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试验旨在应用宏基因组测序技术探究两种堆肥处理方式下猪粪中微生物的结构组成与分布特征。试验采集同一粪池中的新鲜猪粪，随机分成添加有效微生物（EM）菌的F组和未添加EM菌的K组，每组粪堆各1堆，堆成圆锥形粪堆，粪堆高1.2 m，底部直径2 m；采集堆肥第0、7、14和21天的粪便样本并提取粪便总DNA，运用宏基因组高通量测序技术，比较F组和K组的微生物多样性（组成及结构）差异，并对功能基因进行注释。结果表明，猪粪便中的细菌共测序获得1 083 607个有效开放阅读框（ORFs）；共鉴定出147个门、118个纲、258个目、593个科、2 343个属和13 193个种；在门水平上，相对丰度前十的细菌界优势菌门有：变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、放线菌门（Actinobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）、疣微菌门（Verrucomicrobia）、绿弯菌门（Chloroflexi）、柔壁菌门（Tenericutes）、浮霉菌门（Planctomycetes）、螺旋体门（Spirochaetes）和酸杆菌门（Acidobacteria）；在属水平上，两组平均丰度值排名前三十五的属分别属于变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门、放线菌门和疣微菌门；通过KEGG功能预测分析，新陈代谢通路是最丰富的，氨基酸代谢通路和碳水化合物代谢通路是包含功能基因数量最多的二级通路。两组的菌群结构多样性差异表明添加EM菌后会促进堆肥前期的菌群变化。 相似文献
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为了解我国川西高原地区藏猪呼吸道疾病综合征(porcine respiratory disease complex, PRDC)相关病毒的种类和流行情况，本研究从四川省甘孜藏族自治州地区采集藏猪呼吸道样本共计119份，其中健康藏猪鼻拭子66份(来自6个猪场),PRDC明显症状的藏猪鼻拭子、肺组织及肺泡灌洗液53份(11个猪场)。将健康组和发病组样本制成两个pool样提取总核酸反转录成cDNA,建库后使用Illunima novaseq测序。经序列分析表明，健康藏猪呼吸道样品主要以细菌噬菌体为主，动物相关病毒仅检测到疱疹病毒科(Herpesviridae)的mardivirus。发病组样本的病毒种群包括14个病毒科的16种病毒，可引起PRDC的病毒有猪圆环病毒2型(PCV-2)、细环病毒(TTSuV)、猪细胞巨化病毒(PCMV)和非洲猪瘟病毒(ASFV)等。使用SOAPdenovo软件组装出两株PCV-2,三株TTSuV和一株Porprismacovirus的全基因组。遗传演化分析结果显示，两株PCV-2属于PCV-2d亚型，三株TTSuV均属于k2型，其中SCgz-1属于k2b亚型，S... 相似文献
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建立酶联免疫方法以检测食品中恩拉霉素的残留,采用戊二醛法,偶联半抗原恩拉霉素(Er)和载体牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA),制备人工免疫抗原和人工包被抗原,分别为Er-BSA和Er-OVA。经紫外光谱鉴定,在紫外270～280 nm波长处得到Er-BSA和Er-OVA特征性偶联吸收峰。试验结果表明人工合成的2个人工抗原均偶联成功。人工免疫抗原和人工包被抗原的偶联比均达到26∶1,为进一步制备抗血清和酶联检测方法的建立奠定了基础。 相似文献
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试验旨在建立简易、快速、高效的鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)检测和诊断方法。根据GenBank上公布的ILTV TK基因序列,设计检测ILTV的特异性环介导的等温扩增(loop media-ted isothermal amplification,LAMP)技术反应引物,通过对LAMP反应体系和反应条件的优化,以及特异性、敏感性和临床样品的检测,建立了ILTV LAMP检测方法。结果显示,以内引物ILT9-FIP和ILT9-BIP、外引物ILT9-F3和ILT9-B3、环引物ILT9-LB和ILT9-LF为LAMP反应引物,反应温度为66℃时,所建立的LAMP检测方法反应效率最高;所建立的LAMP检测方法能够特异性地检测ILTV(匈牙利株和王岗株),不与新城疫病毒(NDV,B株)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV,H52株和H120株)、大肠杆菌、鸡副嗜血杆菌、巴氏杆菌等发生交叉反应,且能够检测到的病毒最低浓度达到0.06pg/μL,其灵敏度是普通PCR方法的100倍;采用建立LAMP方法对50个临床样本进行检测,阳性率为14%,且与PCR检测结果的符合率达96%。本研究建立了特异性强、灵敏度高、操作简单的LAMP检测方法,适用于临床上ILTV的快速检测和诊断。 相似文献
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试验旨在筛选坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum,Fn)外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)中的候选抗原蛋白,为Fn的亚单位疫苗研究奠定基础。采用Uniprot对Fn Omp序列进行预测,基于预测结果筛选拟表达蛋白,并根据GenBank中登录的Fn Omp相应基因序列设计特异性引物,以QL03株为模板进行PCR扩增、原核表达,以及SDS-PAGE和Western blotting分析,并通过血清杀菌试验和小鼠免疫攻毒保护试验,鉴定重组蛋白的免疫原性,筛选最佳候选蛋白。结果显示,预测得到121个蛋白,顺次命名为1-Fn～121-Fn,根据预测结果筛选出8-Fn、11-Fn、41-Fn、95-Fn和102-Fn 5个候选蛋白,其PCR扩增产物大小分别为672、1 164、570、1 059、729bp。