fat-1基因密码子优化及在家兔胎儿成纤维细胞中的初步表达     

周红梅  王颖  张立凡  华绪川  王争光  徐宁迎  郭晓令 《江苏农业学报》2011,27(2)

根据家兔基因密码子使用偏好性,对引自GenBank的秀丽隐杆线虫fat-1基因编码序列进行密码子优化,通过全基因合成的方法获得优化后的fat-1基因(命名为opfat-1);从秀丽隐杆线虫中RT-PCR扩增获得fat-1.将扩增的fat-1和合成的opfat-1基因分别构建到绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中.采用脂质体LipofectamineTM转染法将fat-1和opfat-1基因转入家兔胎儿成纤维细胞(Rabbit fetal fibroblast cells,rFFCs)中.对比不同DNA和转染试剂用量以及细胞暴露于DNA、转染试剂中作用时间探讨影响rFFCs转染效率的参数,经过优化,最优的rFFCs转染条件为:LipofectamineTM用量2～3μl,DNA量0.8～1.0μg,LipofectamineTM与DNA、细胞共培养时间为8 h.通过绿色荧光标记和RT-PCR检测转染细胞中融合蛋白和目的基因的表达.密码子优化的opfat-1与fat-1相比,体外瞬时表达效率有极为显著的提高;G418抗性筛选获得转基因单克隆细胞,RT-PCR初步验证fat-1和opfat-1基因均在家兔胎儿成纤维细胞中稳定转录表达.  相似文献   

基于工作过程的高职作物栽培课程的研究与实践   总被引：2，自引：0，他引：2  

张翠翠  马彦令 《高等农业教育》2011,(7):72-74

课程建设是专业建设的核心。"作物栽培"是种子生产与经营、农艺、植物保护技术等专业一门重要的专业课,以工作过程为导向的"作物栽培"课程的构建是以校企合作为平台,工学结合为切入点,基于作物生产季节设计"理论教学"、"生产实习"和"顶岗实习",从而较好地实现农业类高职教育以工学结合为切入点的教育教学改革。  相似文献   

黄芪多糖(APS)拮抗铅镉联合致鸡脾脏细胞凋亡作用的研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

费东亮苏禹刚  肖银霞白刃王令  吴思思 《中国农学通报》2012,28(26):51-54

为了探讨黄芪多糖注射液对铅镉联合致鸡脾脏细胞凋亡的拮抗作用。采用TUNEL法、RT-PCR和DNA ladder方法检测分别对对照组、铅镉组和黄芪多糖-铅镉组的鸡脾细胞凋亡率和脾淋巴细胞凋亡基因Bcl-2 mRNA转录水平。结果表明：与对照组比较,试验组的细胞凋亡率明显升高,Bcl-2mRNA表达水平降低;试验组和对照组差异显著或差异极显著,并且黄芪多糖-铅镉组数据介于对照组和铅镉组之间。试验结果显示：黄芪多糖注射液对铅镉联合致鸡脏脾细胞凋亡具有明显的拮抗作用。  相似文献   

小麦抗蚜品种的遗传多样性SSR标记分析          下载免费PDF全文

仇松英  张松令  史忠良  谢福来  高炜  史晓芳 《农学学报》2011,(4)

分析小麦抗蚜品种(系)的遗传多样性,为进一步培育和推广抗蚜品种提供依据。在田间对956份小麦品种(系)损失率鉴定结果的基础上,取47份年度间鉴定抗性结果较为一致的材料,按损失率大小,由小到大排列起来,利用筛选的18对多态性SSR标记检测了参试材料的遗传多态性。结果表明,18对SSR标记在47份不同抗性品种中检测到99个等位基因,能够将所有品种区分开来,每对引物可以检测到1~10个等位基因,平均为5.21个。47个小麦品种间的相对遗传距离在0.33~0.94之间,平均为0.65。高抗品种间相对遗传距离平均为0.59(0.39~0.77);中抗品种间的相对遗传距离平均为0.62(0.39~0.83);感虫品种间的相对遗传距离平均为0.62(0.37~0.83);高感品种间的相对遗传距离平均为0.64(0.37~0.84)。SSR标记聚类分析在相对遗传距离为0.67处将供试材料分为7大类群。选育和推广抗虫品种时尽可能选择聚类图中亲缘关系较远的材料。抗虫品种‘临远95-5322’单独聚为一类,同其余品种具有较远的亲缘关系,可作为新的抗源用于抗虫育种。  相似文献   

