重组鸭α-干扰素的表达与鉴定     

郭艳丽  朱善元  徐佳忆  吴植  王永娟 《中国家禽》2019,(18):60-64

根据大肠杆菌密码子的偏好性,试验对GenBank中已经发表的鸭α-干扰素基因序列进行密码子优化,人工合成后构建原核表达质粒pET30a-DuIFNα-ELP;将重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达制备DuIFNα-ELP;通过SDS-PAGE切胶方法得到纯化的DuIFNα-ELP;纯化产物免疫小鼠后收获血清,用Western blotting验证免疫血清的特异性,并用ELISA法检测其特异性抗体滴度。根据类弹性蛋白多肽(ELP)温度敏感的可逆相变特性,通过重复可逆相变循环(ITC),在高盐离子浓度和临界温度下纯化重组蛋白,并采用微量细胞病变抑制法在MDCK/VSV系统中检测重组蛋白的抗病毒活性。结果表明:合成的重组鸭α-干扰素基因能成功表达,重组蛋白DuIFNα-ELP约80 ku,免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价为1∶1000000。抗病毒试验检测重组DuIFNα-ELP的抗病毒活性为1.0×106U/mL,比活性为1.25×106U/mg。这一结果为研制广谱、安全、高效的基因工程鸭α-干扰素提供参考,也为检测体内外DuIFNα的表达奠定了基础。  相似文献   

定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒游离受体夹心ELISA方法的建立与应用     

夏文龙  吴植  郭长明  朱善元  余树培  张鑫宇  夏晓莉  孙怀昌 《中国畜牧兽医》2018,45(4):881-887

为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）游离受体定量检测方法,本试验用表达猪唾液酸黏附素（Sn）游离受体的重组腺病毒rAd-Sn4D-Fc感染PK-15细胞,以细胞培养上清纯化的Sn4D-Fc游离受体作为标准抗原,鼠抗猪Sn免疫血清为一抗,生物素标记兔抗猪Sn多克隆抗体为二抗,建立定量检测Sn4D-Fc游离受体的双抗体夹心ELISA方法;用rAd-Sn4D-Fc注射仔猪,定期采集血清进行游离受体检测。结果显示,纯化Sn4D-Fc标准抗原的纯度为94.3%,能被Sn免疫血清识别;一抗的最佳工作浓度为5 μg/mL蛋白,二抗的最佳稀释度为1：4 000,夹心ELISA检测标准抗原的灵敏度为0.4 ng/mL,对照抗原无交叉反应;夹心ELISA能从重组腺病毒注射猪血清中检测到Sn4D-Fc游离受体,最高表达量为6.54 ng/mL,持续时间为15 d。研究结果表明,建立的双抗体夹心ELISA可用于PRRSV游离受体的体内外定量检测。  相似文献   

重组禽腺联病毒介导的人溶菌酶在蛋清中的表达     

吴植  朱善元  顾玲玲  张继玲  吴萌  崔潇婷  王安平 《动物医学进展》2018,(4)

为在鸡蛋清中表达人溶菌酶(hLYZ),将含有hLYZ输卵管特异表达盒的重组禽腺联病毒以每只鸡2×10~(11)经翅静脉注射正常产蛋母鸡,收集蛋清对重组蛋白的表达情况进行检测。RT-PCR结果显示,hLYZ只在输卵管部位表达,Western blot结果显示重组蛋白大小正确,抑菌活性表明注射重组病毒后的蛋清的抑菌活性明显优于正常蛋清的。动态表达水平检测结果显示,注射病毒后第1周即可以检测到重组hLYZ的表达,第5周时表达量最高,达68.3μg/mL,表达时间持续3个月之久。以上结果表明,重组禽腺联病毒能介导人溶菌酶在蛋清中的高效、长时表达,为人溶菌酶的开发应用提供了新途径。  相似文献   

氟苯尼考对猪多杀性巴杆菌病的临床治疗试验     

桂文龙  胡新岗  吴植  唐露露  刘琦 《黑龙江畜牧兽医》2014,(2):85-87

本试验研究了氟苯尼考对猪多杀性巴杆菌病临床病例的治疗效果，结果表明：试验组氟苯尼考的平均治疗有效率为96．59％；对照组硫酸卡那·霉素和青、链霉素的平均治疗有效率分别为85．7l％和53．50％，与试验组差异极显著（P〈0．01）。  相似文献   

犬细小病毒病DNA疫苗的研究进展     

吴植  曹斌  王安平  王永娟  吴鹏  朱建华 《江苏农业科学》2015,(7)

犬细小病毒病是犬的一种具有高度接触性的烈性传染病。近年来,在犬细小病毒新型疫苗研究方面取得了新的进展,特别是DNA疫苗,笔者就犬细小病毒DNA疫苗的作用机理、抗原基因、载体选择、分子佐剂的研究进展方面进行系列论述。  相似文献   

