犬血清IgG的纯化、抗体制备及其鉴定     

胡晓苗  余为一  张丹俊 《安徽农业科学》2008,36(21)

[目的]探讨犬血清IgG的纯化方法。[方法]采用硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析提取纯化犬血清IgG,利用SDS-PAGE电泳和免疫印迹法鉴定所得产品的纯度和免疫活性。[结果]获得的纯化犬血清IgG的SDS-PAGE图谱中存在2条蛋白条带,表明获得了高纯度的犬血清IgG;重链分子量为58kD,轻链分子量为27kD,IgG分子量为170kD。特异性检测发现犬血清IgG重链和轻链都能与鼠抗犬血清IgG抗体结合,表明纯化犬血清IgG具有免疫原性和反应原性。[结论]硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析可获得纯度高、活性好的纯化犬血清IgG,为犬血清IgG相关的免疫学试验提供了高质量的免疫材料。  相似文献   

小鼠Ii基因克隆、表达及其抗体制备     

董林  王艳萍  沈志强  余为一 《安徽农业大学学报》2009,36(2)

为了获取小鼠Ii编码基因,利用原核表达系统进行诱导表达,提取纯化目的蛋白并制备其相应抗体,应用RT-PCR获取小鼠Ii编码基因;插入pGEX-4T-1表达载体,SDS-PAGE分析蛋白表达;纯化融合蛋白,免疫家兔,制备抗血清.结果扩增出了与预期大小相同的700 bp的特异性基因条带,其与GenBank登录的鼠Ii基因同源性高达99.2%～99.8%;SDS-PAGE检测到大小约49.5 ku的特异性蛋白条带;应用琼脂双向免疫扩散、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光法等进行抗体活性鉴定,证明获得了特异性强、具有良好生物活性的抗体.成功克隆了小鼠Ii编码基因,有效进行了诱导表达,并制备了具有良好免疫学活性的特异性抗Ii抗体.  相似文献   

嗜温气单胞菌研究进展   总被引：9，自引：0，他引：9  

吕爱军  李槿年  余为一 《中国动物检疫》2000,17(11):42-43

嗜温气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｄｍｅｓｏｎｐｈｉｌｉｃ）广泛分布于水、土壤及人类的粪便中,对鱼类、畜禽和人均有致病性,对本群细菌的研究已取得了很大进展,其中嗜水气单胞菌是一种典型的人－兽－鱼共患病病原［１］,可引起多种水产动物的败血症和人类的腹泻,往往给淡水养殖业造成惨重的经济损失,目前引起了国内外水产学界、兽医学界和医学界的高度重视。本文就嗜温气单胞菌的分类地位、毒力因子及其与致病性的关系作一简述。１分类地位气单胞菌属（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）的细菌分为两大类［２］：一类为嗜冷气单胞菌群;另一类为…  相似文献   

36株气单胞菌外毒素溶血性和致病性的测定   总被引：4，自引：0，他引：4  

李槿年  余为一  魏梅芳 《中国预防兽医学报》2000,22(2):130-132

溶血试验和动物试验检测３６株气单胞菌外毒素的溶血性和致病性。结果显示其中３０株细菌产生的外毒素有溶血性。溶血价在菌株间差异较大。毒素的溶血介与对实验动物的致死率有明显相关性,溶血价在１：１６以上的外毒素对小鼠的致死率均为１００％,溶血价在１：８以下的餐毒素对小鼠的致死率在０￣１００％。此外,两株浊和气单力培养物无菌上清液无溶血性,但对小鼠的致死率达６６．６％,可能与细菌产生了胞外蛋白酶有关。  相似文献   

传染性法氏囊病毒分子生物学研究进展   总被引：3，自引：0，他引：3  

严若峰  余为一  李槿年 《中国动物检疫》2000,17(8):42-44

传染性法氏囊病病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｂｕｒｓａｌ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓ　,　ＩＢＤＶ）是鸡的重要传染病病原之一,除了直接引起３周龄～６周龄易感鸡发病死亡外,更为重要的是破坏机体的免疫器官,引起免疫抑制,导致鸡群丧失对其它病原的免疫力,给世界养鸡业造成巨大的经济损失。本文主要从病毒的特性、基因组结构和病毒蛋白及变异几方面对ＩＢＤＶ研究进展进行浅述。１主要特性１.１分类由于ＩＢＤＶ在鸡胚肾细胞上培养出现的细胞病变、对某些理化因素的抵抗力及电镜下形态同呼肠孤病毒（ＲＨ）Ｖ相似,所以一开始被误…  相似文献   

