传染性造血器官坏死病核酸疫苗的构建及其抗性基因对环境细菌抗性的影响     

李渊  赵景壮  刘淼  卢彤岩  任广明  尹家胜  纪锋  徐黎明 《中国水产科学》2018,25(1):220-227

本研究以传染性造血器官坏死病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)分离株XJ-13为研究对象,克隆其糖蛋白(glycoprotein,G)基因并连接到商业化载体pcDNA3.1(+),成功构建了真核表达载体pIHNxj-G。为了检测该载体作为核酸疫苗的可能性,本研究以2μg/尾的剂量采用背鳍基部注射免疫虹鳟(Oncorhynchus mykiss)鱼苗[(5±0.5)g]。在免疫后第4天及第30天,以100 TCID_(50)的剂量利用IHNV-XJ-13对虹鳟进行腹腔注射攻毒;在免疫后第4天及第7天,利用Real-time PCR技术检测虹鳟头肾及接种部位肌肉组织Mx-1基因表达情况;在免疫后第4天及30天检测虹鳟血清IHNV中和抗体效价;在免疫后65 d内,分别于不同时间点采集循环水池里的粪便、水以及虹鳟的肠内容物,进行氨苄青霉素抗性菌的分离鉴定。攻毒试验结果显示,核酸疫苗在免疫后第4天和第30天的相对保护率均高于90%;Mx-1基因检测结果显示,Mx-1基因在头肾和接种部位肌肉中均显著上调表达;中和抗体效价测定结果显示,在免疫后第4天,所有血清中均不存在中和抗体(效价均20);而在免疫后第30天,10尾虹鳟中有8尾血清中存在中和抗体,最高效价为160;抗性菌分离结果显示,分离到的氨苄青霉素抗性菌均是天然具有氨苄青霉素抗性的气单胞菌(Aeromonas sp.)和柠檬酸杆菌(Citrobacter sp.),并未分离到包括大肠杆菌在内的任何具有氨苄青霉素抗性的指示菌,且实验组和对照组的氨苄青霉素抗性菌的种类和数量均没有发生统计学意义的改变。本研究提供了具有良好保护效果的IHN核酸疫苗,并为IHN核酸疫苗的安全评价提供了基础数据。  相似文献   

四季柚疯长低产树的改造     

徐黎明 《中国果业信息》1999,(4)

四季柚顶端优势明显,如不注重修剪,加上柚园肥水条件好或不合理施肥,易形成疯长低产树,对这类树可采取以下措施改造。合理施肥和控水对旺长树要控肥,特别是控制氮肥,一般只施有机肥和磷钾肥,不施氮素化肥。采果后控水至叶片微卷、叶色转淡、略有落叶。修剪流去过多、过密的主枝,剪除徒长枝、重叠技、荫蔽枝、病虫校、纤细枝、干枯枝,改善树体特别是内膛的光照条件。对超过理想高度的枝梢进行回缩以控制树势。将旺长的主枝撑拉成45°角,使树姿开张。春季现营期抹除树冠中上部外围40％－60％的无花春梢,对过长春梢摘心。断推晾根春…  相似文献   

提高四季柚果实品质的关键技术     

徐黎明 《中国果业信息》1999,(4)

1推行有利于优质高产的整形修剪技术冬季修剪采取剪大校的粗修剪方式,重点疏去或回缩扰乱树体结构的交叉重叠枝、密生枝、直立向上枝和下垂枝,造成通透良好、主次分明的自然开心形树形。2合理施肥,重视有机肥施用合理施用氮、磷、钾肥,其比例一般要求为2：1：1－2。有机肥对改善四季柚品质有重要作用。成年柚树一般每年应至少保证每株施厩肥、粪肥25－50kg,饼肥1－2kg,并大力提倡种植和使用绿肥。3适量挂果,提高果品级别及早疏除畸形果、伤果、病虫果、小果等,对光照太差的果实也应疏除,四季抽适宜的叶果比为50-60：1。4土壤控湿,…  相似文献   

