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旨在设计、筛选高效编辑山羊胚胎生长负调控因子SOCS2基因的sgRNA,为通过SOCS2基因编辑创制快长型山羊奠定技术基础。本研究利用在线网站对山羊SOCS2基因SH2结构域保守序列设计2条sgRNA,构建表达载体,体外转录获得sgRNA及Cas9 mRNA;体外检测sgRNA+Cas9蛋白切割靶DNA的效率;在此基础上将屠宰场山羊卵巢分离培养的442个孤雌胚胎进行分组,2个试验组显微注射sgRNA和Cas9 mRNA混合物,对照组注射超纯水,以单个囊胚全基因组DNA扩增产物为模板,PCR扩增靶区域并测序鉴定,发生编辑的样本进行T-A克隆测序检测编辑形式;根据在线网站预测,每条sgRNA选择5个错配数最少的潜在脱靶位点进行脱靶检测。结果表明,在SOCS2基因83和96号氨基酸密码子附近区域获得2条sgRNA并成功构建表达载体,体外转录获得高质量sgRNA和Cas9 mRNA;两条sgRNA均可引导Cas9蛋白在体外完全切割靶DNA;SOCS2-sg-83对胚胎的编辑效率为94.1%,160个T-A克隆中有152个在靶位点出现插入、缺失或替换,概率为95.0%,其中81.3%发生了移码突... 相似文献
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植酸酶发展现状和研究趋势 总被引:3,自引:0,他引:3
植酸酶作为一种新型的饲料添加剂已经得到越来越多的重视和应用。其可以提高饲料中磷和其他成分的利用率,并减轻环境污染。综述了新型酶制剂的筛选、高效表达和应用等方面的进展,并对进一步的研究开发趋势进行了分析。 相似文献
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近年来,随着国家对农业的投入不断加大,农业机械化程度的不断提高,高效节水灌溉技术也得到了较快的发展.我市首次引进推广10台卷盘式喷灌机,为2012年春季抗旱发挥了重要作用,但在使用中出现了一些问题,为使这些机械高效率地发挥作用,现就喷灌机使用技术介绍如下: 相似文献
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