番木瓜eIF(iso)4E基因克隆及其结构和表达分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

言普  沈文涛  高新征  李亚丽  周鹏 《园艺学报》2009,36(10):1427-1442

 eIF4E ( eukaryotic translation initiation factor 4E) 家族基因在多种病毒侵染植物过程中起重要作用。应用RT-PCR和RACE方法在番木瓜中克隆了cDNA全长为995 bp的eIF4E异构体基因, 命名为CP-eIF(iso)4E(GenBank登录号为FJ595992) 。其编码的蛋白含有206个氨基酸, 蛋白一级结构中的活性部位位点高度保守, 三维结构中可能的抗性位点位于帽结合区域( cap-binding pocket) 表面。半定量RT-PCR结果表明, CP-eIF ( iso) 4E在番木瓜叶片中表达较弱, 在花瓣中表达最强。  相似文献   

P型PRSV-VPg蛋白与寄主eIF4E蛋白的互作     

胡正龙  肖旭倩  沈文涛  言普  黎小瑛  周鹏 《热带作物学报》2009,30(7):1013-1018

为研究番木瓜环斑病毒P型株系(PRSV-P)的病毒基因组连接蛋白(VPg)与寄主eIF4E蛋白的互作,采用双分子荧光互补技术(BiFc),通过基因枪转化法轰击洋葱表皮,在荧光显微镜下观察两者间的互作结果.结果表明:番木瓜eIF4E与P型PRSV-VPg,西瓜eIF4E与P型PRSV-VPg蛋白均发生互作.eIF4E与VPg的互作为研究通过转基因方法抑制或过量表达突变关键位点的寄主因子,阻断关键因子互作获得抗病植株提供了可行性依据.  相似文献   

果实成熟软化机理研究进展   总被引：15，自引：0，他引：15  

朱明月  沈文涛  周鹏 《分子植物育种》2005,3(3):421-426

果实在采收后仍然是活的有机体，在贮藏过程中会发生不断的软化现象。果实的成熟软化是一个非常复杂的发育调控过程，其间经历了一系列生理生化的变化，包括细胞壁的降解、内含物的变化、呼吸速率以及其他的代谢变化。本文就果实成熟软化方面的进展进行了综述，介绍了与果实成熟软化过程相关的胞壁酶(多聚半乳糖醛酸酶、果胶酯酶、木葡聚糖内糖基转移酶、纤维素酶、糖苷酶等)、胞膜酶(脂氧合酶)、胞内酶(淀粉酶和蔗糖酶)以及植物激素(乙烯、生长素、细胞分裂素、赤霉素、脱落酸)等在果实成熟软化过程中含量的变化和作用，并对软化机理进行了探讨。综合表明，果实的成熟软化过程受多种酶、植物激素等因素的影响，各种酶活性的变化情况及植物激素的作用在不同种类、不同品种果实中表现不同。果实成熟软化机理的探讨为果实的贮藏、保鲜及加工提供了理论依据，具有现实的意义。  相似文献   

猴面花miRNA及靶基因的生物信息学预测     

李崇奇  沈文涛  言普  黎小瑛  周鹏 《贵州农业科学》2015,(1)

以猴面花基因组序列为试材,通过psRobot网站进行茎环结构预测,应用blast-2.2.27+软件与rfam数据库和pfam数据库比对后去除非miRNA序列,应用bioedit分析miRNA序列及前体序列的碱基组成特点。结果表明:猴面花基因组中共发现105条成熟miRNA序列,分别属于49个不同miRNA家族;miRNA序列和其侧翼序列都存在碱基偏倚现象,miRNA5′端第1碱基和第19碱基尿嘧啶和胞嘧啶出现的频率分别为67.6%和49.5%;93个miRNA预测到了靶基因,其中有64个靶向转录因子。  相似文献   

番木瓜果实膨胀素基因部分序列的克隆及分析     

牛艳梅  沈文涛  卢雅薇  周鹏 《热带作物学报》2007,28(4):47-50

膨胀素(Expansin)是一类存在于植物细胞壁上,并能快速缓冲张力,使植物细胞壁松驰的蛋白质。以成熟番木瓜果实总RNA反转录得到的cDNA为模板,设计简并引物进行PCR,得到1个大小为531bp的基因片段,编码177个氨基酸,并存在expansin的保守区域,命名为Cp-EXP1。番木瓜expansin的成功克隆为研究番木瓜的生长发育以及其品种的改良等打下了良好的基础。  相似文献   

我国番木瓜抗环斑病毒种质资源创新研究及应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

周鹏  王树昌  沈文涛  言普  黎小瑛 《热带作物学报》2013,33(5):51-55

针对我国具有自主知识产权的番木瓜环斑病毒抗病资源匮乏,制约我国番木瓜育种产业发展的关键问题及现有育种发展研究基础,指出利用现代生物技术开展番木瓜种质资源创新研究是我国番木瓜创新育种的必由之路,为我国番木瓜育种产业的健康和可持续发展提供理论依据。  相似文献   

