绿色荧光蛋白标记荧光假单胞菌P303及其生存能力检测   总被引：8，自引：0，他引：8       下载免费PDF全文

张霞  张杰  李国勋  黄大昉  陈中义 《植物保护学报》2005,32(3):280-286

构建了含有荧光假单胞菌自身启动子PP303的中间质粒载体pGFP.然后利用mini-Tn5转座子,通过接合转移,将两个带有不同启动子的绿色荧光蛋白基因分别整合到荧光假单胞菌P303染色体上,获得了在488nm波长下发光稳定的P303m1和P303m3菌株.PCR鉴定和Southern印迹结果均证明绿色荧光蛋白已随机插入P303染色体.SDS-PAGE结果表明,含有PA1/04/03启动子的P303m3菌株GFP表达量低于含有PP303启动子的P303m1菌株,染色体标记的GFP表达量低于质粒标记.室内平板抑菌试验结果表明,P303m1与出发菌株P303抑菌活性相当,对九种植物病原真菌有较强的拮抗作用.定殖、生存竞争能力研究表明,荧光假单胞菌在自然土壤中和大白菜根际都具有较强的定殖能力.P303和P303m1在自然土壤中第60天的菌量分别为1.63×104和3.3×102cfu/g土(湿重),大白菜根际第50天的菌量分别为3.29×106和4.1×104cfu/g根(湿重).  相似文献   

转2mG2-epsps基因烟草的草甘膦耐受性分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

孙鹤  郎志宏  陆伟  林敏  黄大昉 《中国农业科技导报》2009,11(4):100-106

利用农杆菌介导法将耐草甘膦基因2mG2-epsps转入烟草,获得87株PCR阳性植株,阳性率为43%。对PCR阳性植株进行Southern杂交、RT PCR、Western 杂交和ELISA分析,结果显示外源基因已经整合到烟草基因组中并高效表达,转基因植株的叶片中2mG2-EPSPS蛋白的最高表达量可达26.03 μg/g 鲜重。转基因烟草草甘膦耐受性分析显示,其中有15个转化事件表现出较好的草甘膦耐受性,对草甘膦的耐受性可达到1%。转基因植株的种子可以在10 mmol/L草甘膦异丙铵盐浓度下萌发,T1代转基因烟草幼苗可以耐受浓度为0.8%的草甘膦。研究结果表明转2mG2-epsps基因烟草具有较高的草甘膦耐受性,2mG2-epsps基因可以用于耐除草剂转基因作物的培育。  相似文献   

转基因植物产业化现状与发展趋势   总被引：22，自引：0，他引：22  

王琴芳  薛爱红  黄大昉 《中国农业科技导报》2000,2(2):33-36

自从1983年首次获得转基因植物以来,植物基因工程迅速发展,并进入产业化生产。本文简要综述了国内外转基因植物产业化现状,并就今后我国转基因植物的研究与产业化发展提出了一些建议。  相似文献   

转cry2Ab4和vip3Aa11基因烟草对小地老虎杀虫效果研究     

高川  郎志宏  朱莉  宋福平  张永军  张杰  黄大昉 《中国农业科技导报》2012,14(5):42-48

小地老虎严重危害农业生产,通过转基因技术提高作物对小地老虎的杀虫效果是一条切实可行的途径。cry2Ab4和vip3Aa11是从苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）中克隆到的两个杀虫基因。分别构建了pCS2Ab和pCSvip3A两种植物表达载体,利用农杆菌介导法转化烟草（Nicotiana tabacum L.）NC89,并得到32株和35株阳性转基因植株。通过对其进行RT-PCR分析、Western杂交分子检测证实两种外源基因在烟草植株中可以正常表达。人工饲喂初龄小地老虎幼虫,对两种转基因植株进行生物活性检测,结果显示饲喂转基因叶片的小地老虎幼虫死亡率在82%以上,抗虫能力比对照显著提高,转vip3A植株抗虫效果优于转cry2Ab植株。  相似文献   

苏云金芽孢杆菌cry基因芯片检测方法的研究   总被引：7，自引：0，他引：7  

刘旭光  宋福平  文思远  王升启  黄大昉  张杰 《中国农业科学》2004,37(7):987-987

 建立了一种不经PCR扩增而直接应用寡核苷酸芯片从苏云金芽孢杆菌总DNA中检测cry基因的方法。对探针长度、浓度、总DNA含量、标记方法以及灵敏度等条件进行了研究。结果表明,用高浓度Klenow酶随机标记高浓度的总DNA与寡核苷酸探针(40～50mer、40μmol·L-1)杂交可用于检测Bt菌株中含有的cry基因;不同长度探针之间对杂交信号的影响存在显著性差异(P<0.01),而不同浓度的探针之间没有显著性差异。此方法的其它条件为杂交温度42℃、时间3h;检测的样品总DNA的灵敏度约为2.5μg;标记产物杂  相似文献   

