伪狂犬病病毒在NF-κB家族p65基因敲除细胞系的复制规律研究     

常雯茹  段利芳  杨乐  马英先  王棋  翟云云  周鲁豫  张爽  明胜利  杨国宇  王江  褚贝贝 《中国畜牧兽医》2021,(1)

试验旨在研究伪狂犬病病毒(PRV)在NF-κB家族p65基因敲除细胞系中的复制规律。利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因定点修饰技术构建猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)p65基因稳定敲除细胞系。通过构建p65-sgRNA重组质粒,转染至HEK293T/17细胞,收取慢病毒,感染3D4/21细胞后利用嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7核酸酶检测敲除效率,再通过有限稀释法获得3D4/21-p65^-/-的稳定细胞系。CCK-8试剂盒检测3D4/21细胞中敲除p65基因后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测PRV-GFP感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后病毒增殖的差异;实时定量PCR检测PRV感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、TK基因mRNA表达水平及PRV感染细胞诱导的IL-1β和IL-6基因mRNA水平表达的变化;Western blotting检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后子代病毒滴度。结果表明,sgRNA2和sgRNA3的基因编辑效率较高,对其进行克隆化培养进而获得敲除p65基因的稳定表达细胞系;CCK-8试剂盒检测细胞活力表明,p65基因敲除对细胞活力无影响;流式细胞仪检测表明,同一时间点PRV-GFP在3D4/21-p65^-/-中的增殖显著高于对照细胞;实时荧光定量PCR表明在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、TK基因的mRNA表达水平,而抑制了IL-1β、IL-6基因的mRNA表达;Western blotting结果表明,在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定结果表明,同一时间点PRV-QXX在3D4/21-p65^-/-细胞中子代病毒的复制显著高于对照细胞。以上结果均表明,p65基因敲除可促进PRV在3D4/21细胞中复制。  相似文献   

伪狂犬病病毒在NF-κB家族p65基因敲除细胞系的复制规律研究     

常雯茹  段利芳  杨乐  马英先  王棋  翟云云  周鲁豫  张爽  明胜利  杨国宇  王江  褚贝贝 《中国畜牧兽医》2021,48(1):83-92

试验旨在研究伪狂犬病病毒（PRV）在NF-κB家族p65基因敲除细胞系中的复制规律。利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因定点修饰技术构建猪肺泡巨噬细胞（3D4/21）p65基因稳定敲除细胞系。通过构建p65-sgRNA重组质粒,转染至HEK293T/17细胞,收取慢病毒,感染3D4/21细胞后利用嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7核酸酶检测敲除效率,再通过有限稀释法获得3D4/21-p65^-/-的稳定细胞系。CCK-8试剂盒检测3D4/21细胞中敲除p65基因后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测PRV-GFP感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后病毒增殖的差异;实时定量PCR检测PRV感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、TK基因mRNA表达水平及PRV感染细胞诱导的IL-1β和IL-6基因mRNA水平表达的变化;Western blotting检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后子代病毒滴度。结果表明,sgRNA2和sgRNA3的基因编辑效率较高,对其进行克隆化培养进而获得敲除p65基因的稳定表达细胞系;CCK-8试剂盒检测细胞活力表明,p65基因敲除对细胞活力无影响;流式细胞仪检测表明,同一时间点PRV-GFP在3D4/21-p65^-/-中的增殖显著高于对照细胞;实时荧光定量PCR表明在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、TK基因的mRNA表达水平,而抑制了IL-1β、IL-6基因的mRNA表达;Western blotting结果表明,在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定结果表明,同一时间点PRV-QXX在3D4/21-p65^-/-细胞中子代病毒的复制显著高于对照细胞。以上结果均表明,p65基因敲除可促进PRV在3D4/21细胞中复制。  相似文献   

2020年新疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测与分析     

王紫阳  屈勇刚  孙琼飞  党瑞莹  周海琴  张小玉  张家瑞  常军帅  李岩 《中国猪业》2021,16(3):58-61

为了解2020年新疆地区猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）抗体水平及其消长规律,本试验采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法对1 218份血清中PRRSV免疫抗体水平进行检测和分析。结果显示,PRRSV抗体平均阳性率为78.49%（956/1218）,高于国家规定标准（70%）。S/P的平均值为1.22±0.84,变异系数为69.45%。不同类别猪群抗体平均阳性率在59.19%~91.50%之间,有一定的差异。在调查的10个规模化养殖场中,9个场PRRSV免疫抗体阳性率达到国家标准。不同类别猪群PRRSV变异系数较高,需进一步对现有的免疫程序进行调整和完善,确保各猪群健康。  相似文献   

2020年新疆地区规模化猪场猪PCV2抗体检测与分析     

党瑞莹  张小玉  王紫阳  孙琼飞  常军帅  屈勇刚  李岩 《中国猪业》2021,16(3):65-68

为了解新疆地区2020年规模化猪场猪圆环病毒2型的免疫抗体水平,选择新疆地区6个规模化猪场,针对不同日龄段的猪采集血清样品333份,采用猪圆环病毒2型ELISA抗体检测方法进行抗体检测分析。结果发现,2020年新疆地区规模化猪场猪圆环病毒2型平均抗体阳性率为77.78%（259/333）,平均抗体阳性率符合国家标准。但各猪场免疫效果参差不齐,抗体阳性率最高的为A场,阳性率达100.00%;阳性率最低的为C场,仅48.78%,低于（70%）的国家标准。不同日龄段的猪抗体水平也存在一定的差异,抗体阳性率最高为种公猪,达96.30%;而保育阶段猪抗体水平最低,仅有47.92%,低于国家标准。  相似文献   

