山羊痘病毒疫苗株 ORF103基因的克隆、 序列分析及原核表达     

鲍长磊  何亚鹏  张琪  许信刚  张彦明  付明哲 《西北农业学报》2016,25(4):502-507

根据GenBank已登录的GTPV基因组序列,设计并合成1对特异性引物,以GTPV疫苗株基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF103基因片段并进行序列分析,再将该基因片段亚克隆于原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-ORF103,经鉴定正确后转化BL21感受态细胞进行诱导表达,并进行SDSPAGE和Western blot检测。成功克隆GTPV疫苗株ORF103基因片段。重组菌经IPTG诱导后成功表达分子质量约为35ku的重组蛋白,该蛋白能与山羊痘阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。研究结果为GTPV的分子生物学特性研究提供资料,并为进一步研制GTPV抗体检测试剂盒奠定基础。  相似文献   

杨凌及其周边地区猪群中猪瘟抗体水平监测   总被引：2，自引：0，他引：2  

张振仓  张彦明  王韦华  郭抗抗  党如意  王晶钰 《西北农业学报》2009,18(2):38-40

对杨凌及其周边地区猪群中猪瘟免疫情况进行了调查,并采取54份血样,利用间接ELISA检测猪瘟抗体水平.调查发现,绝大部分养殖户对猪瘟都有较为严格的防疫措施,但也有部分养殖户不够重视,没有进行疫苗免疫接种.血清检测结果表明,免疫猪的猪瘟抗体阳性率为40%;未免疫猪阳性率为30%;屠宰用猪阳性率为47.06%;所有检样总阳性率为37.03%.说明杨凌及其周边地区猪群中猪瘟抗体水平偏低,应及时进行免疫接种及加强抗体监测.  相似文献   

鸡胚成纤维细胞与鸡气管黏膜上皮细胞共培养体系的建立     

孙裴  张彦明  杨小云  唐青海  魏建忠  李郁  王桂军 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2010,(3):40-46

【目的】建立鸡气管黏膜上皮细胞(Chicken trachea epithelium cells,CTECs)和鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEFs)共培养体系,为CTECs体外培养研究与应用奠定基础。【方法】利用细胞套皿培养方法,使CEFs与CTECs体外共培养在一个营养体系中,用含有不同促细胞生长因子(氢化可的松(HC)、转铁蛋白(TF)、人表皮生长因子(HEGF)或牛垂体提取物(BPE))和血清(胎牛血清、鸡血清)的培养液培养,观察各组CTECs的生长情况,绘制生长曲线,记录CTECs体外生长增殖的特点。【结果】与单独培养的CTECs相比,共培养体系中的CTECs体外贴壁、生长增殖能力均显著提高,72h能够铺满整个培养皿,并呈典型的上皮细胞"铺路石"状排列。共培养体系中的CTECs,在缺少3种重要哺乳动物气管黏膜上皮细胞培养所需的促细胞生长因子培养液中,仍能保持较好的生长能力,大大降低了CTECs的培养成本。【结论】成功建立了CTECs与CEFs的共培养体系,为CTECs的体外培养和应用提供了技术支持。  相似文献   

猪圆环病毒2型Cap蛋白在杆状病毒表面的展示     

邢福珊  许信刚  童德文  王志昇  张彦明 《中国兽医杂志》2010,46(12)

本试验将猪圆环病毒2型(PCV2)去核定位区ORF2基因克隆到杆状病毒表面展示转座载体pBacSC中,转化DH10Bac大肠杆菌感受态,经抗性及蓝白斑筛选得到含ORF2基因的重组杆状病毒DNA,以脂质体介导法将此重组DNA转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。对重组病毒进行Western-blot分析和免疫金电子显微镜检测。结果表明,PCV2 Cap蛋白在重组杆状病毒中获得表达;免疫金电子显微镜观察表明,重组蛋白展示在杆状病毒囊膜上。本试验成功构建表面展示PCV2 Cap蛋白的重组杆状病毒,为下一步应用重组杆状病毒作为亚单位疫苗奠定基础。  相似文献   

细菌毒素氧化呈色法和过氧化物酶法检验病害猪肉的比较     

郭抗抗  张彦明  任雪飞  王秀清  王晶钰 《动物医学进展》2010,31(Z1)

细菌毒素氧化呈色法和过氧化物酶法都是检验病害猪肉的常规检验方法。采集病害猪肉和健康猪肉各30份,通过对健康猪肉和病死猪肉同时用过氧化物酶法和细菌内毒素呈色法进行检测,比较两种方法的准确性、精确度及适用性。结果表明,细菌毒素氧化呈色法和过氧化物酶法检验病害猪肉都有很高的检出率,达到了100%。检验市场上购买的健康猪肉时,过氧化物酶法优于细菌毒素氧化呈色法。  相似文献   

