猪肺炎支原体LAP的结构预测及其抑制剂Bestatin对支原体生长的影响     

陈蓉  郝飞  谢星  赵琳  韦艳娜  张磊  王丽  熊琪琰  邵国青  冯志新 《中国动物传染病学报》2024,(2):1-11

本研究旨在以猪肺炎支原体为代表,研究支原体LAP酶活中心的高级结构及其被抑制后对支原生长的影响。亮氨酸氨肽酶(LAP)是一类广泛存在于各类生物的氨基酸代谢酶,有研究表明病原微生物的LAP酶活中心被抑制后可以直接影响微生物的代谢和生长。本研究拟以猪肺炎支原体(Mhp)LAP为模型,研究其理化特性和高级结构,探索LAP抑制剂乌苯美司(Bestatin)对支原体生长的影响。本研究首先用Clustal Omega进行序列同源性比较,分析LAP活性位点在不同支原体中的保守情况。然后采用GST融合标签表达猪肺炎支原体LAP蛋白,通过GST亲和层析和分子筛层析纯化蛋白,圆二色谱测定LAP的二级结构,用Alpha fold 2预测三级结构。最后用Bestatin与猪、鸡、羊等不同种属的支原体共培养来观察其影响。结果表明虽然总体序列同源性不高,但是LAP酶活中心的关键位点在常见支原体相对保守。猪肺炎支原体LAP可以通过GST标签进行可溶性表达。酶切GST标签后,分子筛层析显示LAP是六聚体,圆二色谱表明LAP具有正确的二级结构。预测的LAP三级结构显示其具有保守的底物结合关键位点。Bestatin对不同...  相似文献   

丝尾垫刃属新种的描述(线虫门:垫刃科)Ⅰ.辣椒丝尾垫刃线虫新种和南方丝尾垫刃线虫新种     

谢辉  冯志新 《植物病理学报》1996,26(2):177-180

 辣椒丝尾垫刃线虫新种(Filenchus capsici n.sp.)和南方丝尾垫刃线虫新种(Filenchus australis n.sp.)采集于香港大龙农场的辣椒(Capsicum frutescens)根际土壤。前者以排泄孔、中食道球和阴门的位置靠后以及阴道斜向前伸等特征区别于近似种阿富汗尼卡斯丝尾垫刃线虫(F.afghanicus(Khan&Khan,1978) Raski&Geraert,1987)。后者以微缢缩的头部以及排泄孔和阴门的位置靠后等特征区别于近似种毛发形尾丝尾垫刃线虫(Filenchus criniformicaudatus(Kazachenko,1975) Siddiqi,1986)。  相似文献   

粗皮侧耳粗毒素的提取及杀线虫活性的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

向红琼  冯志新 《云南农业大学学报(自然科学版)》1999,14(Z1):82-87

 粗皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌物能产生杀线虫毒素.用乙酸乙酯从该菌丝麦粒培养物中提取的粗毒素具有杀线虫活性,稀释10倍,击倒95%的线虫(Panagrellus redivivus)仅需4.5h.该菌产生的毒素可溶于水及各种有机溶剂, 对热具有高度的稳定性,对线虫的活性具有一定的广谱性.  相似文献   

香港地区潜根线虫种类记述   总被引：1，自引：0，他引：1       下载免费PDF全文

谢辉  冯志新 《华南农业大学学报》2000,21(1):53-55

记述了采自香港水稻根际的２种潜根线虫：尖突潜根线虫和水稻根线虫,它们均革区新纪录种。  相似文献   

猪肺炎支原体P97R1基因在毕赤酵母中的分泌表达及初步应用(英文)     

刘茂军  祝永琴  冯志新  吴叙苏  邵国青 《农业科学与技术》2013,(5):710-715

[目的]研究猪肺炎支原体P97R1基因在毕赤酵母中的分泌表达及初步应用。[方法]根据Genbank中猪肺炎支原体P97R1基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白P97R1基因,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P97R1;PICZα-A-P97R1经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株GS115;将PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌P97R1蛋白于发酵上清液中,并通过SDS-PAGE电泳以及Western-blotting对其进行鉴定。[结果]P97R1蛋白基因获得了分泌性表达,表达量达499μg/ml,而且具有良好的反应原性;同时用表达蛋白经过各项优化建立了猪肺炎支原体间接ELISA检测方法,经检测该方法具有良好的特异性和重复性。[结论]该研究为猪肺炎支原体免疫检测试剂盒和基因工程疫苗的研制奠定了基础。  相似文献   