基于DPSA算法的“单库-单站”水资源优化调度方法研究     

史振铜  程吉林  杨树滩  常本春  蒋咏 《灌溉排水学报》2015,34(2)

提出了单座水库与单座补水泵站水资源优化调度的非线性数学模型,模型以年内各时段的缺(弃)水量的平方最小为目标函数,各时段水库供水量和泵站引提水量为决策变量,各时段水库库容为状态变量,以年调节水库可供水量、泵站年引提水总量、水库与补水泵站的联合运行准则(泵站闲时补库、忙时供水)等为约束条件,并以南水北调东线一期江苏境内"骆马湖-皂河站"为实例,采用动态规划逐次逼近法进行求解。结果表明,相同供水保证率时,50%、75%、95%来水频率下泵站补水量、缺水量、弃水量比常规调度均有减少。  相似文献   

质地多方面分析三个桃品种果实采后质地的变化   总被引：2，自引：0，他引：2  

李永红  张立莎  常瑞丰  王召元  陈湖  刘国俭 《北方园艺》2016,(4):133-137

以鲜食桃品种"脆保"、"艳保"和"大久保"为试材,采用质构仪质地多方面分析测试法(TPA),研究3个品种果实采后不同贮藏时间的质地变化。结果表明:在室温和低温2种贮藏温度下,3个品种桃果实的硬度随着贮藏时间的延长逐渐下降,而粘附性、弹性、咀嚼性都随贮藏时间延长呈现先上升后下降的趋势,表现为"脆保""艳保""大久保";内聚性变化相对比较平缓。相关性分析表明,桃果实咀嚼性与粘附性呈极显著正相关,二者与果实硬度间亦表现为极显著正相关(P0.01)。弹性与硬度和咀嚼性之间均呈相反的线性相关关系,果肉内聚性值与其它参数值相关性较差。硬度、粘附性、弹性和咀嚼性可用于评价采后桃果实质地的变化,内聚性则反映了果实质地的细微变化。  相似文献   

不同施肥种类对“巨玫”葡萄品质的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

崔江慧  许凤亭  乔海宇  薛薇  常金华 《北方园艺》2016,(8):169-172

以5年生"巨玫"葡萄为试材,采取有机肥(芝麻饼肥、发酵鸡粪)与化肥(硫酸钾、尿素、磷酸二胺)配施,分别以基肥和追肥的方式对"巨玫"葡萄进行施入,研究了不同有机肥种类与化肥配施及不同施肥方式对"巨玫"葡萄浆果品质的影响。结果表明:各有机肥与化肥配施处理中,以芝麻饼肥与化肥生长期追施处理"巨玫"葡萄浆果品质最佳,总糖含量18.39%、糖酸比44.65,在所有处理中最高,较常规施肥分别提高3.26%、6.54%,可溶性固形物含量19.02%、维生素C含量2.05mg/100g,较常规施肥分别提高3.76%、16.38%。  相似文献   

烟青虫初孵幼虫的高效快速收集方法     

王博琳  常耘  司升云 《长江蔬菜》2016,(20)

比较了常用的烟青虫人工收集方法和新研发的烟青虫初孵幼虫快速收集方法的效果。试验结果表明,与人工收集方法相比,快速收集方法获得初孵幼虫所用时间少,收集的初孵幼虫存活率搞,达96.33%,且收集的幼虫发育更加整齐,雌、雄蛹单头质量(雌蛹295.33 mg,雄蛹284.66 mg)略大;还可节省大量人力,避免了人工挑虫对初孵幼虫的伤害,保障了烟青虫实验种群的大量优质扩繁。  相似文献   

青藏铁路沿线植物生态资源调查初步报告     

徐成体  范月君  畅喜云 《草业科学》2007,24(4):31-35

通过对格尔木至拉萨段铁路沿线目前生态环境和青藏铁路建设过程中产生的生态环境影响为期21 d的调查,初步总结沿线主要植物种382个,主要呈现出5个生态分区,并提出青藏铁路后期建设的建议.  相似文献   

浮床种植草坪草对富营养化水体的净化作用研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

牛昶  韩烈保  侯国华  常智慧 《草业科学》2007,24(10):90-93

采用浮床种植草坪草技术,研究了高羊茅Festuca arundinacea、匍匐翦股颖Agrostis stolonifera 2种草坪草对富营养化水体的净化能力.试验结果表明,2种草坪草对富营养化水体中的氮(N)、磷(P)、化学需氧量(CODcr)等具有明显的净化效果,尤其对总磷(TP)的净化能力最强,能有效改善富营养化水体的水质;2种草坪草之间,匍匐翦股颖对TP的去除效果显著高于高羊茅对TP的去除效果.研究结果显示浮床种植草坪草技术可能是一条有效的修复富营养化水域的新途径.  相似文献