大宗淡水鱼高温季节鱼病防治措施     

周勇  曾令兵 《科学养鱼》2018,(8)

正问:近几年大宗淡水鱼高温季节一般会暴发哪些病害?答:夏季是养殖鱼类生长的黄金时期,同时也是鱼病暴发的高峰期。伴随高温季节的到来,养殖鱼类受环境变化影响应激反应加剧,抵抗力下降,极易导致病害发生与流行。近年来,大宗淡水鱼类高温季节暴发的病害主要包括:草鱼出血病、鲫造血器官坏死症、鲤疱疹病毒病、鲤鱼浮肿病、淡水鱼细菌性败血症、烂鳃病、细菌性肠炎病、赤皮病、指环虫病、车轮虫病、锚头鳋病等。  相似文献   

培养基更换后草鱼出血病灭活疫苗的免疫效果     

曾令兵  左文功  廖来强  田先文 《淡水渔业》1994,24(4):6-7

使用廉价培养基ＣＡＳ在ＣＩＫ细胞系上增殖草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ—８５４株），所制备的灭活疫苗性能稳定，安全性好。用该疫苗免疫草鱼，饲养１０天后，其血清中和抗体水平测定结果表明，注射组为１０７．９±１１．０（３），浸泡组为６８．５±９．９（３），与对照组［２０．２３±４．５（３）］相比，Ｐ值分别为Ｐ＜０．００１和０．００１＜Ｐ＜０．０１，差异极显著。  相似文献   

斑点叉尾病毒病研究概述     

孟彦  肖汉兵  曾令兵 《淡水渔业》2007,37(5):72-75

简要介绍了斑点叉尾病毒病的临床症状、流行病学特征、诊断与防治方法以及病毒的生物学特性与检测技术等。  相似文献   

夏季水产养殖管理技术要点     

曾令兵 《新农业》2011,(3):44-45

夏季是一年中渔业生产最关键时期。但是,由于夏季温度高,昼夜温差大,水体上下温差明显,水质变化快,病原菌滋生,特别是持续高温天气时,养殖鱼类受环境变化影响,应激反应加剧,抵抗力下降,极易导致病害发生与流行,造成经济损失。  相似文献   

鲤疱疹病毒Ⅱ型TaqMan real-time PCR 检测方法的建立及应用   总被引：1，自引：1，他引：0  

周勇  曾令兵  张辉  范玉顶  徐进 《水产学报》2013,37(4):607-613

针对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)DNA解旋酶基因编码区序列设计特异性引物,利用PCR技术扩增出长度为1446 bp的基因编码区片段,克隆到pMD19T载体上,构建重组质粒.经PCR鉴定与测序分析确认正确后,以10倍梯度稀释重组质粒,作为标准模板进行TaqMan real-time PCR扩增,制作标准曲线,建立了鲤疱疹病毒Ⅱ型的荧光定量PCR检测方法.检测结果显示,标准曲线的相关系数(R2)达到0.9991,斜率为-3.412;对初始模板定量检测的范围为1×101～1×107 copies/μL;特异性试验结果表明,该方法可特异性地检测出鲤疱疹病毒Ⅱ型,而对大鲵虹彩病毒(GSIV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)以及空白对照无检测信号.取江苏射阳和宝应两地疑似患病鲫组织核酸作为模板进行荧光定量PCR,结果表明反应体系中的病毒量分别为6.89×104 copies/μL和3.02×102 copies/μL.本研究建立的鲤疱疹病毒Ⅱ型TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对因鲤疱疹病毒Ⅱ感染引起的养殖鲫造血器官坏死症的诊断与病毒病原定量检测有重要意义.  相似文献   

大鲵虹彩病毒β-丙内酯灭活方法的研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

孙建滨  曾令兵  张辉  孟彦  徐进  周勇  王芳  李瑞伟  刘秋凤 《淡水渔业》2013,43(3):66-71

为探讨β-丙内酯(β-propiolactone,BPL)灭活大鲵虹彩病毒(Giant salamander iridovirus,GSIV)的最适条件,研究了BPL对GSIV的灭活方法。采用终浓度分别为0.025%、0.05%、0.1%、0.2%的BPL灭活细胞培养的GSIV,4℃条件下分别灭活24 h、48 h、72 h、96 h,通过细菌培养、细胞培养、病毒核酸PCR扩增以及鱼体感染试验进行灭活病毒的安全性检验,确定最适灭活条件。试验结果表明,GSIV经终浓度为0.1%的BPL 4℃灭活处理72 h后可完全灭活病毒,灭活病毒无细菌污染,接种对GSIV敏感的鲤上皮瘤细胞系(EPC)细胞无细胞病变效应(CPE)出现,病毒主衣壳蛋白(MCP)基因特异性引物PCR反应未扩增出靶基因产物,灭活病毒对健康大鲵的感染试验未出现疾病症状。灭活效果检测结果表明,与未灭活GSIV相比较,最适灭活条件下的GSIV结构蛋白与抗原性未发生显著变化。结论显示BPL可用来灭活GSIV,本研究确立了BPL灭活GSIV的最适条件,为大鲵虹彩病毒细胞培养灭活疫苗研究奠定了重要基础。  相似文献   