花生根结线虫对花生的致病性研究   总被引：5，自引：0，他引：5  

宾淑英  冯志新 《仲恺农业技术学院学报》1993,6(1):7-13

本研究以花生根结线虫（Meloidogyne arenaria(Neal.1889)chiwood,1949)的二龄幼虫和病土作接种试验，通过对线虫侵染、危害情况和茯生病组织切片的观察，进一步证明花生根结线虫对花生的致病性。  相似文献   

猪肺炎支原体P46基因的克隆及表达     

迟灵芝  刘茂军  冯志新  单虎  邵国青 《江苏农业学报》2008,24(3)

参考GenBank登录的猪肺炎支原体(Mhp)P46基因序列,利用Primer 5.0软件设计合成引物,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)对猪肺炎支原体P46基因的3个位点进行定点突变,将此突变基因插入到表达载体pET-32a( )中,经IPTG诱导后成功地在大肠杆菌Rosetta(DE3)宿主菌中表达分子量约为63 500的融合蛋白.Western blotting分析表明,该融合蛋白具有较好的免疫原性.为猪肺炎支原体抗体ELISA检测方法的建立奠定了基础.  相似文献   

猪肺炎支原体P36蛋白间接ELISA检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

祝永琴  冯志新  刘茂军  吴叙苏  邵国青 《江苏农业学报》2010,26(5)

将已构建的含有猪肺炎支原体P36基因的酵母表达质粒pPICZα-A-P36在酵母菌X-33里进行表达,并对表达的蛋白进行Western-blotting鉴定。将其作为包被抗原包被酶标板,用羊抗猪IgG-HRP作为酶标二抗,并分别对抗原浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度以及作用时间等进行了优化,最终建立了稳定的抗猪肺炎支原体IgG的间接ELISA检测方法。应用该方法检测猪鼻支原体、猪絮状支原体、猪圆环病毒阳性血清等都是阴性,说明该方法具有良好的特异性。批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数均小于8%,说明该方法具有良好的重复性。利用该方法检测猪肺炎支原体活疫苗(168株)免疫猪血清中IgG的动态变化,结果表明,免疫猪血清中的IgG在免疫后分泌逐渐增加,直至免疫后8周,而经强毒攻毒后抗体滴度明显增高。  相似文献   

粗皮侧耳粗毒素的杀线虫活性及其基本特性   总被引：5，自引：0，他引：5  

向红琼  冯志新 《中国农业科学》2002,35(11):1349-1355

 粗皮侧耳 (Pleurotusostreatus)菌物能产生杀线虫毒素。菌丝细胞提取物和菌丝液体培养滤液对植物寄生线虫的卵、幼虫及成虫均具有较强的毒杀活性 ;用乙酸乙酯从该菌丝麦粒培养物中提取的粗毒素稀释 10倍 ,击倒 95 %的线虫 (Panagrellusredivivus)仅需 4 .5h ;该菌产生的毒素可溶于水及各种有机溶剂 ,石油醚除外 ,对热和酸碱均具有高度的稳定性 ,尤其对酸的稳定性强 ,对线虫的毒杀活性具有一定的广谱性。  相似文献   

猪支原体肺炎活疫苗(168株)滴鼻免疫保护效果的研究     

杨若松  邢宪平  冯志新  华利忠  熊祺琰  Hassan Zackaria Ali Ishag  邵国青 《河北农业大学学报》2016,(4):93-97

本研究通过滴鼻免疫新途径免疫猪支原体肺炎活疫苗168株,与肺内免疫组及对照组进行比较,来确定滴鼻免疫猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫保护力。将20只猪随机分为肺内免疫组、滴鼻免疫组、健康对照组和攻毒对照组。定期观察和检测各组猪免疫后的临床症状。结果表明:滴鼻免疫组免疫后,猪群体温正常,无免疫引起的局部或全身不良反应,免疫途径安全可行;滴鼻免疫组和肺内免疫组与健康对照组相比,SIgA水平显著升高,差异极显著(P0.01),但滴鼻免疫组与肺内免疫组相比,差异不显著。流式细胞仪检测显示CD4+数值未发生显著性变化。肺脏剖检评分显示滴鼻免疫组的肺脏的病变水平与攻毒对照组相比呈极显著降低(P0.01),保护率达到60%,相对低于肺内免疫组100%的保护率。猪支原体肺炎活疫苗(168株)通过滴鼻免疫方式,可以产生较好的免疫保护力。  相似文献