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【目的】获取ASFV p37蛋白,并制备抗ASFV p37蛋白的多克隆抗体,为ASFV p37蛋白结构和功能研究提供材料。【方法】应用生物信息学工具对ASFV HLJ/2018(GenBank登录号:MK333180.1)p37蛋白进行分析,设计合成p37基因,并构建pET32a-p37重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE对重组蛋白的可溶性进行分析。收集菌体进行超声破碎,分离沉淀并使用8 mol/L尿素变性后离心,用0.45μm滤膜过滤离心后的上清,使用镍亲和层析柱纯化蛋白,通过SDS-PAGE、Western blotting对其纯化效果及特异性进行验证。将纯化后的p37蛋白按照50μg/只免疫小鼠,制备抗ASFV p37蛋白多克隆抗体。利用间接ELISA方法测定制备的多克隆抗体效价;通过Western blotting、间接免疫荧光试验检测该多克隆抗体的特异性。【结果】生物信息学分析表明,p37蛋白为稳定亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽。二级结构主要含有α-螺旋(45.28%)、延伸链(15.09%)、无规则卷曲(31... 相似文献
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非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种侵害猪的烈性传染病,世界动物卫生组织(OIE)规定其为必须报告的动物疫病。目前,在世界范围内仍无针对其的商品化疫苗和药物,使得综合防控面临着严峻挑战。防控非洲猪瘟疫情只能依靠准确的诊断和可靠的早期监测技术,因此,快速、准确、灵敏、方便的检测方法对于净化和预防非洲猪瘟具有重要意义。纳米抗体(Nanobody,Nb)是一种新型抗体,其结构简单、分子量小,易于改造且具有强稳定性、高特异性、高亲和力、低免疫原性、能识别隐蔽表位、组织穿透力强以及易于制备等特点,应用前景广泛,故备受关注。本文归纳总结了非洲猪瘟的检测方法和技术手段,探讨了纳米抗体在非洲猪瘟诊断中的应用现状,并对其未来发展方向做出展望。 相似文献
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采用形态学与分子生物学方法相结合,对陵水才女虫(Polydora lingshuiensis)和威氏才女虫(P.websteri)进行了比较与鉴定研究,并调查了它们的地理分布。在形态上,陵水才女虫的脑后脊上具中触角、粗足刺刚毛近末端具凹陷;而威氏才女虫无中触角、粗足刺刚毛具侧凸缘。遗传距离分析结果显示,基于核糖体18S基因、线粒体COⅠ基因、线粒体Cyt b基因的陵水才女虫和威氏才女虫的种间遗传距离明显大于其种内遗传距离。基于COⅠ、Cyt b的才女虫的种间种内遗传距离比率远大于基于18S的遗传距离比率。才女虫的COⅠ与Cyt b基因的条形码间隔比18S的更宽,分辨率更高,更适用于形态相似种的辅助鉴定。在中国海域,陵水才女虫和威氏才女虫均属于宿主特异性低、地理分布性广的才女虫种类,其传播途径可能与其宿主的养殖方式以及商业运输密切相关。 相似文献
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我国海藻中抗氧化活性物质的研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
近年来一些研究人员从海藻中分离出多种具有抗氧化活性的物质,如海藻多糖、多酚、超氧化物歧化酶、不饱和脂肪酸、牛磺酸、维生素类等,并对它们的来源、在海藻中的含量、结构、活性及作用机理等方面进行了研究。地球上海洋资源丰富,海藻种类繁多,海藻中富含的抗氧化活性物质具有活性作用强、结构复杂、副作用低等优点,为海洋医药与生物制品的开发提供了良好的天然产物来源。本文综述了海藻中抗氧化活性物质的研究进展,并结合相关研究做出了分析和探讨,以期为海洋医药和生物制品的开发提供理论基础。 相似文献
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非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起的,以钝缘蜱为传播媒介的一种急性、广泛出血性、高传染性的猪致命疾病,发病率和病死率可高达100%。ASFV是一种大型的DNA病毒,结构复杂,其基因组编码多种结构蛋白和非结构蛋白。非洲猪瘟是全球养猪业的灾难性疾病,目前,尚未开发出安全有效的商品化疫苗和治疗方法。随着生物技术的发展,ASFV疫苗的研究取得了较大的发展。本研究旨在总结ASF灭活疫苗以及基因工程疫苗如减毒活疫苗、病毒载体活疫苗、亚单位疫苗以及DNA疫苗研究的进展,并对ASFV疫苗的研制进行了展望,以期为ASFV疫苗的研究提供参考。 相似文献
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Pseudomonas putida GM6多聚磷酸盐激酶(ppk)基因的克隆及表达 总被引:4,自引:0,他引:4
以一株高效聚磷菌Pseudomonas putida GM6为研究材料.为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphosphate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约528 bp).随后采用快速染色体步移方法(Self-formed adaptor PCR,SEFA-PCR)技术扩增片段的上下游基因序列,将三个序列拼接,用OMIGA软件分析其ORFs,推测ppk基因全长为2 220 bp(GenBank accession number DQ133537).构建的多聚磷酸盐激酶表达菌株E. coli BL21(DE3)/ pET29a-ppk经IPTG诱导后3 h时,明显出现分子量约为81 kDa的表达产物.且表达菌株在12 h时的磷去除率高达80%(对照菌株的磷去除率仅为18%),远高于已报道的40%的去除率.这表明ppk基因在E. coli中的过量表达,导致了E. coli菌体中poly-P的大量聚集,从而大大去除了培养基中的磷酸盐. 相似文献
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