靶向FMDV受体猪源整联蛋白αv亚基基因抑制FMDV复制的最佳siRNA筛选     

骆继怀  独军政  高闪电  张国锋  常惠芸 《畜牧兽医学报》2011,42(12)

筛选靶向FMDV受体猪源整联蛋白αv亚基基因抑制FMDV复制的最佳siRNA.根据猪源αv mRNA序列,设计并合成siRNA,Lipofectamine 2000转染siRNA于PK-15细胞,利用qRT-PCR检测RNAi组(iαv-480、iαv-1719和iαv-2077)、空白组(Mock)和阴性对照组(Control)中αvmRNA表达情况；在转染siRNA12 h后通过接种100 TCID50,收集病毒液,测定TCID50,确定其抗病性变化.结果显示,瞬间转染PK-15后,与阴性对照组和空白组相比,3个RNAi组均不同程度抑制αv亚基基因表达,在24 h iαv-480组在mRNA水平抑制90.1％,作用最明显.TCID50测定表明iαv-480组有较低的病毒滴度,说明其抗病性增加.针对猪源整联蛋白αv亚基基因的最佳siRNA的筛选成功,为深入研究干扰FMDV受体抗FMDV转基因路线奠定了基础.  相似文献   

口蹄疫病毒株OA/58 3C蛋白酶的结构模拟和功能分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

周建华  丛国正  高闪电  常惠芸 《华北农学报》2007,22(6):9-13

以口蹄疫病毒株OA/58 RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA,然后与pGEM-TEasy载体连接并转化JM109菌株,提取的重组质粒用凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定。该毒株与Poliovirus,Hepatitis Avirus和Human rhi-novirus 89毒株3C序列对比分析发现核苷酸序列一致性分别为38.8%,37.1%和36.5%,氨基酸序列一致性分别为23.7%,19.2%和17.6%。通过Swiss-pdbViewer软件模拟出FMDVOA/58 3C蛋白酶的3D结构和表面模型。并鉴定出此毒株3C蛋白酶的活性中心为Cys31-His46-Asp84。  相似文献   

口蹄疫病毒3ABC绿色荧光蛋白载体构建及表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

孙德惠  独军政  常惠芸  才学鹏 《动物医学进展》2006,27(4):72-74,106

将O型口蹄疫病毒Akesu／58株适应细胞培养。用RT—PCR技术从适应细胞株中克隆了3ABC基因,将其克隆入pGEM-T载体,测序鉴定。然后将目的基因与线性化的绿色荧光蛋白（PEGFPNl）栽体连接筛选阳性质粒命名为PEGFPN1-3ABC。将阳性质粒转入JM109大肠埃希茵增殖。提取PEGFPN1—3ABC质粒转染入BHK细胞,在荧光显微镜下直接观察表达结果。  相似文献   

口蹄疫病毒L基因真核表达载体的构建及表达     

刘萍  丛国正  杨孝朴  常惠芸 《甘肃农业大学学报》2007,42(5):1-4

采用RT-PCR方法,从口蹄疫病毒中扩增出长约600 bp的核苷酸片段.纯化后与载体pMD18-Tsimple连接,重组质粒经PCR鉴定及DNA测序,结果表明克隆的片段为口蹄疫病毒L基因.将质粒pMD18-L与表达载体pEGFP-N1分别用BamHⅠ+XhoLⅠ双酶切,将所获目的基因与带有酶切位点的载体连接,经酶切、PCR鉴定及DNA测序,结果表明重组表达质粒pEGFP-L构建成功.将转染的BHK-21细胞,经荧光鉴定和RT-PCR检测,证实L基因在BHK-21细胞中得到表达.  相似文献   

口蹄疫病毒Akesu/58持续感染分离株P1基因的克隆及序列分析   总被引：2，自引：2，他引：2  

魏小娟  常惠芸  薛慧文  马金铃 《甘肃农业大学学报》2004,39(2):113-116

以持续感染模型动物牦牛的食道/咽部分离物(O/P液)为材料,采用RT-PCR法,扩增和克隆了P1结构蛋白基因的全序列。序列测定和分析结果表明,持续感染分离株的序列与Akesu/58参考毒株的序列相比,其同源性为86.5 %,而与china/99的同源性高达89.4 %。氨基酸差异分析表明,氨基酸相应的密码子中T-C或A-G互变频率较高,这可能是导致氨基酸改变的主要因素。  相似文献   

牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv的基因克隆及分子特征   总被引：4，自引：2，他引：4  

