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不同杂交方式获得高效表达乙肝病毒基因转基因小鼠 总被引：1，自引：0，他引：1
转基因动物普遍存在转基因效率低、表达水平不高并且外源基因遗传不稳定等问题。根据传统育种原理，笔者在已经得到的转基因动物基础上，寻找比原代外源基因表达水平更高的后代，不仅可解决上述问题，而且可以节约成本，缩短获得高效表达转基因动物的时间。本研究是以繁殖周期短，易操作，较经济的小鼠作为试验模型，对已整合有人的乙肝病毒(Hepatitis B Virus，HBV)基因的小鼠进行近交和远交的方法进行选育，并对选育的后代进行外源基因的整合检测以及对小鼠血清中表达的外源基因进行定量检测，表明获得了高效表达的转基因小鼠，从而为以后的转基因动物研制提供了实践和科学依据。 相似文献
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构件pbCNCS/LF36经微注射获得转基因小鼠,同时为了准确筛选出整合的单克隆细胞,增加1个Cre/LoxP-GFP-Neo系统构建成pAPLM,将其转染山羊胎儿成纤维细胞筛选阳性细胞.结果表明:小鼠受体妊娠率28.5％,产仔32个,PCR整合检测4只阳性(3♀、1♂,整合率12.5％).构件产生的3只母鼠和4号后代... 相似文献
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为研究山羊乳蛋白基因编辑，实现羊乳“人源化”改造。利用CRISPR/Cas9系统敲除山羊乳中致敏原β-乳球蛋白（BLG）基因，同时在BLG基因座定点敲入人乳铁蛋白（hLF）基因。针对山羊BLG基因第一外显子设计构建sgBLG/Cas9表达载体经电转染山羊胎儿成纤维细胞验证其编辑活性；将打靶载体BLC14与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞，经筛选检测获得BLG~-/hLF~+打靶细胞株作为供核细胞用于山羊体细胞核移植；通过剖宫产获取克隆胎儿并验证其中靶情况。结果表明：sgBLG/Cas9编辑山羊BLG位点致突变率约为30%～35%；共筛选72株药物抗性细胞株，其中有37株为基因打靶细胞，打靶效率为51.4%(37/72）；挑取形态较好的7株打靶细胞用于核移植，共制备416枚重构胚，移植30只受体山羊；30-35日龄B超诊断有13只受孕，妊娠率为43.3%(13/30）；剖宫产获取3只35日龄克隆胎儿均验证为BLG~-/hLF~+基因型，并建立了BLG~-/hLF~+靶向性修饰细胞系。因此，利用CRISPR/Cas9系统可以获得BLG基因座定点打靶hLF基因的转基因克隆山羊，该研究为培育羊乳中低致敏原和富含hLF功能营养成分的转基因山羊新品系提供了科学依据。 相似文献
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探讨获得外源基因高效转染山羊胎儿成纤维细胞(gFFCs)的方法,为筛选出体细胞核移植的供核细胞,制备转基因山羊提供技术基础。该研究以绿色荧光蛋白基因(GFP)为报告基因,采用脂质体LipofectaminTM LTX+PLUSTMReagent介导,对细胞接种量、质粒DNA用量、脂质体与质粒DNA比例、脂质体-DNA复合物与细胞作用时间进行优化,荧光显微镜下统计转染后24h的转染效率。结果显示：在24孔培养板中,每孔接种细胞6×104个,24h后进行转染,质粒DNA每孔0.6μg,脂质体与质粒DNA比例为4.5：1.0,脂质体-DNA复合物与细胞作用时间为6 h时,转染效率最高,达到81.2％。 相似文献
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桂林东北部中蜂的越夏,特别是夏末秋初这一段时间,是一年中最难管理的时期。因为这时天气热、蜜源少而且敌害多,在蜂群的管理工作上如不特别注意,群势很容易迅速下降,个别蜂群甚至垮掉。现将我几年来在中蜂越夏管理工作中的点滴经验介绍如下:(一)强群越夏。越夏的蜂群一般要有六框以上的群势,而且要蜂脾相称或者蜂多于脾;切忌蜂少于脾或弱群越夏。因为群势弱或者蜂少于脾,箱内温度、湿度都不易稚持正常,蜂群的发展会受到很大的影响。例如卵不孵化现 相似文献
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