浮山县“四步”工作法构筑村级后备干部网络     

吴植 《山西农业:致富科技版》2011,(7):49-49

为切实解决村级班子后继乏人的问题，山西省浮山县采取“四步“工作法。着力建立后备干部网络，培养一批优秀的村级后备干部。“四步”工作法的内容有。  相似文献   

猪病防治现场教学法的探索     

解慧梅  张君胜  吴植  弓素梅  郑丽兰 《黑龙江畜牧兽医》2011,(19)

高等职业教育的人才培养目标是培养面向生产、建设、管理、服务第一线的具有较强实践能力的应用型高级技术人才;因此,提高学生的动手能力,一直是高等职业教育教学改革的方向和目标。猪病防治是兽医和畜牧兽医专业主要课程之一,为了让学生学好  相似文献   

痛风雏鹅肠道菌群通过TLR4/MyD88/NF-κB通路促进肾损伤的研究     

朱道仙  吴植  陆江  黄涛  刘莉 《畜牧兽医学报》2021,52(2):543-552

旨在研究痛风雏鹅的肠道菌群对肾损伤的影响及作用机制。本研究选取具有典型痛风特征的雏鹅15只,相同日龄及生长环境下的健康雏鹅15只,利用16S rDNA测序技术分析盲肠内容物中菌群的差异;用改良苦味酸法测定血清肌酐（Cr）,用酶比色法测定血清尿酸（UA）,用脲酶-谷氨酸脱氢酶法测定血清尿素氮（BUN）;用RT-qPCR和Western blot法测定肾组织Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子（MyD88）、核转录因子-κB （NF-κB）、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子ɑ（TNF-ɑ）及白细胞介素6（IL-6）的mRNA和蛋白表达量。并将肠道菌群移植给无菌小鼠进行验证。结果显示：1）与健康雏鹅比较,痛风雏鹅肠道菌群16S rDNA测序所得操作分类单元（OTUs）数量、Chao 1指数及Shannon指数均显著降低（P<0.01）,变形菌门、埃希菌属、变形菌属及肠球菌属等细菌丰度显著增加,痛风雏鹅肠道菌群在免疫系统、细菌感染、膜传输及核苷酸代谢等代谢途径参与度较高;2）与健康雏鹅比较,痛风雏鹅肾组织中TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β、TNF-ɑ及IL-6的mRNA表达及蛋白表达均显著升高（P<0.05或P<0.01）,且这些分子表达量与Cr、BUN及UA呈正相关,与埃希菌属、变形菌属及肠球菌属等菌属丰度呈强正相关关系;3）移植痛风雏鹅肠道菌群小鼠的肾小管发生变性,肾组织TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA表达量及血中Cr、BUN、肾损伤因子-1（KIM-1）等水平显著高于移植健康雏鹅菌群的小鼠;给予移植痛风雏鹅菌群小鼠TAK-242后,可回调这些变化。综上表明,痛风雏鹅肠道菌群发生了变化,并可激活LTR4/MyD88/NF-κB通路,诱发炎症反应,促进肾损伤的发生。  相似文献   

泰州市部分羊场绦虫病的调查研究     

桂文龙  匡存林  杜宗沛  吴植 《黑龙江畜牧兽医》2010,(9):78-79

<正>羊绦虫病主要是由多种绦虫寄生于羊小肠内引起的慢性、消耗性的寄生虫病,其特点是羊精神沉郁、贫血、消瘦、腹泻,甚至死亡。目前,泰州市流行的绦虫病主要是羊绦虫病,约占牛羊绦虫病的94%以上,对当年生产的羔羊危害尤为严重。为了掌握泰州  相似文献   

江苏中部地区鹅副粘病毒的分离与鉴定     

杜宗沛  吴植  徐小琴  叶滨 《安徽农业科学》2013,41(9):3901-3901,3904

[目的]调查江苏省泰州市某鹅场鹅大批死亡的原因。[方法]通过流行病学调查、临床诊断、病理变化、动物回归感染试验、血清学检查等对江苏省泰州市某鹅场发生的疑似鹅副黏病毒病的病料进行病原分离与鉴定。[结果]该病毒能使SPF鸡胚以及10日龄鹅和鸡全部死亡,能凝集鸡红细胞并能被NDV标准阳性血清所抑制,不能被禽流感病毒标准阳性血清所抑制。发病死亡与人工感染死亡的临诊症状和病理变化基本一致。经电镜观察发现该病毒颗粒呈圆形,直径在150 nm左右,有囊膜及纤突。该分离毒株经灭活后免疫鹅群,取到良好的防治效果。[结论]该病毒为禽Ⅰ型副黏病毒,属副黏病毒科副黏病毒属。  相似文献