减蛋综合征病毒的分子生物学研究进展：基因片段与多肽数, …   总被引：2，自引：0，他引：2  

汪明磊  余为一 《动物科学与动物医学》2000,17(3):43-45

  相似文献   

草鱼细菌性败血症的诊断及流行病学调查   总被引：8，自引：0，他引：8  

祖国掌  余为一  李槿年  周广钧  李家云 《淡水渔业》2000,30(5):35-37

1998～ 1999年六安市万亩渔业基地的多种鱼类发生了细菌性疾病的流行 ,其中草鱼受损更为突出。为了研究起因 ,从根本上有效地防治此类疾病的流行 ,我们对该地区草鱼的疾病进行了诊断 ,并进行了有关流行病学的调查。1　诊断与调查方法1 1　 1998年 6～ 10月和 1999年 5～ 7月 ,在六安市万亩渔业基地的精养鱼塘收集患病草鱼 ,现场观察 ,记录肉眼鉴别的症状 ,并将其用冰桶保存 ,带回实验室解剖观察后 ,对各器官进行显微检查 ;同时取症状基本一致的同批患病草鱼 (保持低温在 6ｈ内 ) ,分离细菌。1 2　细菌的分离、培养 :无菌操作取呈弥漫性的…  相似文献   

西北印度洋中尺度涡对鸢乌贼时空分布的影响     

付迎悦  武孝慈  金鹏超  余为 《中国水产科学》2024,31(4):454-464

鸢乌贼(Sthenoteuthis oualaniensis)是具有重要经济价值的头足类之一, 在西北印度洋海域蕴藏有丰富的资源量, 该海域受季风的影响中尺度涡分布广泛, 但对栖息于该海域鸢乌贼的影响尚不清晰。本研究基于角动量涡旋检测与追踪算法获得的涡旋追踪数据集匹配渔业数据, 统计了西北印度洋中尺度涡的时空分布, 分析了不同类型涡旋和鸢乌贼资源丰度和分布的关系, 并结合广义加性模型解析了中尺度涡基本特征量与鸢乌贼资源分布之间的关联。结果表明, 西北印度洋中尺度涡发生的高频海域在北部区域, 且存在明显的月间和年际变化。振幅、相对涡度大的中尺度涡内更容易聚集高的鸢乌贼资源丰度。气旋涡内部区域和外围区域的鸢乌贼资源丰度均优于反气旋涡, 且这种差异于涡旋内部区域更加明显。研究表明, 西北印度洋中尺度涡会影响鸢乌贼的资源分布, 需要进一步结合环境因子探究其影响机制。  相似文献   

拟态弧菌外膜蛋白OmpU 基因的原核表达及其免疫保护性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

李小飞  李槿年  季晶晶  余为一 《中国水产科学》2008,15(2):307-312

自行构建的pMD18T-OmpU重组克隆质粒经BamHI/EcoRI双酶切后,定向插入原核表达质粒pGEX-4T-1中构建重组表达质粒pGEx-4T-1-OmpU.将重组表达质粒转化至大肠杆菌E.coli BL21进行IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE电泳及Western-blot分析显示,以包涵体形式表达的GST-OmpU融合蛋白的分子量约为62.9 kD,可与鼠抗拟态弧菌外膜蛋白(Omps)免疫血清发生特异性反应,提示重组OmpU保留了天然Omps的抗原性.用纯化的融合蛋白免疫昆明系小鼠,以50LD50拟态弧菌(5×103CFU/mL)攻击,小鼠的免疫保护率为60%(9/15).表明OmpU是拟态.弧菌的保护性抗原之一,具有研发成为外膜蛋白基因工程亚单位苗的潜在价值.  相似文献   

鸡恒定链协助抗原肽结合MHCⅡ类分子并进入细胞内吞体     

陈芳芳  张旭  谭红黎  桂亚萍  余为一 《畜牧兽医学报》2019,(2):398-405

为探明鸡恒定链(invariant chain,Ii)的胞质区/跨膜区[Ii(Cyt/Tra)]作为载体是否可携带抗原肽在细胞内结合MHCⅡ类分子和进入转运途径的细胞器(内吞体),构建4个基因目的片段[Ii、Ii(Cyt/Tra)、F2(新城疫病毒F蛋白片段)和Ii(Cyt/Tra)/F2],分别将它们插入原核表达载体pET-32a和真核表达载体pmCherry-C1/N1中,构建8个重组质粒,再转入工程菌(E.coli)和人肾细胞系(293T),并应用拉下法(pull-down)检测目的蛋白与MHCⅡβ的结合,应用激光共聚焦确定它们在真核细胞与MHCⅡβ的共定位以及在内吞体的定位。结果表明,构建的重组质粒均能相应地原核或真核表达相应目的蛋白;Ii、Ii(Cyt/Tra)和Ii(Cyt/Tra)/F2不仅能够与MHCⅡβ结合,还能进入细胞内吞体;但是F2既不能与MHCⅡβ结合,也不能进入内吞体。Ii活性片段Cyt/Tra不仅本身具有结合MHCⅡβ的作用,而且还可以携带抗原肽与之结合并一起转入细胞内吞体而进入抗原递呈途径。该结果为进一步研究Ii载体转运抗原提供了理论依据。  相似文献