪瘟弱毒苗有效地控制了猪瘟的大面积流行。但是近年来，猪瘟的流行形式、发病特点和病理变化都发生了变化，主要表现为非典型猪瘟。非典型猪瘟给兽医工作者控制该病提出了挑战。本研究分别应用猪瘟弱毒、强毒单抗纯化的酶联抗原建立的间接ELISA诊断试剂盒， 相似文献
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目前狂犬病疫苗的效力检验采用NIH法,需要使用狂犬病毒强毒株进行攻毒试验,具有一定的生物安全风险。为建立检测小鼠血清抗体效价的间接ELISA方法,代替NIH法中的脑内攻毒试验,扩增狂犬病毒（RV）G蛋白基因,并将其克隆至大肠杆菌pET-32a载体上进行表达。以该蛋白作包被抗原,摸索试验条件,建立检测小鼠血清抗体效价的间接ELISA方法。使用此方法与国际公认的荧光抗体病毒中和试验（FAVN）法比较,两者检测结果曲线相关系数为0.986,表明两者相关性较好,但ELSIA方法更加快捷、简便。本试验建立的间接ELISA方法可用于检测小鼠血清中狂犬病抗体,为狂犬病疫苗效力检验替代方法的建立提供了基础。 相似文献
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为获得产气荚膜梭菌ε毒素(ETX)的重组突变体,并评价其毒力及免疫原性。对已知的D型产气荚膜梭菌ETX编码基因进行优化设计,并将第106位组氨酸突变为脯氨酸,经人工合成获得基因片段GETXH106P。将GETXH106P克隆至原核表达载体p ET30a(+),转染BL21(DE3)菌中进行表达与纯化,从而获得重组蛋白r ETXH106P。利用Western blot方法检测r ETXH106P与D型产气荚膜梭菌抗血清的反应性,并检测其对犬肾细胞系(MDCK细胞)以及小鼠的毒力。随后,将r ETXH106P与Montanide ISA 201佐剂混合乳化制备疫苗,免疫4只健康家兔,按照《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测一免及二免后兔血清的中和抗体效价。结果表明,r ETXH106P为可溶性表达,通过灰度扫描,其可溶性表达量比例可达30%;该重组蛋白能与D型产气荚膜梭菌毒素抗血清反应;细胞毒性试验结果显示,100μg/m L的重组蛋白仍无细胞毒性;小鼠安全性实验结果显示,6.25×106ng/kg剂量的重组蛋白对小鼠仍无致死性;每毫升的一免抗血清可中和450~700个最小致死量(MLD)、二免抗血清可中和3000~4000个MLD的D型产气荚膜梭菌毒素;用1 MLD的D型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔4/4死亡,免疫组家兔4/4保护。以上结果表明,产气荚膜梭菌r ETXH106P重组蛋白毒力基本消失,且保留了良好的免疫原性,是D型产气荚膜梭菌病基因工程亚单位疫苗的理想候选抗原蛋白。 相似文献
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本研究旨在获得产气荚膜梭菌α毒素（CPA） C末端（第247－370位氨基酸,CPAC）三拷贝串联融合蛋白,并评价其免疫原性。对已知的A型产气荚膜梭菌CPAC编码基因（GenBank登录号：AY823400.1）进行优化设计,以同向串连的方式串联成三拷贝基因（GCPAC3）,片段之间用柔性氨基酸linker （GGGS）连接,经人工合成后克隆至原核表达载体pET-30a （＋）中进行表达与纯化,获得CPAC的三拷贝重组蛋白（rCPAC3）。利用Western blotting方法检测rCPAC3与A型产气荚膜梭菌毒素抗血清的反应性。将rCPAC3与Montanide ISA 201佐剂混合乳化制备疫苗,免疫4只健康家兔,检测一免及二免后兔血清的中和抗体效价。在二免21 d后,对家兔经耳缘静脉注射1个家兔最低致死剂量（MLD）的A型产气荚膜梭菌毒素,检测rCPAC3对家兔的免疫保护效果。结果显示,rCPAC3主要以包涵体的形式表达,且能与A型产气荚膜梭菌毒素抗血清反应;每毫升的一免抗血清可中和30~50个、二免抗血清可中和70~100个小鼠MLD的A型产气荚膜梭菌毒素。采用1个家兔MLD的A型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔100%（4/4）死亡,免疫组得到了100%（4/4）的保护。以上结果说明,rCPAC3具有良好的免疫原性,为A型产气荚膜梭菌病基因工程疫苗的研制提供了重要的试验数据。 相似文献