PRSV-NIb基因同源dsRNA的原核表达及其在番木瓜叶片原生质体瞬时表达体系中诱导RNA沉默的研究     

杨国峰  沈文涛  言普  黎小瑛  周鹏 《热带作物学报》2013,34(6):1076-1081

为探索利用PRSV-NIb基因同源dsRNA的原核表达产物在体外防治番木瓜环斑病毒的可行性,利用较保守的PRSV-NIb基因3’端的312、501和809 bp区段分别构建了含有PDK内含子的3个发夹RNA编码结构,并选用pSP73和M-Jml09LacY分别作为宿主载体和宿主菌构建了高效的dsRNA原核表达工程菌M-Jml09LacY/pSP73-RNAi-N312、M-Jml09LacY/pSP73-RNAi-N501、M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-N809,经IPTG诱导成功表达了dsRNA,并证明dsRNA不被DNase I和RNase A降解,稳定性较好.还利用PRSV-NIb基因构建了GFP瞬时植物融合表达载体pNIb-GFP,对经3种dsRNA和GFP瞬时融合表达载体共转化的番木瓜叶片原生质体的共聚焦显微镜观察及通过半定量RT-PCR对其中mRNA表达量的分析,结果表明融合基因NIb-GFP的表达均发生了不同程度的下调,说明dsRNA在原生质体中引发了针对同源基因的沉默.  相似文献   

不同居群连香树种子形态变异及其与环境因子相关性分析     

吕家兴  沈文涛  马永红 《林业科技》2020,45(1):34-37

分析不同居群连香树种子形态变异及其与环境因子相关性,结果表明:不同居群间种子长宽、种翅长宽和千粒重均存在显著差异,按大小排序均为白龙江种>药山种>美姑种,种子形态与纬度、气温、海拔、降水等环境因子之间有显著关系,且呈现较好的稳定性。  相似文献   

利用ID-ELISA技术调查分析海南3种主要番木瓜病毒分布及感病情况     

杨勇  庹德财  沈文涛  言普  黎小瑛  周鹏  王锐萍 《热带作物学报》2015,36(10):1866-1872

利用PCR方法分别扩增番木瓜环斑病毒（papaya ringspot virus,PRSV）、番木瓜畸形花叶病毒（papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV）和番木瓜花叶病（papaya mosaic virus,PaMV）的外壳蛋白（coat protein,CP）基因,并连接到原核表达载体pET-28a上,获得重组质粒pET28-PRSV-CP、pET28-PLDMV-CP和pET28-PaMV-CP,通过转化、诱导表达后,经SDS-PAGE分析显示,这3种CP蛋白在大肠杆菌中高效表达,其中PRSV CP蛋白和PLDMV CP以包涵体形式存在,PaMV CP以可溶蛋白形式存在。利用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化获得了3种病毒的重组CP蛋白,并免疫大白兔获得高效价的抗体。Western blot检测结果表明,这3种抗血清与对应的诱导表达蛋白发生特异反应。再采用抗血清建立一种快捷、简便和低成本的ID-ELISA（Indirect enzyme-linked immunosorbent assay）技术,并利用此技术对海南岛283个疑似感病的番木瓜样品进行检测鉴别,初步掌握了海南岛3种主要番木瓜病毒的分布及感病情况,为下一步该病的有效防治策略提供科学依据。  相似文献   

混合感染番木瓜PRSV/PLDMV株系基因组全长cDNA的克隆和实时荧光定量PCR分析     

刘芳  庹德财  沈文涛  言普  黎小瑛  周鹏 《热带作物学报》2016,37(4):742-751

番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)与番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)存在混合感染的现象,近年来混合感染发病率逐年递增,是一种新的威胁番木瓜种植业的病毒病害。运用RT-PCR和RACE方法从混合感染样品中克隆获得2种病毒基因组全长c DNA,分别命名为PRSV-LM和PLDMV-LM,Gen Bank登录号分别为KT633943和KT633944,基因组序列大小分别为10 325、10 153 nt(不包括3′端的poly A)。序列分析表明:PRSV-LM与单独感染样品中的PRSV海南分离物HN(Gen Bank登录号:EF183499)的核苷酸序列和氨基酸序列相似性最高,为94%;PLDMV-LM与单独感染样品中的PLDMV海南分离物Hainan-DF(Gen Bank登录号:JX974555)核苷酸和氨基酸序列相似性最高,分别高达99%和97%。进化树分析显示,PRSV-LM和PLDMV-LM分别与单独感染样品的PRSV和PLDMV海南分离物有共同的进化起源。进一步利用实时荧光定量PCR对混合感染样品的PRSV与PLDMV病毒积累量进行分析,结果表明,混合感染样品中PLDMV病毒积累量大约是PRSV含量的100倍。研究结果为进一步探究PRSV/PLDMV混合感染发病机制奠定基础。  相似文献