来源于Pseudomonas sp.1 7对硝基酚降解基因簇中的对苯二醌还原酶基因的克隆和功能鉴定     

张双宇  孙雯  许丽  田健  初晓宇  伍宁丰 《中国农业科技导报》2012,14(6):70-75

Pseudomonas sp. 1 7 可以利用对硝基酚（PNP）作为唯一的碳源,氮源和能源生长。为了鉴定菌株1 7代谢PNP的相关基因,本研究构建了菌株1 7基因组的Fosmid文库,并通过文库的筛选克隆得到一段长为12.3 kb的基因簇序列。序列分析显示,该基因簇中共有7个基因（pdcEDGFCBA）与PNP的代谢相关。其中PdcB与来源于Pseudomonas sp. WBC 3中的对苯二醌还原酶（PnpB）有98%的相似性。将pdcB基因在E. coli BL21中过量表达,并通过Ni NTA亲和层析纯化重组蛋白PdcB。体外的酶活测定表明,PdcB为一个FAD和NADH依赖型的对苯二醌还原酶,能够催化对苯二醌降解并生成对苯二酚。  相似文献   

来源于土壤宏基因组中漆酶Lac13H9基因克隆及其酶学性质分析     

胡斌斌  吴萍  刘晓青  丁伟  伍宁丰 《中国农业科技导报》2015,17(2):64-71

漆酶广泛存在于土壤中,在有机农药残留和木质素的降解方面具有潜在的工业价值。从土壤宏基因组中得到了一个全长为1 389 bp漆酶基因lac13H9,编码462个氨基酸,预测理论分子量为50 k Da,含有一个17个氨基酸组成的信号肽,与NCBI蛋白数据库比对结果表明是一个新的漆酶基因。将lac13H9转入到大肠杆菌Transseta(DE3)中通过微好氧发酵进行异源表达,并通过Ni柱亲和层析纯化。获得的重组漆酶Lac13H9具有良好的酶学性质,其最适温度为40℃,最适p H为6.0,且具有较好的热稳定性,在50℃下保温90 min还有60%的剩余酶活力,同时发现低浓度的Fe2+促进漆酶酶活,高浓度则抑制酶活。良好的酶学性质为该酶的应用奠定了基础。  相似文献   

枯草芽胞杆菌芽胞表面展示外源蛋白的研究进展     

余小霞  田健  伍宁丰 《中国农业科技导报》2013,15(5):31-38

枯草芽胞杆菌是一种生物安全的革兰氏阳性细菌,在营养匮乏的环境下,可形成具有强抗逆性的芽胞。枯草芽胞杆菌的芽胞由核心、皮层、孢子外套蛋白三部分组成,目前已成功利用枯草芽胞杆菌芽胞外套蛋白CotB、CotC、CotG、CotX和OxdD为载体,将酶蛋白、抗原蛋白或荧光标记蛋白等展示于芽胞表面。芽胞表面展示的蛋白通常具有较好的稳定性、易于纯化和安全性好等优点,可应用于医药、食品及饲料工业等领域,具有较大的应用前景。详细介绍了枯草芽胞杆菌芽胞的分子特点及芽胞表面展示系统的构建过程及其应用前景,为芽胞表面展示载体的基础及应用研究奠定基础。  相似文献   

细菌氟抗性研究进展     

刘丽慧  田健  伍宁丰 《中国农业科技导报》2013,15(6):113-118

氟离子对多种细菌如变形链球菌、氧化硫硫杆菌和中度嗜热嗜酸菌等细菌具有抑制和杀伤作用。氟离子杀菌机制包括：破坏细胞膜的结构、影响细胞的ATPase活性、抑制多种代谢酶如烯醇酶等。细菌对氟离子的抗性机制包括：将无机氟离子转化为有机氟离子,由氟化物核糖开关控制相关蛋白表达和逆向运输蛋白EriCF对氟离子的运输等。目前关于微生物对氟离子的抗性方面的研究很少,因此,分离并确定与细菌耐氟相关基因的功能,研究其耐氟的机制,对深入理解细菌对氟的抗性以及细菌对阴离子的抗性机制有着重大的理论意义,同时也为解决一些需要在高氟环境下发挥功能的细菌的生长问题以及更好的利用氟离子来杀死有害菌等应用问题奠定良好的基础。  相似文献   

