辛酸-硫酸铵联合沉淀法在单克隆抗体纯化中的应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈丹  孙广瑞  柳增善 《安徽农业科学》2007,35(26):8105-8105,8108

[目的]为了解决在单克隆抗体纯化中纯度与产量的矛盾。[方法]分别采用辛酸法、硫酸铵法和辛酸-硫酸铵联合沉淀法,研究对抗体的纯化效果。[结果]结果表明,单纯使用辛酸法或硫酸铵法都没有很好的纯化效果,而采用辛酸-硫酸铵联合沉淀法纯化效果很好。[结论]辛酸-硫酸铵联合沉淀法完全可以满足ELISA试验的要求,但在操作中要控制好反应条件。  相似文献   

小尾寒羊溶菌酶基因的克隆与差异表达分析     

李闯  徐云明  唐峰  邹德颖  刘楠楠  郭兴  杨咏洁  周玉  柳增善 《中国畜牧兽医》2013,40(3):19-22

本试验从猪种布鲁氏菌S2疫苗株免疫雄性小尾寒羊构建的白细胞层SSH cDNA文库中筛选1段cDNA序列,经测序和BLAST同源性搜索比对发现其为溶菌酶重组片段,该片段大小为770 bp,编码148个氨基酸残基,编码的蛋白质是一种天然抗感染物质,已提交GenBank,登录号为JX263305。经荧光定量PCR分析,与正常组羊相比,在S2免疫14和30 d的羊白细胞层中该溶菌酶基因表达轻微上调,但差异不显著(P>0.05);在免疫40 d时恢复到正常水平。这也进一步说明溶菌酶是一种存在机体内必不可少的天然免疫因子,为布鲁氏菌病有效防控方面的研究奠定了基础。  相似文献   

梅花鹿朊蛋白核心片段的基因克隆与高效表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

刘东  卢士英  李岩松  李兆辉  王光明  张媛媛  周玉  宋杰  柳增善  任洪林 《中国畜牧兽医》2012,39(3):78-80

本试验根据梅花鹿朊蛋白基因序列设计引物,利用PCR的方法从梅花鹿基因组DNA中扩增朊病毒蛋白酶抵抗区域PrP^res,将该片段分别与表达载体pET-Trx和pET-His连接,构建重组表达载体pET-Trx-PrP^res和pET-His-PrP^res。分别将两个重组表达载体转入E.coli BL21(DE3) plys宿主菌中,37 ℃诱导4 h,经SDS-PAGE分析,Trx-PrP^res和His-PrP^res表达量分别为38.2%和30.1%。  相似文献   

蛋鸡心包积水综合征病原鉴定及组织灭活疫苗紧急免疫试验     

刘吉山  肖跃强  褚仁忠  于雪  姚春阳  苗立中  杨慧  柳增善  沈志强 《动物医学进展》2017,38(7)

2016年4月,山东蛋鸡养殖规模25 000余只的鸡场发生了一种高致死率传染病,病死率15%以上。通过临床症状观察、病理剖检、血凝试验、动物回归试验、PCR检测及血清型分析,确诊该病为禽腺病毒Ⅰ群4型感染所致。无菌采集该养殖场病死鸡肝脏,制备组织灭活疫苗,对鸡群进行紧急注射免疫,免疫接种后7d,病死鸡数量开始逐渐下降,12d后完全停止发病死亡,最终成功控制了该病。应用制备的同源组织灭活疫苗紧急免疫鸡群有效控制了禽腺病毒Ⅰ群4型的感染,为该病提供了一种可靠的防控措施。  相似文献   

小鼠CD40胞外段的原核表达及多克隆抗体的制备     

曹旗  潘悦  郑宇  王菡  任洪林  胡盼  李岩松  周玉  柳增善  卢士英 《湖北农业科学》2020,59(6):130-134

为了探讨CD40抗体与CD40结合对B细胞应答小分子半抗原的增强作用,利用TRIzol法提取BALB/c小鼠脾脏总RNA,并反转录成cDNA;根据CD40的胞外段CDS设计引物,通过PCR扩增目的基因,构建pGEX4T-1-CD40表达载体,进行原核表达及多克隆抗体制备。结果表明,成功扩增了522 bp的目的基因,表达并纯化获得了45 ku的CD40重组蛋白,多克隆抗体抗体不但可与重组蛋白结合,与小鼠脾脏天然CD40蛋白也可以特异性结合。说明CD40重组蛋白表达成功,且制备的抗体有望模拟CD40L为B细胞活化提供第二信号。  相似文献   