草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法的建立     

张金凤  曾令兵  张辉  周勇  肖艺  苏岚  高正勇 《中国水产科学》2012,19(1):129-136

根据草鱼呼肠孤病毒 (grass carp reovirus, GCRV)衣壳蛋白VP6编码基因的序列设计特异性引物, 以病毒全基因组RNA为模板, 通过对反应条件进行优化, 建立了GCRV的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。检测结果表明, 本方法可在63℃下1 h内实现靶片段的大量扩增, 扩增产物经凝胶电泳呈现梯型条带, 反应体系中添加SYBR Green I 荧光染料后, 绿色阳性结果明显区别于橙色阴性结果。该检测体系针对草鱼呼肠孤病毒的检测灵敏度高, 其最低检测限为33 pg, 与常规RT-PCR方法相比较, 灵敏度高10倍, 且与斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(CCRV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、大鲵虹彩病毒(GSIV)等无交叉反应。该方法灵敏度及特异性高, 且不需昂贵仪器设备, 为快速检测草鱼呼肠孤病毒与诊断草鱼出血病提供了简捷快速的技术手段。

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斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因 shRNA干扰载体的构建及效果评价     

黄桂菊  陈健光  喻达辉  曾令兵  龙华 《水产学报》2012,36(3):343-349

利用Invitrogen公司的在线生物学软件分析斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因,设计针对CP基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列[其结构特征为正链(19 nt)-环(4 nt)-负链(19 nt)]。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定向克隆到干扰载体pENTRTM/U6中,构建shRNA干扰载体pshRNA-124、pshRNA-896和pshRNA-NNV。然后,用脂质体转染法分别将3种shRNA干扰载体和pEGFP-CP基因共转染导入黑头呆鱼(FHM)肌肉细胞,荧光显微镜观察细胞荧光强度,分析荧光抑制效率,Real-time RT-PCR检测CP基因mRNA的表达水平变化。结果表明,在pEGFP-CP与shRNA干扰载体共转染组,pshRNA-124、pshRNA-896、pshRNA-NNV的荧光抑制效率分别为47%、68%、51%。3种shRNA干扰载体都有干扰效果,均能干扰绿色荧光蛋白的表达,其中pshRNA-896干扰效率最好。Real-time RT-PCR检测表明,干扰质粒pshRNA-124、pshRNA-896、pshRNA-NNV对pEGFP-CP基因的沉默效率分别约为60%、96%和55%,与对照组相比差异显著(P<0.05)。研究表明,靶向斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因的shRNA干扰载体构建成功,为进一步运用RNA干扰技术进行CP基因的功能研究奠定了基础。  相似文献   

鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2) ORF25蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备     

彭俊杰  张琪  贾路路  林蠡  袁军法  曾令兵  周勇  刘学芹 《华中农业大学学报》2017,36(2):96-101

利用PCR方法扩增鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)ORF25基因的部分基因序列,并将扩增产物连接到原核表达载体pGEX-KG,成功构建了CyHV-2-ORF25-KG重组质粒。IPTG将其诱导后,SDS-PAGE分析表明:目的蛋白得到表达,分子质量大小为42ku,且主要以包涵体形式存在;用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,多次免疫后通过细胞融合,筛选出1株单抗5C6;经间接免疫荧光试验和Western blot试验验证,这株单抗可以识别CyHV-2ORF25蛋白。  相似文献   

实时定量PCR测定(鮰)爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数     

曾令兵  刘晓丹  张晓君  高波  韩先干  高雯  付立霞 《淡水渔业》2018,(4):63-70

为测定(鮰)爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)隐蔽质粒的拷贝数, 并探究不同基因组制备方式及定量策略对质粒拷贝数测定的影响, 分别采用试剂盒和水煮法制备(鮰)爱德华氏菌基因组, 通过绝对定量和相对定量PCR测定两种不同总DNA制备方式下的隐蔽质粒拷贝数, 同时测定试剂盒对染色体DNA和质粒DNA的回收率.结果显示, 以试剂盒提取的总DNA测得的pEI1和pEI2拷贝数绝对定量和相对定量分别为3.63 ± 0.30、 5.04 ± 0.18和4.22 ± 0.15、 5.13 ± 0.50, 显著低于以水煮法测得的pEI1 和pEI2 拷贝数的绝对定量11.84 ± 0.80、 11.70 ± 0.25和相对定量13.85 ± 1.64、 11.90 ± 0.97.回收率结果显示, 试剂盒对染色体DNA的回收率(45.8 ± 4.1)% ,显著高于对质粒pEII的回收率(25.1 ± 0.5)%和pEI2的回收率(31.3 ± 1.7)% .结果表明: 通过实时定量PCR测定(鮰)爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数时, 基因组的制备以水煮法为宜,(鮰)爱德华氏菌隐蔽质粒pEI1和pEI2均属于中拷贝质粒.  相似文献