来源于枯草芽孢杆菌的漆酶cotA基因克隆与表达及其酶学性质研究     

余小霞  刘晓青  田健  伍宁丰 《中国农业科技导报》2015,17(1):102-108

漆酶作为一种含铜离子的多酚氧化酶,在环境保护、生物能源、食品工业和纸浆漂白等工业中有重要的应用价值。从枯草芽孢杆菌168菌株中克隆漆酶cotA基因,全长1 542 bp,编码513个氨基酸,外加一个终止密码子。将该基因在大肠杆菌Transetta（DE3）菌株中通过微好氧发酵法进行异源表达和纯化,获得的重组酶蛋白CotA的最适反应温度为60℃,最适pH为4.5。该酶在60℃具有较好的热稳定性,保温90 min后仍有71.70%的剩余酶活。最适反应条件下,重组酶对ABTS的Km为63.9±5 μmol/L,kcat为39.1±1/s,最大反应速率为0.005 μmol/L·min·mg,且在最适反应条件下,微好氧发酵法获得的重组酶蛋白CotA的比活（557.8 U/mg）是低温诱导法（0.2 U/mg）的2 655.4倍。因此,通过微好氧发酵法可以显著提高重组漆酶CotA的比活力。  相似文献   

特异腐质霉来源漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达     

张丽洁  徐欣欣  田健  初晓宇  朱宝成  伍宁丰 《中国农业科技导报》2019,21(2):46-53

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,在有机农药残留和木质素的降解方面具有潜在的工业价值。从特异腐质霉Y1(Humicola insolens Y1)中分离到了漆酶基因Lac1,其全长1 803 bp,编码600个氨基酸,与NCBI蛋白数据库比对结果表明,与来源于Chaetomium globosum CBS 148.51(XP_001228806)的多酚氧化酶序列相似性最高为71%,表明是一个新的漆酶基因。将其克隆入毕赤酵母表达载体pPIC9r中,通过PCR和SDS-PAGE检测证实基因已经整合入酵母基因组中且能分泌表达。在3 L发酵罐中,重组Lac1蛋白表达量达到3.79mg/mL发酵液,酶活性达到1.3 U/mL发酵液。酶学性质分析结果显示,漆酶的最适作用温度为65℃,最适反应pH为4.5,且在pH 6～11的范围内酶的相对活力均在70%以上。  相似文献   

PR—1a蛋白基因的克隆及序列分析     

陈茹梅  李汝刚  伍宁丰  杨芳  孙盈盈 《农业生物技术学报》2001,9(4):319-321

以珊西烟草（Nicotina tabacum cv. Xanthi-nc）的基因组DNA为模板，通过合成一对特异性引物，利用多聚酶链式反应（PCR）扩增获得PR－1a蛋白基因。将其克隆到E.coli质粒上进行序列分析。结果表明：该基因由504个碱基组成，编码168个氨基酸。与已发表序列相比较，核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性分别为99.9%和100％。  相似文献   

豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)抗虫转基因新疆杨的获得   总被引：6，自引：0，他引：6  

诸葛强  王婕琛  陈英  伍宁丰  黄敏仁  范云六  王明庥 《分子植物育种》2003,1(4):491-496

利用根癌农杆菌介导法将广谱抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入新疆杨(Populus a1-ba var．pyramidalis)，经筛选获得了大量转基因植株。对转基因植株经PCR鉴定、PCR-Southern和点杂交分子检测结果证实CpTI基因已整合进杨树基因组中。部分转基因植株的饲虫实验表明，饲喂转基因杨树叶片可明显抑制杨尺蠖幼虫生长发育。  相似文献   

翻译速率对重组蛋白表达影响的研究进展     

常美会  初晓宇  伍宁丰 《中国农业科技导报》2017,19(4):45-50

利用基因工程技术表达并获得高产量的重组蛋白在现代生物学发展与生产应用中起着重要的作用。研究发现,有些原始基因异源表达非常困难,经过改造表达系统后,如选择最优的启动子、信号肽和提高基因拷贝数等,重组蛋白的表达量依旧很低。因此,从基因本身序列出发,探寻提高表达量的途径也一直是研究热点。综述了翻译起始区、密码子偏好性、mRNA的二级结构和类SD序列方面对蛋白质翻译速率的影响,为提高重组蛋白表达量提供更有效的策略。  相似文献   

活性口袋关键色氨酸对几丁质酶Chi304催化性质的研究     

田晓倩  卢海强  伍宁丰  田健  关菲菲 《中国农业科技导报》2023,25(2):76-82

几丁质酶中存在结合口袋及水解活性位点，关键氨基酸与底物几丁质的结合可调控酶的水解活性。以嗜热几丁质酶Chi304为研究材料，采用同源建模分析其高级结构，发现在其底物结合口袋附近存在2个色氨酸（W140与W272），将其定点突变为丙氨酸后，采用高效液相色谱检测酶的水解产物，并进一步分析水解产物三乙酰壳三糖（DP₃）与二乙酰壳二糖（DP₂）的比例（DP₃/DP₂），用于评估突变体的效果。结果表明，突变体W140A、W272A与W140/272A水解胶体几丁质产物DP₃/DP₂分别较野生型提升23.3%、45.7%与80.0%。由此表明，W140与W272是影响酶与底物结合的关键氨基酸，将其突变为丙氨酸可提升Chi304的内切活力，降低外切活力。  相似文献