抗疲劳功能性食品添加剂方剂设计     

梁俊荣  张西臣  柳增善 《勤云标准版测试》2004,(2)

实验以香菇、L -肉碱、二十八醇、牛磺酸、维生素E为原料 ,采用正交试验方法进行了抗疲劳功能性食品添加剂方剂设计 ,得到四个较优配方 ;通过游泳耐力和生化指标的测定研究了四个较优配方的抗疲劳效果。结果表明 ,四个较优配方均能显著延长小鼠游泳时间 ,降低血清尿素氮和血乳酸含量 ,具有明显的抗疲劳效果  相似文献   

鸡胆汁中鹅去氧胆酸转化为熊去氧胆酸的研究     

刘光泽  柳增善 《中国兽医学报》1998,18(1):74-76

以鸡胆汁为原料,通过不和谐梭菌（Ｃ．ａｂｓｏｎｕｍ）的转化作用,使鸡胆汁中部分鹅去氧胆酸（ＣＤＣＡ）转化为熊去氧胆酸（ＵＤＣＡ）,并在薄层板上表现为与熊胆相同的胆汁酸组成。该结果为通过细菌转化作用制备ＵＤＣＡ及熊胆替代品研究提供了实验依据。  相似文献   

经密码子优化的小反刍兽疫病毒H蛋白在昆虫细胞中的表达     

刘拂晓  ;吴晓东  ;李林  ;柳增善  ;王志亮 《兽医大学学报》2014,(4):521-525

小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV）属于副黏病毒科、麻疹病毒属成员。本实验室已经证明,该病毒的囊膜糖蛋白H蛋白在未经密码子优化条件下难以在昆虫细胞中表达。本研究首先对其密码子进行优化,然后构建了在昆虫细胞中表达该蛋白的重组杆状病毒。经Western-blot和间接免疫荧光试验表明,该重组杆状病毒在昆虫细胞中能够表达H蛋白,但表达量相对较低。  相似文献   

拟态弧菌OmpK基因的克隆及原核表达     

李研东  李菲  卢士英  任洪林  周玉  朱元银  宫彬彬  柳增善 《中国畜牧兽医》2009,(6)

克隆拟态弧菌(Vibrio mimicus)OmpK(outer membrane protein K)基因并进行相关序列的分析.根据已发表的拟态弧菌OmpK基因序列设计合成引物,以拟态弧菌CGMCC 1.1969标准株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得801bp片段并测序,序列已提交至GenBank(GenBank登录号为FJ462707).拟态弧菌OmpK序列比对结果显示,溶藻弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、河弧菌OmpK基因序列的同源性均大于78%.该基因编码1个含267个氨基酸残基的蛋白质,预测分子质量为29.6 ku.利用基因工程方法将该基因片段定向克隆至表达载体中,并在大肠杆菌中获得高效表达,表达后的OmpK蛋白分子质量约为28 ku.  相似文献   

李斯特氏菌因子血清的制备及食品检测的免疫磁性分离-PCR(MIPA)方法的建立   总被引：3，自引：0，他引：3  

商海涛  柳增善  陈贵连  刘明远  张让堂  徐克诚  王跟领 《中国兽医学报》1999,(4)

首先进行了李斯特氏菌因子血清的研制，制备出了可对所有李斯特氏菌分型的 １５ 个 Ｏ 抗原因子和４ 个 Ｈ 抗原因子的因子血清。利用复合因子血清的多克隆抗体包被磁性球，对食品中的单核细胞增多性李斯特氏菌进行免疫磁性分离，并与 Ｐ Ｃ Ｒ 方法相结合，建立了检测食品中单核细胞增多性李斯特氏菌的 Ｍ Ｉ Ｐ Ａ方法（免疫磁性分离—聚合酶链反应方法，ｍ ａｇｎ ｅｔｉｃ ｉｍ ｍ ｕｎｏｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）。对菌液、模拟样品的检测表明，本方法能够有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对 Ｐ Ｃ Ｒ 检验的干扰作用。食品样品在 Ｅ Ｂ增菌液中增菌 １２ ｈ 后，检测的敏感度达 ５ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ Ｌ，可以在 ２０ ｈ 内完成检测。本方法对实际食品样品的检测结果，与国家标准检验方法检测的结果一致。  相似文献