白鹭大肠埃希菌的分离鉴定与药敏试验   总被引：2，自引：0，他引：2  

杨泽晓  庞歌  王印  姚学萍  张彦明  杨增岐  汪开毓  杨波 《动物医学进展》2010,31(4)

对3份白鹭新鲜粪便进行细菌分离纯化、染色镜检和生化鉴定,并用Kirby-Bauer法对分离细菌用30种抗菌药进行了耐药性试验。结果表明,分离到3株革兰阴性小杆菌为大肠埃希菌,分别编号为E1、E2和E3。3株白鹭大肠埃希菌都对青霉素G、阿莫西林、万古霉素和洁霉素耐药,对常用广谱抗菌药物有2重以上耐药性,但对试验用的氨基苷类抗生素、喹诺酮类药物和复方新诺明高度敏感。  相似文献   

猪瘟病毒NS3蛋白对牛肾细胞生长的影响     

孙裴  张彦明  魏建忠  李郁  王桂军 《西北农业学报》2010,19(10):10-15

猪瘟病毒蛋白NS3被认为与培养细胞发生病变存在紧密联系,为了进一步探讨NS3蛋白单独作用及其表达水平对培养细胞CPE发生的影响,本研究构建了2种携带NS3基因的真核表达载体,分别在牛源细胞MDBK中表达NS3蛋白,利用荧光显微镜观察宿主细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western-blot检测目的蛋白表达情况。研究结果表明,2种载体均在MDBK中成功表达NS3蛋白;其中pCD-NA3.1-NS3质粒所表达的目的蛋白量较大,并使宿主细胞表现出明显的形态学变化;细胞凋亡检测结果表明NS3蛋白大量表达的宿主细胞凋亡率显著高于对照组。猪瘟NS3蛋白可以不需要猪瘟病毒其他蛋白的参与,具有直接造成宿主细胞发生病变的能力,但较低的蛋白存在水平并不能对宿主细胞造成可检测的损伤,推测活体内若能有效干扰瘟病毒NS3蛋白的产生或其功能可能会降低猪瘟或牛病毒性腹泻-黏膜病的发病率或使临床表现减轻。  相似文献   

汽车助力转向系统节能分析与方案研究     

张彦明 《湖南农机》2013,(7):117-119

为了提高行驶的安全性和驾驶的舒适性,国内外生产的各类型汽车大都应用了助力转向系统系统。目前,国内外采用的多为中位开式转向助力系统,无论是国外的还是国产的转向助力系统都存在较大的能量损失,为此,对机械中位开式液压助力转向系统的能量损失进行分析是十分必要的,文章研究了传统中位开式转向助力系统的能耗损失,给出了降低能耗的研究方案,并进行了节能策略分析和比较,确定了节能改造方案。  相似文献   

陕西省部分市县鱼肉蛋奶中汞含量的检测分析     

张彦明  齐雪茹  赵全刚 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》1997,25(2):61-65

用冷原子吸收法测定了陕西省部分市县的１４０条鱼、１０７份猪肉、１８０枚鸡蛋、１００份牛奶样品的汞含量。结果表明，鱼肉中汞含量为０．２２３３±０．２４７５ｍｇｋｇ－１，其中２９．３％的鱼样中汞含量超出国家卫生标准中汞允许量；猪肉、鸡蛋、牛奶中汞含量分别为０．００７３±０．００５４ｍｇｋｇ－１，０．００３８±０．００１７ｍｇｋｇ－１和０．００２４±０．０００７ｍｇｋｇ－１，均在国家卫生标准中汞允许量以内。说明环境中汞污染对人体健康的威胁，主要来自汞污染水中的鱼体内蓄积的高含量汞。  相似文献   

猪转移因子对犬淋巴细胞转化增殖的影响     

孔庆波  李佳  丛丽媛  陈德坤  张彦明 《勤云标准版测试》2005,(3)

无菌采取犬抗凝血,分离淋巴细胞并制备成不同浓度.应用正交试验,探讨不同浓度淋巴细胞、植物血凝素(PHA-p)、犊牛血清(FCS)对淋巴细胞增殖的影响.在此基础上,研究不同浓度猪转移因子(transfer factor,TF)对犬淋巴细胞增殖的影响,增殖的结果用MTT法测定.试验结果表明,当犬淋巴细胞浓度为5×106个/ml,PHA-P为12.5μg/ml,FCS为10%时,淋巴细胞增殖效果最佳.在最佳培养条件下,猪TF浓度在0.195～25mg/ml时,对淋巴细胞转化增殖均有明显促进作用,猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/ml,且猪TF单独作用于淋巴细胞的效果优于与PHA-P的协同作用.试验结果证实,异源TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果,同时本研究结果为异源TF在临床上应用于犬病毒性疾病的防治提供了试验依据.  相似文献