独军政  常惠芸  丛国正  邵军军  林彤  高闪电  刘湘涛  才学鹏  谢庆阁 《畜牧兽医学报》2007,38(2):190-195

研究发现，4种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染自然宿主，其中αv是4种受体的共用亚基。本试验对牛口蹄疫病毒受体通用亚基αv基因进行了克隆测序并对其编码蛋白的二级结构进行了预测。结果显示，牛αv亚基基因的编码区含有3147个核苷酸，编码1048个氨基酸，其中信号肽由30个氨基酸组成，胞外域由957个氨基酸组成，跨膜区由29个氨基酸组成，胞浆域由32个氨基酸组成；在890和891位氨基酸之间有1个蛋白酶裂解位点（KR-D）；胞外域含有13个潜在的糖基化位点（NXT／NXS）、2个Ca^2＋结合位点[DX（D／N）XDGXXD]、18个半胱氨酸残基。该基因在GenBank中的登录号为DQ871215。牛αv基因与猕猴、家鼠、犬、人、鸡的αv基因的核苷酸序列同源性分别为91．0％、85．7％、90．1％、91．2％、73．1％，推导的氨基酸序列同源性分别为94．7％、91．6％、96．3％、95．0％、81．6％。牛αv亚基存在复杂多变的二级结构，这是其具有多种生物学功能的分子基础，其中1-30位、988-1017位氨基酸区段疏水性较强，形成表面蛋白结构的可能性较差，分别是该亚基的信号肽和跨膜区。本试验为进一步深入研究口蹄疫病毒与宿主细胞的相互关系奠定了基础。  相似文献   

口蹄疫病毒的抗原变异与逃避免疫反应     

沈小燕丛国正  常惠芸王建华 谢庆阁 《中国兽医科技》2004,34(12):33-37

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是1898年首次发现的病毒性动物疾病，因其发病凶猛，被国际兽医局(OIE)列为A类传染病之首。口蹄疫病原体为口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)，主要侵害家养或野生的偶蹄类动物。作为一类烈性传染病，口蹄疫不仅损害了发病国家和地区的畜牧业生产，  相似文献   

H9N2亚型禽流感病毒NA基因的原核表达及其免疫反应性分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

易华山  侯顺利  独军政  胡永浩  包世俊  常惠芸 《甘肃农业大学学报》2008,43(3)

采用PCR方法扩增H9N2亚型禽流感病毒A/Ck/GS/2/99株NA基因(1 400 bp),克隆至pET-28a(+)载体上,构建重组原核表达载体pET-NA,转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.8 mmol/L的IPTG诱导表达8 h.表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:该载体能高效表达NA蛋白,相对分子质量约52KD,纯化产物能与N2亚型的AIV鸡血清发生特异性反应.  相似文献   

利用Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体建立单抗竞争ELISA方法   总被引：4，自引：1，他引：3  

林彤  邵军军  丛国正  独军政  高闪电  常惠芸  谢庆阁 《农业科学与技术》2009,10(3):104-107

1材料与方法1．1材料新生牛血清购自GIBICO生物公司;青霉素、链霉素购自哈尔滨制药六厂;降脂烷购自sigma公司;过碘酸钠购自上海生物试剂公司;脱脂乳购自飞鹤乳业公司;Babl／c小鼠购自兰州生物制品研究所。  相似文献   

猪O型FMDV重组多表位抗原基因的克隆表达及免疫学鉴定   总被引：2，自引：0，他引：2  

高明  邵军军  林彤  赵付荣  刘泽众  常惠芸  吴润 《甘肃农业大学学报》2017,52(1):1-6

【目的】制备猪O型FMDV广谱多表位疫苗,并筛选最适合的免疫佐剂.【方法】选取O型FMDV 3个毒株VP1蛋白的优势表位,设计并合成重复串联表位基因3FoEN2,并克隆猪IgG重链恒定区基因.利用BamHⅠ,EcoRⅠ等位点将2个基因依次克隆到pProEX-HTb载体,构建重组质粒pE-IgG并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞.以IPTG诱导表达得到融合蛋白pE-IgG,经SDS-PAGE电泳分析,Western-blotting鉴定.分别用5种佐剂ISA206、ISA201、IMS1313、603、ISA61乳化融合蛋白配制疫苗免疫BALB/c雌鼠,间接ELISA方法测定抗体水平.【结果】重组蛋白以包涵体形式正确表达,大小为45kU,且能与感染O型FMDV的猪的阳性血清发生特异性免疫反应;ISA201佐剂试验组刺激机体产生的抗体水平最高.【结论】pE-IgG蛋白具有很强的免疫原性,与ISA201佐剂混合制备成的猪O型口蹄疫病毒多表位疫苗可刺激动物机体产生高水平抗体,是具有良好开发前景的疫苗.  相似文献