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本研究旨在探讨马兜铃酸肾病（AAN）中标志性因子的表达变化。30只小鼠灌胃8 mg/(kg·d) 马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ),于不同时间处死,用常规病理切片染色法观察肾脏不同时间段的病理变化程度,以实时荧光定量PCR和Western blotting检查各组小鼠肾组织细胞标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、角蛋白18（CK-18）、波形蛋白（vimentin）的表达变化。结果显示随着AAⅠ用药时间的延长,肾脏损伤逐渐加重,并证实AAⅠ可诱导小鼠肾脏发生上皮-间质转分化(EMT),促进α-SMA、vimentin的mRNA及蛋白表达增加,抑制CK-18的表达,为AAN更深一步的机制研究提供有力的理论基础。 相似文献
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建立有效的脂质体瞬时转染法,将小干扰RNA(siRNA)转染至小鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs),从而抑制其乙酰化组蛋白酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)的表达。使用阳离子脂质体法瞬时转染小鼠肾小管上皮细胞,用荧光标记siRNA(FAM-siRNA)筛选转染比例,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)确定最优条件并检测不同位点(374,525和822)HDAC1-siRNA的抑制效果,噻唑蓝(MTT)法检测不同时间点HDAC1-siRNA对RTECs增殖的影响,并设立曲古霉素处置组作为试验对照。荧光表达和Real-time PCR结果显示30 pmol siRNA∶1.5 μL LipofectamineTM 2000为最佳转染条件,HDAC1-374的干扰效果最明显。MTT检测结果显示,HDAC1-374与TSA一致,证实HDAC1-siRNA能有效抑制RTECs的增殖。本试验利用脂质体瞬时转染siRNA法成功抑制了RTECs中HDAC1的表达。 相似文献
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连翘酯苷对IFN-α和Mx1表达的影响 总被引：3，自引：0，他引：3
【目的】探讨连翘酯苷作用于感染PCV2的小鼠模型后,对IFN-α和Mx1表达的影响,以评价连翘酯苷的抗病毒作用。【方法】复制PCV2感染小鼠模型。以(2、4、10 mg?mL-1)连翘酯苷分为高、中、低 3个剂量组,并设空白对照组和病毒对照组。给药12、24、36 h后,分别提取小鼠肺组织总RNA和总蛋白,应用实时荧光定量PCR检测IFN-α、Mx1 mRNA含量,采用Western blotting检测Mx1蛋白的表达水平。【结果】空白对照组小鼠肺组织中Mx1和IFN-α无表达,病毒对照组少量表达。随着连翘酯苷浓度的升高,IFN-α和Mx1 mRNA水平逐步升高,两者的表达量呈现平行相关;高剂量组中IFN-α和Mx1表达量最高(P＜0.001);随着药物作用时间的延长表达量降低,12 h时达到最高(P＜0.001),其后逐渐下降。【结论】昆明小鼠适于PCV2感染模型的建立。中药连翘酯苷能显著上调IFN-α和Mx1的表达,并在给予高剂量药物后12 h发挥显著的抗病毒作用。Mx1蛋白与病毒的感染密切相关,可用于病毒感染的早期诊断,及具有较好的应用前景。 相似文献
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应用RT-PCR技术扩增鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域（CHIFNAR2 EC）基因片段,将扩增产物克隆至pMD-18T,转化J M109感受态。重组质粒与表达载体pGEX-6P-1经双酶切后构建重组表达质粒pGEX-6P-CHIF-NAR2EC,转入BL21,提取质粒酶切和测序鉴定。测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99%。用IPTG诱导表达,对诱导条件进行初步优化,表达蛋白主要以包涵体的形式存在。通过切胶的方法进行纯化,获取具有较高纯度的融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western Blot检测显示融合蛋白分子量大小约为50 KD,采用抗GST抗体进行Western Blot,成功检测到特异性目的条带。 相似文献