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,除8-Fn未表达外,其余4个蛋白均成功表达,大小分别为60、39、59、44ku,命名为P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn,均能与Fn阳性血清反应。血清杀菌试验结果显示,4个重组蛋白均有一定杀菌效果,其中抗P102-Fn血清的杀菌效果最佳,杀菌率可达40.49%。小鼠免疫保护试验结果显示,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn对小鼠均具有一定的保护效果,其中P102-Fn保护效率最高,达60%。结果表明,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn均具有良好的免疫原性,其中P102-Fn的免疫原性及诱导机体产生保护免疫反应能力最佳,最有望成为Fn亚单位疫苗的候选蛋白。 相似文献
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[目的]研究中药提取物及其组方对小鼠维生素A急性中毒早期的治疗效果,为动物维生素A急性中毒提供有效的治疗手段,进而促进伴侣动物医疗的健康发展.[方法]选取健康成年昆明种小鼠一次性腹腔注射维生素A(按1500 mg/kg计)建立维生素A中毒致骨骼发育不良综合症小鼠模型,4周后采集血液测定生化指标.将维生素A急性中毒小鼠随机分成6组(T1~T6)进行治疗:T1组为空白对照组(不给药);T2组为10.0 mL/kg赶黄草水粗提物;T3组为1.0 mL/kg波棱瓜子粗提油;T4组为5.0 mL/kg赶黄草水粗提物+0.5 mL/kg波棱瓜子粗提油;T5组为5.0 mL/kg赶黄草水粗提物+0.5 mL/kg波棱瓜子粗提油+1.0 g/kg黄芪多糖;T6组为阳性对照,安宫牛黄丸(1/3粒,约1 g).各给药处理组均连续灌胃给药7 d.在开始给药的第2、4、6和8 d分别采集小鼠静脉血制备血清,用于谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、钙(Ca)、磷(P)和甲状旁腺素(PTH)等血清生化指标测定.[结果]除T1组外,各给药处理组维生素A急性中毒小鼠的血清生化指标均发生明显变化,ALT、AST和ALP活性及Ca和P含量整体上均呈下降趋势,PTH含量则呈上升趋势.综合各项血清生化指标的变化趋势,可确定T5组的小鼠维生素A急性中毒治疗效果最佳,至给药第8 d,维生素A急性中毒小鼠血清ALT活性降至3.78 ng/mL,AST活性降至628.14 pg/mL,ALP活性降至2.35 ng/mL,Ca含量降至3.29 mmol/L,P含量降至1.62 mmol/L,而PTH含量升高到337.95 pg/mL.[结论]赶黄草水粗提物和波棱瓜子粗提油均能有效治疗小鼠维生素A急性中毒,两者联用效果更佳,尤其是与黄芪多糖配伍组合,其作用机理主要是通过修复肝功能及骨组织损伤来实现. 相似文献
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为建立一种一次性检测多个磺胺类抗生素耐药基因的检测方法,用磺胺类抗生素耐药大肠杆菌作为受试生物,根据磺胺类抗生素耐药基因Sul1和dfrA1设计一对引物进行二重PCR检测。结果发现:本方法能有效检测出大肠杆菌Sul1和dfrA1两种磺胺类抗生素耐药基因,检出限为4.5 cfu/μL,对于Sul1和dfrA1两种磺胺类抗生素耐药基因具有较强的检出特异性。此方法对检测大肠杆菌磺胺类抗生素耐药基因提供了有力的技术支撑。 相似文献
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为了探明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)JXA1分离株感染藏猪、藏梅猪和大约克夏猪后,病毒在猪体内的分布规律,本研究利用荧光定量RT-PCR技术检测3个品种猪感染4×105TCID50/m L的JXA1分离株后0、4、7和14 d体内的15个器官(心、肝、脾、肺、肾、大脑、小肠、颌下腺、颌下淋巴结、甲状腺、胸腺、支气管淋巴结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结和扁桃体)的病毒载量。结果表明,在整个感染期间,藏梅猪和大约克夏猪的15个器官中均检测到JXA1分离株,而藏猪的心、肝、脾、肾、小肠、颌下腺和甲状腺以及感染后14 d的脑中未检测到JXA1分离株;在JXA1分离株感染3个品种猪4、7和14 d,藏猪病毒载量最多的器官分别是扁桃体、腹股沟淋巴结和颌下淋巴结,藏梅猪分别是脾、脾和肺,大约克夏猪分别为胸腺、肺和颌下淋巴结。本研究证实了JXA1分离株在3个品种猪体内的分布规律和器官嗜性均存在明显差异。 相似文献
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猪呼吸系统疾病一般由病毒和细菌混合感染引起,严重影响生猪健康,目前主要采用大剂量抗生素来治疗病猪,但易产生副作用。筛选适宜中药来治疗猪呼吸系统疾病是养猪业发展的迫切需求。本研究将中药诃子、余甘子用中性去离子水索氏提取4～6 h,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用无水乙醇索氏提取6 h,蒸干溶剂,收率分别为10.0%、10.5%、11.0%和10.0%。将诃子、余甘子用水稀释,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用5%吐温80溶液稀释,得到药物储存液,采用试管法测定诃子及其与其他中药组合对猪呼吸系统疾病病原菌（A族乙型溶血性链球菌、猪链球菌、波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌及副猪嗜血杆菌）的最低抑菌浓度。结果显示,诃子对猪呼吸系统疾病病原菌有较强的抑菌作用,余甘子、螃蟹甲、多刺绿绒蒿与诃子的多种药物组合也有较强的抑菌作用,大多数能协同诃子抑制猪呼吸系统疾病常见病原菌,其作用强弱顺序为诃子/余甘子/多刺绿绒蒿（3∶1∶1）>诃子/余甘子/螃蟹甲（3∶1∶1）>诃子/螃蟹甲（2∶1）>诃子>诃子/多刺绿绒蒿（2∶1）>诃子/余甘子（1∶1）。这些药物组合可为猪呼吸系统疾病防治药物的研发提供参考。 相似文献