黑龙江地区鲤春病毒血症病毒的分离与基因型分析   总被引：2，自引：1，他引：1  

纪锋  赵景壮  刘淼  贺文斌  尹家胜  卢彤岩  任广明  徐黎明 《中国水产科学》2017,24(5):1141-1148

对2015—2016年黑龙江不同地区的40个养殖场送检的鲤(Cyprinus carpio)进行鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)的细胞培养分离、PCR鉴定、病毒滴度测定、病毒表面糖蛋白(glycoprotein,G)氨基酸序列聚类分析及基因分型研究。细胞培养结果显示,来自4个不同养殖场的鲤组织样本能够感染鲤上皮细胞(epithelioma papulosum cyprini,EPC)产生典型细胞病变(cytopathic effect,CPE),收集病毒悬液分别称为Shlj1~Shlj4。PCR鉴定结果表明,该4株病毒均为SVCV。病毒滴度实验测算出SVCV Shlj 1~Shlj 4的滴度分别为10~(6.28)、10~(6.88)、10~(7.57)和106.38 TCID50/mL。Shlj的糖蛋白基因核苷酸序列的聚类分析和遗传进化分析结果显示,Shlj 1~Shlj 4与Gen Bank收录的中国参考株A2、BJ0505-2和美国参考株USA、212364聚为一簇,同源性为98.4%~99.8%;Shlj 1~Shlj 4毒株之间的糖蛋白核苷酸序列相似性在98.6%~99.8%,其中Shlj 3与美国SCVC毒株USA、212364具有最高的核苷酸相似性(99.8%),Shlj 2与英国参考毒株880163具有最低的相似性(88.0%)。糖蛋白氨基酸序列比对结果显示,Shlj4中氨基酸突变最多,与另3个毒株差异较大。基因型分析结果显示,Shlj 1~Shlj 4均为基因Ia型。本研究结果表明,黑龙江地区2015—2016年间的SVCV检出率约为10%,并且来源于不同养殖场的病毒分离株的核酸序列呈现不同程度的差异,该结果进一步证明SVCV毒株在中国不同的鲤养殖环境中正在不断地进化。  相似文献   

虹鳟fabp10基因真核表达载体构建、生物信息学及组织表达分析     

任广明  林玉杰  徐黎明  赵景壮  邵轶智  卢彤岩 《水产学杂志》2023,(1):1-7

为探究虹鳟(Oncorhynchus mykiss)脂肪酸结合蛋白10(fatty acid binding protein 10,fabp10)基因序列信息及其所编码蛋白的结构和功能等，本试验根据Gen Bank数据库公布的河鳟(Salmo trutta)fabp10基因的CDS序列信息设计引物，通过RT-PCR获得fabp10基因片段，将目的片段与p MD-18-T载体连接转化DH5α感受态细胞，构建p MD-18-T-fabp10克隆载体，双酶切回收基因片段，构建pc DNA3.1-fabp10真核表达载体，分析fabp10基因在虹鳟不同组织中的表达，经双酶切、测序鉴定构建成功。将表达载体转染至EPC细胞，分别于24h、36 h、48 h后收集细胞进行荧光定量PCR检测。结果显示：虹鳟fabp10基因CDS区与Gen Bank数据库中Salmo trutta fabp10基因CDS区同源性高达100%。生物信息学分析发现，fabp10基因编码区全长378 bp，编码126个氨基酸。Fabp10蛋白主要分布在细胞质中，存在23个潜在磷酸化位点。转染pc DNA3.1-fabp10可...  相似文献   

传染性胰脏坏死病疫苗的研究进展     

刘为伦  赵景壮  卢彤岩  邵轶智  任广明  徐黎明 《水产学杂志》2023,(6):1-7

传染性胰脏坏死病（infectious pancreatic necrosis,IPN）是由传染性胰脏坏死病毒（infectious pancreatic necrosis virus,IPNV）引起的死亡率高达90%的鲑鳟鱼病毒性疾病。该病分布广泛，流行于欧洲、美洲、非洲以及亚洲等多个地区；传染性极强，病原极其稳定，幸存的鱼苗作为病毒携带者具有传染性，对世界鲑鳟鱼养殖业造成了巨大的经济损失。接种疫苗是防控该病毒病的最有效方式，但是，目前我国没有商业化的IPN疫苗。由于毒株存在变异及生物安全隐患，国外商业化的IPN疫苗无法直接引进应用。本文总结了IPN疫苗的研究进展，可为我国IPN的有效防控提供参考。  相似文献