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旨在研究PRSS35在鸡卵泡中的表达部位及在不同大小等级前卵泡内膜细胞中的表达模式与雌激素分泌的关系。选取直径为1～2 mm的小白卵泡、3～5 mm的大白卵泡、6～8 mm的小黄卵泡和9～12 mm的大黄卵泡,应用免疫组织化学技术对PRSS35在大白卵泡和小黄卵泡中的表达进行组织定位;分别抽取4种卵泡的卵泡液,并通过ELISA法测定各卵泡液中的雌激素(E_2)含量;刮取卵泡内膜细胞,分别利用QRT-PCR和Western blot技术检测 PRSS35 mRNA和蛋白在蛋鸡不同大小等级前卵泡内膜细胞中的表达情况。结果显示,PRSS35在蛋鸡卵泡颗粒细胞层、膜细胞层和卵丘细胞均有表达; PRSS35mRNA和蛋白在小黄卵泡中的含量均显著高于其他卵泡;E_2在小黄卵泡卵泡液中的含量显著高于其他卵泡,在小白卵泡和大白卵泡卵泡液中显著高于大黄卵泡。推测PRSS35在小黄卵泡中可能会促进卵泡内膜细胞分泌E_2,从而影响卵泡的选择。 相似文献
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为探究不同生活环境下锦鲤肠道微生物的差异,本研究采用16S rRNA高通量测序技术对野生和养殖锦鲤肠道微生物组成进行分析。结果表明,锦鲤肠道微生物中的优势门为变形菌门（Proteobacteria,29.81%）、蓝细菌门（Cyanobacteria,25.57%）、绿弯菌门（Chloroflexi,18.16%）;不同环境下锦鲤肠道菌群在数量和群落结构上都有明显差异,在属水平上,养殖环境下优势菌属有红细菌属（Rhodobacter）、藤黄色杆菌属（Luteolibacter）、泉发菌属（Crenothrix）,野生环境下优势菌属有绿丝菌属（Chloronema）、纤发鞘丝蓝细菌属（Leptolyngbya）、暖绳菌属（Caldilinea）;在种水平上,养殖环境下优势菌有Methylobacteriumadhaesivum、琥珀黄杆菌（Flavobacterium succinicans）、胭脂甲杆菌（Methylobacterium komagatae）、湖泊玫瑰单胞菌（Roseomonas lacus）;野生环境下优势菌有空腔污水球菌（Defluviicoccus vanus）、... 相似文献
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为获得蛋鸡丝氨酸蛋白酶23（PRSS23）的CDS序列并分析其结构域,试验根据NCBI中公布的其它物种PRSS23的mRNA序列,设计了特异性引物,采用RT-PCR技术扩增PRSS23 CDS全序列。BLAST比对发现,与其它物种PRSS23预测序列以及氨基酸序列同源性分别为99%、92%、91%、86%和100%、96%、96%、90%;通过分析该序列的三级结构,发现在第117到362位氨基酸之间含有一个典型的Tyrp-SPc结构域,该结构域具有典型丝氨酸肽链内切酶活性;通过对其蛋白信号肽预测分析,发现序列中含有信号肽,信号锚定的可能性为72.8%。 相似文献
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胴体生长发育是影响山羊养殖效益的重要评价指标,旨在通过RNA-Seq技术挖掘不同性别贵州白山羊生长发育的关键候选基因,为贵州白山羊生长发育研究提供理论依据,以同等饲养水平条件下贵州白山羊为研究对象,测定2周龄不同性别贵州白山羊的屠宰性能指标,通过背最长肌转录组分析,筛选差异表达基因,分析相关基因的信号通路,最后通过RT-qPCR对筛选的基因进行验证。结果表明,测序得到的Raw reads进行过滤后,6个样本共得到78.99 Gb Clean Data,单个样本获得Clean reads在83 030 104～95 739 024条,各样本与参考基因组的比对效率在93.75%～94.79%,共获得25 089个表达基因,筛选差异表达基因共获得1 077个差异基因,其中194个为新发现转录本基因,发现的差异基因中563个在公羊背最长肌中表达显著上调,514个表达显著下调。对获得的1 077个差异基因进行GO功能富集分析,其中587个为显著富集(Q-value≥0.05),主要分为三大类35个亚类。KEGG信号通路分析发现,这些差异基因共参与243条信号通路,其中参与PI3K/AKT信号通路... 相似文献
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目前在蛋鸡育种阶段存在着很多的问题,制约蛋鸡产业的进一步发展。从蛋鸡育种的常见问题与选育要点展开了分析,希望能对当前的鸡蛋选育工作带来一定帮助。 相似文献
