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为了提高转基因动物乳腺特异性表达水平,构建了两种不同启动子的乳腺特异性表达载体,以比较其乳腺特异性表达效果.应用山羊β-酪蛋白或牛αs1-酪蛋白调控序列、鸡β-球蛋白隔离元件、巨细胞病毒(CMV) 基因表达涮控元件构建了,乳腺特异性表达复合启动/增强子(Pcmv) ,以单一的酪蛋白启动子作为对照,与人乳铁蛋白cDNA组成乳腺特异性表达载体,并制备了转基因小鼠.经ELISA检测,复合启动/增强子构件指导人乳铁蛋白cDNA在原代转基因小鼠乳腺中重组人乳铁蛋白(rhLF) 表达水平(2.0～8.1 g·L-1) 明显高于单一酪蛋白启动子构件(0～12 mg·L-1) ,而在所有转基因小鼠的血清和唾液中未检测到rhLF.结果提示:酪蛋白-Pemv复合启动/增强子不仅可提高转基因小鼠乳腺特异性表达水平,而且具有良好的乳腺表达特异性. 相似文献
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超排山羊卵巢卵母细胞体外成熟的初步研究 总被引：3，自引：0，他引：3
对超排山羊卵巢卵母细胞进行体外成熟培养的初步研究:试验一,分别用6、7、9、16号针头抽吸2～6mm卵泡,获有用卵母细胞百分率:分别为61.67％(37/60)、65.92％(178/270)、56.73％,(59/104)、31.43％(22/70);试验二,以TCM 199+10mol/L MHEPES+青霉素(6μg/m1)+链霉索(5μg/ml)为基础培养液(BM),再分别加入不同成分,配成5种卵母细胞成熟液:(A)BM+10％EGS(发情羊血清),(B)BM+10％EGS+HCG(2.5μg/ml,),(C)BM+10％EGS+HCG+E,(1μg/ml),(D)BM+10％FCS+HCG十E_2; (E)BM+10％EGS+HCG+E_2+颗粒细胞(1.5×10~6～3.0×10~6个/ml)。在38.5℃,5％CO_2培养26h,排卵后第1天卵巢母细胞体外成熟率分别为67.67％(20/30),60.42％(29/48),83.67％(41/49),67.79％(40/59),80.82％(59/73),排卵后第5天卵巢卵母细胞,在培液D中体外成熟率为71.43％(45/63)。研究表明,超排山羊卵巢卵母细胞经体外成熟可获得大量廉价的成熟母细胞。 相似文献
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家畜卵巢黄体早期发育过程中血管新生是保证黄体形成所必须的营养与激素得到供应。血管新生是血管生长的一个过程,主要局限于健康成年动物的生殖系统。在哺乳动物中,黄体是血管新生比较强烈的地方,所以黄体是理想的研究血管生成的细胞和分子调控机制的模式系统。目前对其分子机制研究发现,血管内皮生长因子VEGF在这个过程中期主要作用,通过拮抗剂特异性阻断体内黄体时期的作用,发现黄体血管形成和功能被显著抑制。对黄体时期VEGF依赖性血管生成的分子机制研究,将有助于开发新的策略用于治疗黄体相关的不孕症,以及改善动物繁殖性能。本文在先前的研究基础上,对影响家畜黄体早期发育过程中血管新生的因素进行分析,旨在为畜牧生产上的应用提供理论依据与指导。 相似文献
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广西的冬季,气候一般比較溫和。其东部冬季虽然比較寒冷,但也很少下雪,晴天气溫一般都在14℃以上,蜂群都能出外采集。我們广西平乐一带冬季的蜜源植物也很丰富,油菜、野桂花是冬季的主要蜜源,个别地区还有枇杷和梅子。蜜源植物花期衔接,流蜜不断。此外,冬季敌害較少,特别是蜂群在冬季一般不易产生分蜂热,管理比較方便。我地 相似文献
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为评估在山羊胎儿成纤维细胞中通过同源重组进行基因打靶的可行性，构建打靶载体pTargetl，分别以山羊β-酪蛋白基因的5’、3’侧翼区为2条同源臂，中间插入正筛选基因(Neo’)，外侧插入负筛选基因(HSV-tk)。将该载体线性化并纯化后电转染人30日龄的山羊胎儿成纤维细胞中，转染细胞系分别用G418和丙氧鸟苷进行正负药物筛选，存活细胞经PCR检测证明发生了同源重组事件。 相似文献
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电镜观察香猪、二花脸猪和大白猪肌纤维超微结构表明,肌原纤维直径、肌丝直径、肌节的长度和I带、A带的长度无明显的品种差异,肌纤维横截面单位面积内肌质网和肌原纤维所占的面积、肌质网终池、肌质和背最长肌中红肌纤维和白肌纤维的比例,肌原纤维间脂肪滴和糖原的含量、3个猪种间均有明显的差别。 相似文献
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乙肝病毒基因在转基因小鼠中高效表达的研究 总被引：1，自引：1，他引：1
采用传统育种方法,将整合含有人类乙肝病毒(HBV)基因的转基因小鼠通过近交和远交的育种方法,获得纯合子小鼠,收集由纯合子小鼠产生的双重杂合子小鼠及后代小鼠的血清,用竞争PCR联合产物酶联杂交技术定量测定血清中的HBVDNA量。结果表明:相对于单纯杂合子小鼠,纯合子小鼠的表达量增高不明显,而双重杂合子小鼠的表达量有明显提高。将双重杂合子再进行杂交传代,其后代也有增高趋势。 相似文献
