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紫花苜蓿叶片中大量的高丰度蛋白(核酮糖-l,5-二磷酸羧化/加氧酶,Rubisco)干扰了蛋白质的动态分辨率,严重影响蛋白质组学研究中功能蛋白的检测与鉴定。为了探究去除高丰度蛋白的适宜方法,本研究利用Mg/NP-40与聚乙二醇(PEG)预分离紫花苜蓿叶片蛋白,通过双向凝胶电泳法比较了不同浓度PEG对叶片高丰度蛋白的分离情况。电泳图谱显示0,15%,17.5%,20%PEG处理的蛋白质中分别可以检测到(335±17),(417±3),(445±7),(459±11)个蛋白质点,0,15%,17.5%处理组间差异显著(P<0.05),17.5%和20%PEG 处理组间没有差异(P<0.05)。然而,17.5%PEG能够检测到更多的差异蛋白质点,证明其更能有效沉淀高丰度蛋白,便于检测被Rubisco遮盖的蛋白质点。将该方法应用于紫花苜蓿叶片响应低温胁迫的蛋白质组学研究中检验其应用效果,与三氯乙酸/丙酮法提取的全蛋白相比,去除高丰度蛋白后鉴定出8个新的蛋白质差异点,证明该方法适用于实际的蛋白质组学研究。可见,Mg/NP-40与17.5%PEG法是最适宜去除紫花苜蓿叶片高丰度蛋白的方法。 相似文献
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为探明北京某犬场犬的死亡原因,从患有肠道出血的犬肛拭子中分离出1株犬细小病毒,试验通过PCR、血凝和间接免疫荧光试验方法对毒株进行鉴定,并对VP2基因进行克隆测序和序列分析,确定其遗传分支。结果表明,该分离株属于犬细小病毒CPV-2c型,命名为CPV-BJ21株。应用犬细小病毒单克隆抗体进行间接免疫荧光检测,结果为阳性;基因序列分析表明,分离株与犬细小病毒为同一进化分支,VP2基因核苷酸序列与中国四川的CPV-2c(MH476581.1)同源性达99%,与亚洲分离的犬细小病毒之间亲缘关系较近。VP2氨基酸序列在第A5G、S297A、D426E位出现了氨基酸突变;在F81细胞上传3代后,病毒液的血凝效价稳定于210。本研究可为犬细小病毒的流行情况及新疫苗的研究提供参考依据。 相似文献
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犬细小病毒VP2蛋白的表达及间接ELISA方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
以犬细小病毒(Canine parvovirus virus,CPV)VP2基因的原核表达产物为抗原建立检测CPV抗体的间接ELISA方法.在分析CPV VP2基因稀有密码子(大肠杆菌系统)的基础上,克隆去除5'和3'端的稀有密码子的VP2基因,构建了VP2蛋白原核表达载体pET28a-VP2和pET32a-VP2,利用HIS标签对融合表达产物进行纯化.经SDS-PAGE和Western-blot检测证实该基因获得表达,并存在低相对分子质量产物,其中纯化后的pET28a-VP2具有良好的免疫学活性.以pET28a-VP2蛋白为基础,建立检测VP2抗体的iVP2-ELISA方法:抗原包被质量浓度为17.8 mg/L,血清最佳稀释度为1:20,阳性判定标准初步定为:待测样品D值>0.367,且待测样品D值/阴性样品D值>2.0.采用iVP2-ELISA对20份背景清晰的犬血清样品进行检测,结果显示,iVP2-ELISA与HI试验的阴阳性符合率一致,但不呈现正比关系.本试验为犬场CPV抗体水平检测和进行CPV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法. 相似文献
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不同生物药剂对烟青虫的室内药效作用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为筛选高效、低毒的烟青虫生物杀虫剂,采用浸渍法,在室内测定6种生物杀虫剂的防治效果。结果表明,球孢白僵菌和苦参碱的防治效果较好,其防效明显高于辛硫磷,施用这两种药剂后7 d和10 d发现,烟青虫幼虫的虫口减退率和防治效果均在90%以上;其次为氰虫酰胺;而除虫脲、苏云金杆菌、印楝素3种药剂的防治效果相对较差,其防效明显低于辛硫磷。 相似文献
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紫花苜蓿花粉生活力测定方法研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为找到快速而有效地测定紫花苜蓿(Medicago sativa L.)花粉生活力的方法,本文通过碘-碘化钾染色、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、红墨水染色以及花粉离体培养萌发4种方法测定紫花苜蓿花粉的生活力。结果表明:前3种染色的方法不能准确快速的测定肇东苜蓿花粉生活力,离体培养萌发法中的琼脂法和悬滴法可以快速而准确的测定肇东苜蓿花粉的生活力。琼脂法和悬滴法培养花粉1.5h其萌发率最高,平均萌发率为55%,但悬滴法更加快捷方便,萌发率是54%,最适宜的浓度为蔗糖10%,硼酸0.015%。 相似文献
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菜豆几丁质酶基因Bchi的克隆及其在转基因烟草中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
本文根据GenBank中公布的菜豆几丁质酶基因cDNA序列设计引物,通过RT-PCR得到一个菜豆几丁质酶基因家族基因Bchi.该基因编码一个327个氨基酸的多肽,其结构包括信号肽、几丁质结合区、铰链区、催化区和液泡定位多肽,属于Class Ia类内切几丁质酶.构建该基因的植物表达载体pMHL7133-Bchi,并通过发根农杆菌R1000介导转化烟草,经PCR和Southern blot鉴定获得了4株转基因烟草株系.几丁质酶活性分析表明,转基因烟草几丁质酶活力明显高于对照.抗真菌实验结果显示,转基因烟草的叶片基本无病斑产生,表明Bchi基因在烟草中高水平的表达显著提高了烟草对真菌病害的抗性. 相似文献
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干扰素-ε(IFN-ε)是新发现的一种Ⅰ型干扰素(IFNs),是由多种细胞分泌的一类细胞因子,其本质是一种糖蛋白,可间接发挥抗病毒、免疫调节和抗肿瘤的生物学活性。但与其他Ⅰ型干扰素不同,IFN-ε的产生不需要病毒诱导,其由黏膜上皮细胞组成型表达,并受激素调节,在黏膜免疫中具有重要作用。目前相关研究报道较少,本文就人和不同动物IFN-ε的起源、体内分布规律,以及对生殖系统的保护、神经系统的调节及抗病毒等研究进展进行综述,以便进一步了解和开发新型干扰素。 相似文献
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棉花不科学的施肥,造成疯长,缺素,导致红叶茎枯、叶片黄花网纹、小叶病等。根据棉花需肥规律,采用植物营养保健施肥技术,做到科学施肥,合理用肥,使棉花健壮生长,达到增产增收的目的。 相似文献