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为建立一种快速高通量的荷斯坦奶牛脊柱畸形综合征(Complex vertebral malformation,CVM)变性高效液相色谱(DHPLC)的分子检测方法,根据CVM是由于SLC35A3基因第4外显子559位处发生G→T突变的遗传学基础,设计了1对引物对3种不同基因型的基因材料PCR扩增,利用Navigator软件分析确定检测温度、洗脱浓度及梯度等条件,建立检测方法。对55份进境荷斯坦奶牛血样进行检测,发现有1例为隐性基因携带者,将PCR产物送测序,结果与DHPLC检测结果一致。研究表明,PCR-DHPLC是一种可有效用于荷斯坦奶牛脊椎畸形综合征检测的新方法。 相似文献
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为制备含有病毒性出血性败血症病毒(VHSV)N基因的RNA病毒样颗粒标准样品,通过RT-RCR扩增VHSV的N基因,将其克隆至含有组氨酸标签的pNH-MS_2his载体中,构建重组原核表达载体pNHMS_2his-N;将重组质粒pNH-MS_2his-N转化至表达菌株BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG诱导表达、纯化;对病毒样颗粒进行鉴定及稳定性试验,使用数字PCR对病毒样颗粒进行定值。结果显示,该病毒样颗粒含VHSV N基因序列,并且稳定性良好,定值结果为8×10~6 copies/m L。结果表明,构建的病毒样颗粒可以作为RNA病毒检测时的标准品和质控品使用。 相似文献
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2009年3月18日由墨西哥发端的人类甲型H1N1大流行性流感疫情全球蔓延,并已扩散到中国。新型A/H1N1流感突破种间屏障由人传染给猪,并相继在北美、南美、大洋洲出现疫情。2009年4月21日,新型A/H1N1猪流感疫情首次在北美的加拿大发生;2009年6月24日,在南美的阿根廷发生猪流感疫情;2009年7月24日,远在大洋洲的澳大利亚也出现猪流感疫情;2009年7月23日,在南美的紧邻阿根廷的智利的火鸡发生A型流感疫情。此次新型A/H1N1流感疫情呈现重大的流行病学显著变化:(1)突破种间屏障由人传染给猪、禽;(2)突破地理屏障,在三大洲先后暴发规模不等、强度不一的多起疫情。因此我国卫生主管部门、兽医主管部门和出入境检验检疫部门应高度戒备,密切关注,严防疫情疫病传入国境,特别是防止新型A/H1N1猪流感疫情在人群、猪群之间相互传播,避免疫情在人类和动物进一步扩散。 相似文献
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对虾Taura综合症病毒Taqman实时定量RT-PCR检测方法的建立与应用 总被引：1，自引：0，他引：1
建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测对虾的Taura综合症病毒(Taura syndrome virus,TSV).选取TSV基因组的保守序列,利用Primer Express 2.0软件设计引物和探针,扩增产物长度为73 bp.以含有TSV目的扩增片段的质粒为标准品,进行实时定量RT-PCR反应,结果表明质粒DNA在6～6×106个拷贝,共7个数量级的范围内有"S"型扩增曲线.根据病毒拷贝数与Ct值制备了标准曲线,可以用于病毒的定量分析.该方法的检测灵敏度为6个病毒粒子.该方法的重现性好,组内的实验变异系数为0.04%～2.70%,组间实验变异系数为0.92%～4.67%.引物和探针对于对虾基因组RNA、黄头病毒RNA都没有扩增反应,表现出良好的特异性.实时定量RT-PCR检测TSV方法的建立,对于虾病的临床诊断及流行病学研究具有重要意义. 相似文献
