猪LFA-1和CTLA-4实时荧光定量PCR检测方法的建立     

遇奇  李焕荣  孙英健  隋丽华 《勤云标准版测试》2009,29(21)

摘要：【研究目的】建立猪LFA-1和CTLA-4实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据GenBank中核苷酸序列设计猪淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的特异性引物,经RT-PCR扩增、目的片段与载体连接转化以及重组质粒的鉴定,并对重组质粒标准品和样品cDNA进行检测,构建LFA-1和CTLA-4荧光定量RT-PCR标准曲线。【结果】以1×109~1×102拷贝/μL不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增后,统计学分析显示标准品浓度的对数与Ct值之间存在良好的线性关系（LFA-1：RSq =0.992;CTLA-4：RSq =0.994）;样品检测显示LFA-1与CTLA-4引物的扩增曲线图和熔解曲线图的特异性。【结论】所构建的质粒标准品具有线性关系好、重复性好、敏感性高等特点,以及其引物在样品检测中的可应用性,为分析猪免疫细胞在感染病毒前后LFA-1和CTLA-4表达的变化以及评估猪体免疫功能,提供必要的技术平台。  相似文献   

副鸡禽杆菌lpxM蛋白的原核表达及免疫原性研究     

梁之瑄  梅晨  张雪  徐浩钧  支岩  李焕荣  王宏俊 《中国畜牧兽医》2024,(2):719-727

【目的】探究副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum)外膜蛋白lpxM的免疫原性,为预防鸡传染性鼻炎提供理论参考。【方法】构建pET-28a-lpxM原核表达载体,经PCR扩增和双酶切鉴定后将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,并对诱导时间和诱导浓度进行优化,用尿素缓冲液纯化重组蛋白lpxM并进行SDS-PAGE分析。利用Western blotting鉴定重组蛋白的特异性。将重组蛋白与MONTANIDEISA 71 VG佐剂制备成疫苗v-lpxM,通过动物试验观察重组蛋白的免疫效果。【结果】重组质粒pET-28a-lpxM转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后成功表达,在37 ku处有目的蛋白特异性条带,在37℃、700 mmol/L IPTG、诱导4 h时蛋白表达量最高;重组蛋白lpxM在上清和沉淀中均有表达,且在沉淀中表达量相对较高;Western blotting结果显示,C型副鸡禽杆菌Modesto株的阳性鸡血清与纯化后的重组蛋白可发生免疫反应。免疫保护试验结果显示,v-lpxM疫苗对A、B和...  相似文献   

软包装杏制作工艺的研究     

徐晓伟  李焕荣 《农村科技》2012,(11):58-60

一、材料与方法1.试验材料鲜杏,护色剂,硬化剂,包装材料。2.试验方法①制做工艺鲜杏→清洗→去核→硬化、护色→汁液调配→灌装→排气及密封→杀菌→冷却→保温→检验→成品。②试验设计杏罐藏原料品种筛选:以小白杏、赛买提、库买提3种品种鲜杏为原料,经硬化处理,杀菌预试验,根据杀菌后的感官品质,筛选出适宜罐藏的品种。熟度筛选:分别以绿熟转色期、黄熟期鲜杏为原料,经硬化、护色、杀菌预试验,根据杀菌后的感官品  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒BD01株S1基因的特性分析     

阮文科  张永红  李焕荣  甄晶晶  袁雪琴  崔德凤 《动物医学进展》2007,28(10):7-11

用RT-PCR扩增了鸡传染性支气管炎病毒(IBV)DB01株S1基因,获得了约1.7 kb的基因序列,利用DNAMan软件对DB01株S1基因的核苷酸和氨基酸序列与标准疫苗株H120、H52和M41进行比较.结果表明,其同源性均低于80%,亲缘关系比较远.在DB01的S1蛋白氨基酸序列上出现了5个新的糖基化位点,1个糖基化位点丢失,其中有3个变异位点在抗原表位上.亲水性也发生了较大变化.  相似文献   

