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用RT-PCR方法扩增了陕西省近期猪瘟流行野毒株E2基因，并将其克隆到pMD18-T载体；经转化、筛选、鉴定后，测定了核苷酸序列，根据C株、Brescia株和Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行gp55氨基酸序列推导，并进行同源性比较。结果表明，该猪瘟流行毒株的E2核苷酸序列与C株、Brescia株和Alfort株的E2核苷酸序列同源性分别为81．9％、83．4％和83．5％；相应地，gp55氨基酸同源性分别为94．8％、95．6％和95．3％。将此E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb后获得了重组质粒pFBHT-E2，进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中，发生转座作用；经抗性及蓝白斑筛选得到了含E2基因的重组DNA，将其命名为rBacmid-E2。此研究为进一步在昆虫细胞中表达E2基因、开发研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础。 相似文献
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[目的 ]快速灵敏检测猪伪狂犬病毒(PRV)[方法 ]根据PRV g B基因设计特异性引物,建立了PRV纳米PCR检测方法。[结果 ]PRV纳米PCR方法的最低检出限为10拷贝/μL,其敏感性比未添加纳米金的对照PCR提高100倍;建立的纳米PCR与猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒等常见猪病毒性病原均无交叉反应。应用纳米PCR和PRV国家标准中的PCR方法,对2014—2016年期间采集自17个省市发病猪场的148份临床样品进行平行检测,PRV纳米PCR的阳性检出率为49.3%(73/148),PRV国标PCR方法的阳性检出率为23.6%(35/148),并且PRV纳米PCR检测为阳性,而PRV国标PCR方法检测为阴性的38份样品,测序结果均确认为PRV阳性。[结论 ]本研究建立的纳米PCR检测方法敏感特异,可用于猪伪狂犬病的病原学检测。 相似文献
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为建立一种快速检测1型、2型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的通用RT-PCR方法,根据GenBank上收录的64株1型、2型BVDV以及1株猪瘟病毒(CSFV)的全基因组序列,应用Primer 6.0软件设计针对5'-UTR区域的1型、2型BVDV特异性通用引物对,扩增目的片段,并对该方法进行特异性、敏感性、重复性试验及利用该方法开展临床样品检测。结果显示:扩增的目的片段长度约为302 bp;该方法的灵敏度为2.09×102 copies/μL,无非特异性扩增,且重复性良好。对采自山东省发病牛场的13份鼻腔棉拭子和9份牛血清临床样品进行检测,发现有8份鼻腔棉拭子和8份血清为BVDV阳性,随机抽取4份阳性样品送测序,发现3份样品毒株为1型BVDV,1份样品还需进一步鉴定。本研究建立的RT-PCR方法可实现对1型、2型BVDV核酸的特异性检测,也可用于该病的流行病学调查研究。 相似文献
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海洋微生物溶菌酶体外抗菌抗病毒活性研究 总被引：3，自引：0，他引：3
【目的】初步研究海洋微生物溶菌酶S-12-86（MMLS）体外抑菌与抗病毒活性。【方法】采用最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度法（MBC）测定MMLS对部分模式菌的抑菌和杀菌作用；通过细胞病变抑制实验法（CPE），研究MMLS在猪肾细胞（PK-15）中对伪狂犬病毒（PRV）的抑制作用。【结果】MMLS对革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌及真菌均有抑菌作用，抑菌作用的浓度范围在0.25～4.00 mg•ml-1之间，杀菌作用的浓度范围一般在0.25～8.00 mg•ml-1之间。在电镜下，可见MMLS能够使大部分白色念珠球菌的细胞壁出现严重变形，细胞质出现不均匀，细菌胞质中的空腔增多。MMLS的TC50为100.0 µg•ml-1，抑制伪狂犬病毒的半数有效浓度（EC50）为0.46 µg•ml-1，治疗指数（TI）为217；在病毒感染后的0、2、4、6和8 h添加MMLS，均有抑制伪狂犬病毒的作用。【结论】MMLS具有广谱的抑菌作用和抗伪狂犬病毒作用。 相似文献
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