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以真鲷虹彩病毒(Red-sea bream iridovirus,RSIV)主要衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)的基因保守片段为靶序列,利用Primer Express 3.0软件设计定量PCR引物,建立了RSIV的SYBR Green I实时定量PCR检测方法.将RSIV MCP基因连接pMD18-T载体,构建重组质粒,经过梯度稀释后作为标准品,根据标准品拷贝数(X)与Ct值的关系绘制了标准曲线,为Ct=-3.184 1gX+40.270,相关系数R2=0.996 9.熔解曲线分析表明,定量PCR产物的Tm值为82.5℃.该方法的检测限为2.20×102拷贝/反应,对流行性造血器官坏死病毒、淋巴囊肿病毒、蛙病毒3、甲鱼虹彩病毒都没有扩增反应,具有特异性.利用该方法对84批海水鱼类(石鲽、大菱鲆、鲈鱼)进行检测,其中5批鱼样品感染RSIV,并利用标准曲线对病毒含量进行了定量分析. 相似文献
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TaqMan实时荧光PCR快速检测斑点叉尾鮰病毒 总被引：3，自引：0，他引：3
根据GenBank登录的斑点叉尾鮰病毒株ORF8基因序列,设计引物和Taqman荧光探针,建立了用于检测斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒的实时荧光定量PCR方法;对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性,并建立了绝对定量方法。特异性试验证实,该方法只能检测到斑点叉尾鮰病毒,与真鲷虹彩病毒、蛙虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒等多种常见的水生动物病毒没有交叉反应,具有高度的特异性。标准曲线表明,在3.3×10~3.3×107拷贝数之间有较好的线性关系(r=0.998 3),最少可检测到33个拷贝的阳性质粒,敏感度很高。同一样品于试验内及试验间的重复性试验发现,变异系数分别为0.7%和1.2%,重复性较好。该方法的检测时间从核酸抽提到出具结果仅需3h。试验结果表明,采用实时荧光PCR检测斑点叉尾鮰病毒方法具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短的特点,并且能对病毒进行准确的定量分析,不仅适合口岸进出口检验检疫的需求,而且可以作为研究该病毒感染过程的有力工具。 相似文献
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2008年北京奥运会马术比赛（香港）及其检验检疫措施 总被引：2，自引：1，他引：1
2008年北京夏季奥运会马术比赛将于2008年8月9日-20日在香港举行。金牌本届的马术赛事共设三项颁发六枚金牌:障碍赛(个人、团体)、盛装舞步赛(个人、团体)、三日赛(个人、团体),届时将有200对骑手和马匹组合参赛。奥运会马术比赛原定在北京乡村赛马场举行,但北京现有条件很难符合奥运会马术比赛的要求,国际奥委会、北京奥组委和国际马联协商后决定将马术比赛改在香港举行。中国运动员首次在盛装舞步、三项赛和场地障碍赛全部三个小项上都获得了参赛席位。参赛马匹隔离时间将由上届的"14+14天"缩减至"7+10天",即在马匹原居地隔离7天,到港后再隔离10天后才允许参赛。 相似文献
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2010年在世界各国发生了数十起马病疫情,其规模不等、强度不一。如西尼罗热(马达加斯加、希腊、意大利、西班牙、保加利亚、葡萄牙、摩洛哥、伯利兹、罗马尼亚)、马鼻疽(巴林、巴西)、马接触传染性子宫炎(葡萄牙、美国、英国)、流行性出血热(法国瓜德罗普岛)、马病毒性动脉炎(乌拉圭、阿根廷、英国)、非洲马瘟(加纳)、马鼻肺炎(阿联酋)、马传染性贫血(比利时、法国、德国、英国、希腊)、水泡性口炎(美国)、马梨形虫病(美国)、委内瑞拉马脑脊髓炎(巴拿马、伯利兹)、东部马脑脊髓炎(巴拿马)、炭疽(哈萨克、乌干达)。西尼罗病毒病多次在欧洲国家出现,马脑脊髓炎多次出现在拉丁美洲国家,马接触传染性子宫炎在赛马业高度发达的美国、英国似乎变成了地方性流行病,这些动物疫病在流行病学上出现了新变化,应引起我国兽医部门和出入境检验检疫部门的高度重视,严防疫情疫病传入传出,特别是防止新发疫病(马脑病、西尼罗病毒病)传入国境,保障我国畜牧业的健康发展。 相似文献