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45只6周龄昆明小鼠,随机分为3组:单次攻毒组(A组)、连续攻毒组(B组)和正常对照组(C组)各15只。A组于试验1 d先后接种PRRSV和PCV-2,B组于1,3,5 d接种PRRSV和PCV-2,C组于1 d接种MEM细胞培养液,各组于试验后7,14,21,28,35 d随机选3只采血后处死,采用体质量测定、抗体ELISA、荧光定量PCR、肉眼和显微病理观察等4项检测指标进行模型鉴定。结果显示,与C组相比,A组和B组小鼠体质量增率减慢;肺脏出现典型的间质性肺炎病变;腹股沟淋巴结肿大,淋巴细胞坏死;脾脏淋巴细胞缺失,被膜散在出血;肝静脉淤血;抗体检测均呈阳性;荧光定量PCR检测证实,C组不存在病毒复制,A、B组小鼠被检组织均存在病毒复制,相对病毒含量在淋巴结中较其他组织差异显著(P0.01)。结果表明,试验已成功建立PRRSV和PCV-2共感染昆明小鼠疾病模型。 相似文献
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磺胺甲噁唑抗原合成及其抗体的制备 总被引：3，自引：2，他引：1
采用重氮化法将磺胺甲噁唑(SMZ)与人血清白蛋白偶联形成免疫原,免疫大白兔制备多克隆抗体。通过紫外扫描和高效液相色谱分析偶联物,免疫抗原的偶联率为19∶1,改良辛酸-饱和硫酸铵纯化抗体,多克隆抗体效价达1∶105,间接酶联免疫吸附试验建立的SMZ检测的线性范围在0.1ng/mL~10μg/mL之间,50%抑制率检测限为22.53ng/mL,抗体与磺胺甲噁唑交叉反应率为100%,与其他7种磺胺药交叉反应率很低。表明制备的磺胺甲噁唑多克隆抗体具有很高的特异性,可用于SMZ在动物性产品中残留的检测。 相似文献
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为提供兽医临床用药治疗白内障的理论依据,选取健康成年犬15只(30眼),随机分为模型组、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)组、牛磺酸、EGCG联合牛磺酸组和对照组,每组6个重复。除对照组外其他组用fenton液造模。裂隙灯观察晶状体的混浊情况,并根据国际通用的晶状体混浊分类体系Ⅲ(LOCSⅢ)分类,当混浊达到II期时用药治疗。临床用药40d后,取出晶状体透射电镜观察形态结构的变化;免疫组织化学法测定晶状体上皮细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达水平;qRT-PCR测定其mRNA的表达水平。结果表明,与模型组相比联合组中Bax/Bcl-2的比值和Caspase-3的表达较模型组显著降低(P<0.05),证明联合用药可以通过上调凋亡基因Bcl-2的表达抑制细胞凋亡。 相似文献
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犬白内障是常见的眼科疾病,发病率高,严重影响犬的视力。有研究表明氧化损伤是重要的发病机制之一,目前对其疾病模型与发病机理研究较少。本研究旨在建立犬老年性白内障动物模型,为其后续机理研究奠定基础。本试验选取健康成年犬10只,随机选取6只为模型组,4只为对照组,用Fenton液造模。裂隙灯观察晶状体的混浊情况,光镜和透射电镜观察形态结构的变化,测定晶状体生化指标的改变,判定造模结果。与对照组相比,模型组晶状体混浊度变化明显,光镜和电镜下能观察到凋亡现象,T-SOD、GSH-Px和MDA值差异显著(P<0.05)。本试验证明用Fenton液囊袋内注射即可成功建立犬老年性白内障疾病模型。 相似文献
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抗氨苄青霉素单克隆抗体的制备及初步鉴定 总被引：4，自引：2，他引：2
利用碳化二亚胺(EDC)法将氨苄青 霉素(Ampicillin,AMP)与匙孔嘁血蓝蛋白 (mcKLH)偶联制备免疫原免疫Balb/c小鼠, 应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓 瘤细胞(SP2/0)融合,建立分泌氨苄青霉素单 克隆抗体的杂交瘤细胞株。同上方法将氨苄 青霉素连接到阳离子化的牛血清白蛋白(cB SA)上制备检测抗原,对AMP KLH偶联物 免疫小鼠产生的抗体进行检测。通过对杂交 瘤细胞培养上清的检测、鉴定,筛选出8株高 亲和力的杂交瘤细胞株,用其制备的腹水 ELISA效价达到2×106,纯化后的单克隆抗 体(McAb)可以应用于氨苄青霉素残留的快 速检测。 相似文献