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参照GenBank中巴氏杆菌外膜蛋白H(ompH)基因核苷酸序列,设计了一对特异性引物,通过PCR方法,扩增了3株不同毒力猪源巴氏杆菌CA4-1株、679-230株、3397A株ompH全基因.PCR产物克隆至pMD18T载体,进行序列分析,发现3个菌株ompH基因完整的ORF大小分别为1008 bp、1008 bp和1047 bp,分别编码336、336、349个氨基酸,它们的前20个氨基酸均组成信号肽.与已知的15个Heddleston血清型的核苷酸及其推导的氨基酸序列比较,核苷酸同源性在83.3%～99.8%,氨基酸同源性在79.2%～99.4%.序列分析结果表明,ompH基因在不同血清型之间具有较高的同源性. 相似文献
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化肥减施配施微生物菌剂对鲜食玉米生长和土壤肥力的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
本试验研究了化肥减施配施EM微生物菌剂对鲜食玉米产量、品质和土壤肥力的影响。共设置不施加任何肥料和菌剂（CK）、全量化肥（依据当地化肥施用量，CF）、减施40%化肥（RCF）、减施40%化肥和灌施加喷施EM菌剂（RCF+EM）、减施40%化肥和灌施加喷施清水（RCF+W）5个处理。结果表明，RCF+EM处理的玉米产量高于CF处理，但未达到显著水平；玉米可溶性糖、可溶性蛋白和维生素C含量都高于CF处理，其中可溶性蛋白含量达到显著水平，增幅为11.79%；RCF+EM处理下的土壤pH、有机质、速效养分和微生物碳氮均高于CF处理，其中pH、速效钾和微生物氮达到显著水平，增幅依次是20.08%、15.81%、59.96%；RCF+EM处理的土壤真菌数量显著低于CF处理，而细菌、放线菌数量则显著高于CF处理，增幅分别达到153.42%和124.17%。综上，减施化肥配施EM菌剂对使鲜食玉米产量无显著影响，但可显著提高果实品质，改善土壤肥力、提高土壤微生物菌群数量。 相似文献
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siat7e基因和st3gal I基因双表达载体的构建及其初步应用 总被引：1，自引：1，他引：0
应用聚合酶链式反应（PCR）技术,从人类基因组中扩增出全长为1011bp的唾液酸转移酶（siat7e基因）,并从鸡基因组中扩增出全长为1029bp的β-半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶I（ST3GALI）基因。将它们分别克隆入pMDl8一T载体中。对扩增的全长siat7e基因序列采用BamHI和Pst I双酶切后连接入pReceiver真核表达载体,构建pRE—SIAT重组表达载体,进而,对扩增的全长st3galI基因采用SacI和劢0I双酶切,后连接入pRE—SIAT重组表达载体,构建pRE—SIAT—ST3重组真核表达载体。经限制性内切酶消化及DNA序列分析,证实构建的重组表达质粒是正确的。将构建的双基因表达载体转染MOCK细胞,利用荧光显微镜观察,可见细胞表达明显的绿色荧光,从而初步证实了外源基因在MDCK细胞中的正确表达。本研究为最终构建能够适应悬浮培养,并且对禽流感病毒更为易感的MDCK细胞系奠定了基础。 相似文献
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陈小云 《中国农业信息快讯》2014,(1S):285-285
村干部在任职期限内和离任的时候,需要依规则予以审计。这属于经济责任层面的审计,目的是强化农村区域的资产和其他财物监管,预防本区域腐败的产生。统计数据证实:经济责任方面的审计活动,有助于减少村民上访的概率,保护农村区域的集体组织和公民权益,维持稳定的状态。通过这样的审计,证实了村级别的财务正当性,验证了经营流程的实效性。因此,经济责任层次的村干部审计,可以验证干部在任时期的任务落实状态,为选拔干部供应参照。 相似文献
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近年来福建省泉州市农村集体经济稳步发展,但仍存在着发展不均衡、村级集体资产管理制度不完善、村级财务管理制度不健全等问题.该文通过分析泉州市农村集体经济发展存在的问题,提出完善村级集体资产管理制度、规范村级财务管理制度等促进泉州市农村集体经济发展的对策建议. 相似文献