小麦抗麦红吸浆虫品种的遗传多样性分析     

史忠良  仇松英  张松令  谢福来  高炜  张婷  逯腊虎  武计平 《农学学报》2011,1(1):10-16

为了更深入地揭示小麦抗麦红吸浆虫品种（系）的遗传多样性,在田间虫圃对1562份小麦品种（系）损失率鉴定结果的基础上,取47份年度间鉴定抗性结果较为一致的材料,按损失率大小,由小到大排列起来,利用19对多态性SSR标记检测了参试材料的遗传多态性。结果表明,19对SSR标记在47份不同抗性品种中检测到104个等位基因,能够将所有品种区分开来,每对引物可以检测到3-8个等位基因,平均5．47个。47个小麦品种间的遗传距离从0．40～0．95不等,平均为0．71。高抗品种间遗传距离平均为0．66（0．40-0．95）;中抗品种间的遗传距离平均为0．69（0．46～0．90）;感虫品种间的遗传距离平均为0．69（0．53-0．95）;高感品种间的遗传距离平均为0．68（0．41～0．90）。SSR标记聚类分析在遗传距离为0．74处将供试材料分为6大类群。抗虫品种晋麦65号单独聚为一类,同其余品种具有较远的亲缘关系,可作为新的抗源用于抗虫育种,并在吸浆虫发生地块推广种植。  相似文献   

武夷山黄龙岩省级自然保护区植被现状及其演替总体趋势初探     

陈亚令 《安徽农学通报》2017,23(16)

通过对武夷山黄龙岩省级自然保护区植被现状资源本底进行摸底调查,并对其植被类型及其分布、植被型组成及其结构的特点进行分析、预测其植被演替总体趋势,为更好保护黄龙岩的自然资源提供必要的基础资料。  相似文献   

互助县马铃薯机械化种植技术推广   总被引：1，自引：0，他引：1  

魏亨令 《青海农技推广》2010,(2):58-59

<正>青海省互助县气候凉爽,夏季秋季降雨集中,昼夜温差大,光照时间长,是马铃薯的理想产地。年种植面积达1.87万公顷。但长期以来,由于延用传统的耕作方式,亩产在1500kg上下徘徊,单产低,种植效益差。从  相似文献   

刺参大棚生态节能型养殖模式研究     

于成海  张榭令 《养殖技术顾问》2010,(9):200-201

蓬莱市北方海水育苗有限公司于2007年承担了《蓬莱市2007年科学技术发展计划》蓬科字（2007）第5号文科研项目＂刺参工厂化生态节能型养殖模式研究＂。该项目以大棚无公害养殖技术为依托,利用微生物制剂（光合弧菌、蛭弧菌等）进行刺参养殖,通过控制水温,解除刺参养殖的夏眠和越冬技术,从而有效解决刺参养殖成活率低、养殖周期长的弊端。该项目在2007年试验面积为5000平方米,  相似文献   

球毛壳中抗真菌物质对树皮腐烂病菌的抑制作用     

王庆华  李超  何邦令  宋勇  聂化东  赵奇 《安徽农业科学》2010,38(12):6256-6257,6298

[目的]阐明球毛壳中抗真菌物质对树皮腐烂病菌的抑制作用机制。[方法]通过平板对峙培养、发酵液萃取、薄层层析分离和抑菌活性测定等方法,研究毛白杨内生真菌球毛壳ND35产生的抗真菌物质对树皮腐烂病菌的抑制作用。[结果]球毛壳ND35的抗真菌物质粗提物对杨树和苹果树腐烂病菌有较强的抑制作用,对2种病菌的菌丝生长抑制率分别是66.4%和72.6%。对分生孢子萌发的抑制率分别是92.2%和80.4%。薄层层析分离和活性测定结果证明,抗真菌物质2号组分在对树皮腐烂病菌的抑菌过程中起主要作用。[结论]球毛壳中抗真菌物质对于树皮腐烂病有生物防治潜力。  相似文献   

秀丽隐杆线虫fat-1基因密码子优化、克隆及家兔表达载体构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

周红梅  陈哲  蔡兆伟  蒋晓玲  徐宁迎  郭晓令 《江苏农业科学》2010,(6)

提取秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)总RNA,采用RT-PCR法扩增出fat-1基因cDNA全长.根据家兔基因密码子使用偏好性,对引自GenBank的fat-1 cDNA序列进行密码子优化,通过全基因合成的方法获得优化后的fat-1基因(命名为opfat-1).将扩增的fat-1 cDNA和opfat-1基因分别与pGEM-T Easy和pUC57载体连接,转化大肠杆菌DH5α,获得2种重组克隆子.2种重组子经双酶切后获得的目的片段分别定向克隆入绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中,构建重组表达载体,并对其进行PCR、限制性内切酶酶切分析和测序鉴定,结果表明,成功构建了fat-1基因家兔表达载体pEGFP-opfat-1和pEGFP-fat-1,且读码框正确.  相似文献