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长颈鹿 (Giraffa camelopard-alis)产于非洲,在野生条件下主食鲜嫩树枝及树叶,喜群居。人工饲养后,长颈鹿的生活环境、饲料种类、活动方式都发生了明显的变化。因此,人工饲养长颈鹿的繁殖是一个新课题。南京玄武湖动物园饲养的长颈鹿于一九八五年一月繁殖成功一胎,现将繁殖情况报导如下: 本园长颈鹿先后由日本名古屋市(东山动物园)赠送的。公鹿名唤“山山”,一九八○年九月来园、入园时年龄约3岁;母鹿名唤“百合”,一九八三年八月来园,年龄约7岁。来园后生长发育良好。虽然体内有捻转血矛线虫、类园线虫寄生,经用驱虫药丙硫苯咪唑多次驱 相似文献
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【目的】双基因共整合可协同促进转基因生物的目的基因表达水平提高,研究获得rhPA/GH双转基因兔,并比较分析目的基因rhPA的表达水平及兔个体生长发育情况,为制备高表达rhPA转基因动物和遗传育种提供新思路。 【方法】利用NotⅠ/SalⅠ双酶切PCL25/GH质粒和QIAGEN DNA胶纯化试剂盒回收显微注射用基因片段。以3只rhPA单转基因兔（标号K06、K10、K17）作为供体兔,通过FSH/hCG超数排卵、受精卵原核显微注射、胚胎移植、苯酚/氯仿抽提新生仔兔耳尖组织基因组、PCR整合检测等方法获得rhPA/GH双转基因兔。经ELISA和Western blotting对转基因兔乳清进行表达检测,比较分析单、双基因表达rhPA水平。测量不同月龄的转基因兔体重,通过监测双转基因兔不同生长阶段的体重来分析GH对兔生长发育的影响。【结果】成功获得了约16 700 bp 大小的显微注射用基因片段,共超排3只供体兔获得122枚卵,其中103枚受精卵,受精率为84.4%（103/122）,显微注射后挑取形态较好的81枚移植6只同步发情受体兔,5只兔怀孕,妊娠率为83.3%（5/6）,妊娠到期共出生32只仔兔。通过PCR检测鉴定有19只携带rhPA基因的转基因兔,其中有11只rhPA/GH双转基因兔（7♂,4♀）,双基因整合率为34.4%（11/32）,且4只rhPA/GH双转基因母兔来源亲代分别为K06供体兔2只（标号K06-1、K06-2）、K10供体兔1只（标号K10-1）、K17供体兔1只（标号K17-1）。K06号rhPA单转基因兔乳清中rhPA表达量为42.2μg·mL-1,K06-1和K06-2号rhPA/GH双转基因兔乳清中rhPA表达量分别为432、444μg·mL-1;K10号rhPA单转基因兔乳清中rhPA表达量为42.8μg·mL-1,K10-1号rhPA/GH双转基因兔乳清中rhPA表达量为636μg·mL-1;K17号rhPA单转基因兔乳清中rhPA表达量为15.2 μg·mL -1,K17-1号rhPA/GH双转基因兔乳清中rhPA表达量为248 μg·mL -1。4只rhPA/GH双转基因母兔（K06-1、K06-2、K10-1、K17-1）乳腺表达rhPA含量在248-636μg·mL-1之间,远远高于rhPA单转基因母兔（K06、K10、K17）乳腺的表达含量（15.2-42.8μg·mL-1）,表达水平显著提高了约10.2-16.3倍,说明GH能够协同促进目的基因rhPA在转基因兔乳腺中的表达水平。Western blotting结果显示出现一约39.0 kD大小的条带,与目的蛋白rhPA大小相同,进一步证明转基因兔乳腺中表达的这种蛋白为目标产物rhPA。对rhPA/GH双转基因兔从出生到6个月的体重进行连续测量,发现与正常非转基因兔的体重没有明显的差异,绘制生长曲线进一步表明4只整合GH的转基因兔与2只未整合GH的正常兔在生长发育的不同阶段体重上没有显著性差异,成长至6个月的体重均在4.0-5.0 kg之间,这证明GH的导入并不影响转基因兔的存活和正常生长发育至成年。【结论】成功地制备了rhPA/GH双转基因兔,并证明了GH基因的导入能够显著地提高目的基因rhPA的表达量,且不会对转基因兔的生长发育产生影响,这为将来制备高表达转基因兔及其它动物奠定了基础,也为转基因动物乳腺生物反应器和转基因育种建立提供了新思路、新方法。 相似文献
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对2007～2009年间发生于扬州大学动物医院门诊的犬猫消化道异物梗阻进行了统计与分析,结果表明,在56例临床统计病例中,胃肠内异物梗阻最多,约占55.4%;其次为口腔内异物梗阻和食道内异物梗阻,分别为28.5%和16.1%。异物类型以动物骨骼类居多,其次为金属异物、塑料、布带、棉线等。发病犬猫以1岁以下的居多,其中大部分患病动物平时均有异嗜现象。不同位置及不同异物类型引起的梗阻,其临床症状不完全相同,即使相同位置与异物引起的梗阻,因发病时间及品种不同,其临床表现亦存在差异。根据问诊、触诊等一般临床检查结果,结合X-线平片或X线造影方法最终得以确诊。对56例犬猫消化道梗阻,分别采取了手术治疗和保守治疗的方法,最终成功治愈53例,治愈率为95%左右。 相似文献