国外农作物生物技术重大科学工程（基地／中心）建设的一些情况   总被引：2，自引：0，他引：2  

戴小枫  王韧  贾继增  黄大昉 《中国农业科技导报》2000,2(2):43-44

以转基因植物为重点之一的农业生物技术在80年代中期取得了重大突破,90年代初开始迅速走向商品化和产业化。这种起爆式的迅速发展与一些国家政府和社会重视大型农业生物技术综合研究基地建设分不开,特别是研究、开发设施的现代化、智能化和试验规模的集约化极大地推动了生物技术研究成果的不断涌现和转化。  相似文献   

昆虫病原线虫共生细菌的型态变异     

王立霞  杨怀文  黄大昉 《中国生物防治》2000,16(2):92-95

本文阐述了昆虫病原线虫共生细菌型态变异研究近况。  相似文献   

苏云金芽孢杆菌cry2Aa基因的克隆、表达与活性   总被引：9，自引：1，他引：9  

李海涛  姚江  郭巍  宋福平  高继国  黄大昉  张杰 《农业生物技术学报》2005,13(6):787-791

B-8-G和Ly30是我国自行分离的对多种重要农业害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）菌株,经PCR-RFLP鉴定均含有cry2Aa基因.根据cry2Aa全长基因序列设计特异引物,以B-8-G总DNA为模板扩增其中的cry2Aa全长基因,与大肠杆菌（Escherichia coli）表达载体pET-21b相连接,获得含有cry2Aa全长基因的重组质粒pET2Aa,该基因在大肠杆菌BL21菌株能够正常表达65 kD蛋白.通过构建Ly30总DNA文库方法从中筛选获得cry2Aa基因,将其连接至Bt-E.coli穿梭表达载体pHT315上,转化Bt无晶体突变株HD-73中,该基因能正常表达65 kD蛋白,并形成立方体状晶体.这两种基因序列已被国际Bt基因命名委员会分别正式命名为cry2Aa9和cry2Aa10.杀虫生物活性测定结果表明cry2Aa基因表达产物对黄胫小车蝗（Oedaleusinfernlis）、尖音库蚊（Culex pipiens）、黑翅伊蚊（Aedes melanopterus）、水稻二化螟（Chilo suppressalis）和小菜蛾（Plutellaxylostella）幼虫均具有显著的毒杀作用.首次报道cry2Aa10基因表达蛋白对蝗虫、库蚊具有杀虫活性.这些基因的获得,将为高效工程菌和抗虫转基因植物的研制提供了新的基因资源.  相似文献   

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Ba3活性区的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

王广君  张杰  吴隽  宋福平  黄大昉 《中国农业科学》2005,38(8):1585-1590

 通过对Cry1Ba3蛋白序列的分析，以及与已知Cry蛋白比较，设计了6对特异性引物，PCR扩增获得6种不同长度的cry1Ba3基因片段。将这些基因片段克隆到pET-21b载体上，导入大肠杆菌BL21中进行诱导表达，最终得到6种不同长度的Cry1Ba3蛋白片段。采用浸叶法检测这些蛋白片段对小菜蛾的杀虫活性，研究结果表明含有第1-685位和含有第22-655位氨基酸的蛋白片段对小菜蛾的毒性，与全长Cry1Ba3蛋白相比，没有改变；含有第54-655位氨基酸的蛋白片段对小菜蛾的毒力明显降低；而含有第22-627位和含有第85-655位氨基酸的蛋白片段完全丧失了对小菜蛾的活性。上述结果表明Cry1Ba3蛋白对小菜蛾的最小活性区在第22-655位氨基酸之间。  相似文献   

工程菌荧光93防治小麦全蚀病研究简报     

彭于发  黄大昉  张中鸽  陈彩层  张杰 《中国生物防治》1991,(4)

小麦全蚀病(Gaeumannomyces graminis car.tritici)是一种典型的、毁灭性的土传根部病害,近年来在我国华北和西北冬春麦区发生危害有不断加重之势,部分地区已成为小麦高产稳产的限制因素。由于没有抗病品种和有效的化学防治药剂,急待研究新的控制方法。美、澳等国近年曾在土传病菌生物学研究的基础上,探索利用土壤中荧光假单胞菌  相似文献