猪源大肠杆菌热稳定肠毒素的检测     

崔德凤  张永红  李焕荣  孙英健  田洁 《中国兽医杂志》2004,40(1):17-20

致病性大肠杆菌产生一种或多种肠毒素称为肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxigenic E．COLI ETEC)．ETEC是引起幼畜腹泻的重要病原菌。ETEC能借助于所产生的菌毛抗原粘附于动物小肠黏膜。定居并产生作用于肠壁的外毒素，称为肠毒素。主要有两类肠毒素：一类是不耐热性肠毒素即热敏感肠  相似文献   

猪生殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型共感染对猪外周血天然免疫细胞含量的影响     

施开创杨汉春  郭鑫李焕荣  盖新娜陈艳红 查振林 《中国兽医科技》2007,37(1):7-11

将猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪圆环病毒2型（PCV2）单感染和共感染的6周龄仔猪，于感染前和感染后第3、7和10d，采用血常规法、SWC3a单色流式细胞术以及CD3／CD4／CD8三色流式细胞术分析了感染猪外周血中白细胞、粒细胞、单核细胞、NK细胞、弦T细胞的含量。结果，感染后第3d和第7d，PRRSV感染组、PCV2感染组以及PRRSV＋PCV2共感染组猪的白细胞、单核细胞、粒细胞、NK细胞、弦T细胞总数显著下降，并且共感染组比单感染组下降更加严重。结果表明，PRRSV＋PCV2共感染对仔猪外周血天然免疫细胞的影响具有协同效应，意味著在感染旱期可导致更加严重的先天免疫抑制。  相似文献   

PRRSV和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞CD80-CD86mRNA转录的影响     

郭鑫磨美兰  周双海陈艳红查振林  杨汉春李焕荣 《中国兽医科技》2007,37(1):43-48

用猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）与猪圆环病毒2型（PCV2）共感染40日龄健康大白仔猪，利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞（PAM）共刺激分子CD80一CD86的mRNA转录水平进行了定量分析。结果表明，在感染后第3d和第7dCD80与CD86mRNA转录显著下调（P〈0．05），感染后第14dCD86mRNA转录水平仍低于未感染对照组。尽管CD80mRNA转录水平在第14d和第28d高于对照组，CD86mRNA转录水平在第28d高于对照组，两者在第42d均高于对照组，但无显著差异。证实，PRRSV和PCV2共感染可导致猪肺泡巨噬细胞的共刺激分子CD80-CD86基因转录在感染早期明显受到抑制，PAM的抗原呈递能力受到影响。  相似文献   

青海省牛病毒性腹泻/黏膜病血清学调查     

董永森  刘秀清  李焕荣  汪雨  罗自清  唐文山 《黑龙江畜牧兽医》2014,(8):66-67

<正>牛病毒性腹泻/黏膜病(BVD/MD)是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)引起的,主要发生于牛的一种急性、热性传染病。BVDV感染牛的典型症状是牛病毒性腹泻、急慢性黏膜病、发热以及随后的产奶量下降。病毒可通过胎盘感染,从而可导致怀孕母牛的流产和死产,产下存活的小牛可出现免疫耐受,并会终生排[1]  相似文献   

种鸡沙门菌病的诊治及净化效果检测     

董永森  刘秀清  李焕荣  汪雨  罗自清  唐文山 《黑龙江畜牧兽医》2014,(4):66-67

<正>种鸡沙门菌病是种鸡场的一种常见传染病。种鸡感染后,其种蛋孵化出的雏鸡带菌率很高,平均带菌率达20%。据相关资料报道,该病在育成期可造成鸡群的均匀度大大地降低;在成年鸡时,造成蛋鸡开产推迟1~2周,产蛋率降低10%~30%,没有产蛋高峰,蛋壳质量差,斑点蛋、沙壳蛋、白壳蛋增多,产蛋期死淘率增加3%~5%。2012年12月份承德市  相似文献   

猪呼吸道冠状病毒及实验室诊断方法研究进展     

李焕荣  张春叶  林祥梅  路苹  于同泉 《北京农学院学报》2007,22(2):78-80

从猪呼吸道冠状病毒（porcine respiratory coronavirus,PRCV）基因组特点、结构蛋白、病毒变异与演化、实验室诊断等方面论述PRCV的研究进展,对进一步地了解该病毒的特性,制定合理的预防和检疫措施,防止该病传入中国奠定基础。  相似文献