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为研究牛卵泡发育过程中促进卵泡生长成为优势卵泡的重要调控因子及其表达模式,采集牛卵巢上的最大卵泡(8～10 mm)与第二大卵泡(5～8 mm),通过测定卵泡液中雌二醇(E_2)与孕激素(P)的水平,确定优势卵泡(DF)和从属卵泡(SF)。刮取DF和SF中的颗粒细胞,提取其总RNA并建立文库,通过Illumina平台进行测序。用SOAP V2.0软件将测序获得的序列与牛参考基因组数据库进行比对,获得mRNA序列;用DESeq 2软件对获得的mRNA进行差异表达分析,并对其中表达上调的基因进行GO分析及KEGG信号通路分析;最后通过实时荧光定量PCR对筛选出的具有代表性的上调表达基因进行验证。通过测序共获得32 346个基因,其中在DF颗粒细胞中表达显著上调的基因有194个。GO分析结果显示,这些表达上调的基因共分为3大类33组,其中参与生物学过程(Biological process)的基因占60.6%;与细胞组分(Cellular component)相关基因占21.2%,其中31个基因参与了细胞质功能;与分子功能(Molecular fuction)相关的基因占18.2%,其中18个基因参与金属离子结合。KEGG信号通路分析共发现4条通路,其中基因富集最为显著的是轴突导向通路。实时荧光定量PCR结果表明,细胞色素P450 19A1基因(CYP19A1)在DF颗粒细胞中的相对表达量极显著高于SF(P0.01),硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、脑表达X2(BEX2)和丝氨酸蛋白酶35(PRSS35)基因在DF颗粒细胞中的相对表达量显著高于SF(P0.05),与Illumina测序表达趋势一致。综上,PRSS35、CYP19A1、BEX2和TXNIP在牛卵泡的发育过程中可能会起促进作用,最终引起卵泡排卵。 相似文献
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PDF2和ODF1转录组测序筛选牛卵泡发育相关基因 总被引：1，自引：0，他引：1
旨在筛选牛卵泡发育相关基因及其表达模式。本研究选取9头青年母牛,同期发情处理后,采集卵泡波中出现偏差前的小卵泡PDF2(The small follicle at onset of predeviation)和出现偏差后的最大卵泡ODF1(The largest follicle at onset of deviation),分离颗粒细胞(Granulesa cells,GCs),提取总RNA,并进行转录组测序;经牛RefSeq数据库搜索和差异表达基因筛选,进行GO(Gene ontology)分析;随机选择5个基因(MAPK13、CYP19A1、GREB1、SERPINE2、GSTA5)进行qRT-PCR表达量验证分析。结果表明:PDF2和ODF1转录组中共获得RPKM(The reads per kilobase per million reads)值≥0.5的表达基因15 413个,其中表达差异倍数(Fold change)≥2的差异表达基因共651个;对651个差异表达基因进行GO分析表明,参与生物过程(Biological process,BP)的基因占41.66%,分子功能(Molecular function,MF)占17.24%,细胞组分(Cellular component,CC)占41.10%;GO分析结合Genecards基因功能查询,共筛选出13个下调基因和17个上调基因与牛卵泡发育直接相关;CYP19A1、GREB1、SERPINE2在优势卵泡(Donminant follicles,DF)的表达量极显著高于从属卵泡(Subordinate follicle,SF)(P0.01),MAPK13在SF表达量极显著高于DF(P0.01),GSTA5在SF表达量显著高于DF(P0.05)。5个基因差异表达趋势与转录组测序结果完全相符,也进一步证明了转录组测序结果的可信度,为深入探讨基因调控牛卵泡发育奠定了基础。 相似文献
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为确定miR-27a与SCF的靶向关系,剪取成年棕色小鼠和灰色小鼠的皮肤组织,q RT-PCR检测miR-27a和SCF的表达量,选用Pic Tar、Target Scan和DIANA-micro T 3个数据库对miR-27a进行靶基因预测,构建miR-27a的真核表达载体和SCF 3'UTR(含种子序列)的双荧光表达载体,并对种子序列进行突变处理,以miR-27a过表达载体或NC载体(空载)组合SCF 3'UTR双荧光报告载体或SCF 3'UTR的突变载体共转染HEK 293 T细胞,48 h后检测双荧光素酶活性。q RT-PCR结果显示,miR-27a在灰色小鼠皮肤中的表达量极显著高于棕色小鼠(P0.01),而SCF在棕色小鼠皮肤中的表达量显著高于灰色小鼠(P0.05);3个数据库的分析结果均显示,SCF是miR-27a的靶基因;双荧光报告试验结果显示,miR-27a能显著抑制双荧光活性,即miR-27a能与SCF 3'UTR的种子序列结合。综上所述,SCF是miR-27a的靶基因。 相似文献