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11.
12.
应用RT-PCR检测鸭肝炎病毒Ⅰ型感染 总被引：1，自引：0，他引：1
鸭肝炎病毒Ⅰ型(duck hepatitis virus Ⅰ,DHV Ⅰ)感染是雏鸭的一种急性高度致死性传染病,主要侵害4周龄以内的雏鸭,特别是1周龄以下的雏鸭最易感染,死亡率较高,是危害养鸭业最为严重的传染病之一[1].1945年在美国首次发现,我国于1963年在上海首次报道了该病的临床病例,至今,全国各养鸭地区均有不同程度的发生和流行.目前,已有多种检测DHV Ⅰ抗原的方法,如免疫电镜、Dot-ELISA和病毒中和试验等,这些方法在DHV Ⅰ的诊断中各有优势.PCR作为一种新的分子生物学检测技术,具有灵敏度高、快速、特异、操作简单等优点[2～4].本实验通过目前已发表的DHV Ⅰ基因组序列相对保守的区域设计引物,成功建立了RT-PCR方法检测鸭肝炎病毒1型. 相似文献
13.
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是存在于猪上呼吸道的一种常在菌,在特定条件下可以侵入机体引起以呼吸道症状为主的全身性疾病,以纤维素性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征,又称格拉瑟病(glasser's disease).近年来,随着养猪业规模化、集约化和工厂化的发展,饲养密度不断增大,空气环境控制不好导致副猪嗜血杆菌在各个猪场不断发生,已趋于流行.笔者对广东省清远、佛山、惠州市猪场的患病猪进行采样,通过分离鉴定确定病原为副猪嗜血杆菌(分别命名为GDQY1、GDFS2、GDHZ3),同时进行了药敏试验,现报道如下. 相似文献
14.
用DNA重组技术，将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置，获得重组质粒pBVpIL-6，转化大肠杆菌DH5α后，42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达，表达量约占总蛋白的20％。表达的蛋白以包涵体形式存在，包涵体经过变性溶解和复性后用酶联免疫吸附试验（ELISA）做定性定量检测。ELISA结果证实了所表达的蛋白为猪IL-6，复性后具有一定活性．并测出了复性后活性蛋白的浓度。 相似文献
15.
通过对 4个毛形线虫隔离种保姆细胞形成时间的研究 ,发现分离自中国猪的旋毛形线虫和波兰猪旋毛形线虫 (Trichinella spiralis)在小鼠膈肌中出现保姆细胞的时间比较早 ,分别于感染第 16天和 18天出现 ,第 36天和 38天所有幼虫都已形成保姆细胞 ,而分离自犬的毛形线虫和熊的本地毛形线虫 (Trichinella nativa)出现保姆细胞的时间较晚 ,于感染第 2 0天和 2 2天出现 ,第 32天完全形成。结果表明 ,中国猪旋毛形线虫与波兰猪旋毛形线虫 ,犬毛形线虫与本地毛形线虫分别是同一旋毛虫隔离种 相似文献
16.
参考GenBank发表的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)全基因组序列,设计引物,通过PCR技术,从广东地区疑似"高热病"病猪的组织中,扩增17株PCV2流行株的全基因,并进行了序列测定分析.结果表明,17个PCV2分离株基因组全长为l 767或l 768bp.相似性比较发现... 相似文献
17.
18.
为原核表达H3N2亚型犬流感病毒(CIV)HA1蛋白,本研究利用特异性引物扩增CIV H3分离株的HA1基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。再将其亚克隆于pET-32a(+)中构建重组表达质粒pET-HA1。将该质粒转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析,表达的重组蛋白约为58 ku。纯化的HA1蛋白经western blot和Dot-ELISA鉴定表明,表达的重组HA1蛋白可以与H3N2亚型CIV阳性血清发生特异性反应。 相似文献
19.
根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)的核酸序列,设计了1对引物,采用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪病料中扩增出了ORF3基因,将其克隆到高效真核表达载体pEGFP- N2中,筛选出含有ORF3基因的重组质粒,命名为pEGFP-N2-ORF3.对此重组质粒进行测序分析,结果表明,克隆的ORF3基因与其他PCV2的ORF3核苷酸序列相似性为96.2％-99.0％,氨基酸序列同源性为90.5 ％～98.1％.将重组质粒纯化后转染COS-7细胞,用PCR方法扩增出了特征性的基因片段,并采用特异性单抗进行间接免疫荧光,结果转染pEGFP- N2-ORF3重组蛋白在细胞核和细胞浆中均有表达,尤其在细胞核中表达量较高,且对细胞有一定的毒性.本研究为进一步探讨ORF3的结构和功能提供理论依据. 相似文献
20.
从广东省发病猪场采集的组织和血清中分离到两株PRRSV,病料经RT-PCR检测为阳性,通过Marc-145细胞进行传代,可产生明显细胞病变,通过间接免疫荧光可检测到荧光信号,两株病毒分别命名为ZH-GD株和ZS-GD株。对两株病毒的ORF5和Nsp2高变区进行序列测定和分析,结果表明,PRRSV ZH-GD株和ZS-GD株的核苷酸序列与欧洲型代表株LV株间的相似性相对较远,与美洲株经典毒株VR-2332间的相似性分别为88.6%和88.1%,与中国经典美洲毒株CH-1a间的相似性分别为94.4%和93.0%。在Nsp2上有30个氨基酸的缺失,与JXA1、XH-GD等高致病性变异株的Nsp2缺失位置一致。分离的两株PRRSV均属于美洲型的变异株PRRSV。 相似文献