犬瘟热疫苗株CDV3的血凝素基因的克隆与序列分析     

王凤雪  闫喜军  邵西群  柴秀丽  温永俊  吴威 《黑龙江畜牧兽医》2007,(7):118-120

犬瘟热是由犬瘟热病毒(CDV)引起的犬科、鼬科、浣熊科等多个科属动物感染的一种急性、热性传染病,犬、水貂、狐狸、貉等动物极易感染此病。近年来,国外对CDV蛋白组成和基因组结构的研究已经较为深入。CDV基因组为负链线性RNA,总长15 690 bp,由15 616个核苷酸组成。病毒粒子中主  相似文献   

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的变异分析     

冷雪  李真光  王凤雪  温永俊  王炜  夏铭崎  武华 《吉林农业大学学报》2012,(4):443-448,453

从天津和内蒙古猪场中分离到2株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(TJ和NM1),将TJ株经Marc-145细胞连续传代92代,得到致弱疫苗株TJM株。采用RT-PCR方法扩增TJ、NM1和TJM完整的ORF5基因片段,进行序列测定,并与其他国内外毒株的ORF5基因序列进行了比较和变异分析。结果表明:TJ株和NM1株ORF5基因与国内分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)具有较高的同源性,均为99.5%~99.8%,与欧洲型PRRSV同源性最低,分别为63.3%和63.5%。致弱疫苗株TJM与其原始毒株TJ相比有4个氨基酸发生突变(F23S,G80V,R151K,Q196R),这些突变可能与TJ株毒力的降低有关。  相似文献   

表达PRRSV 强弱毒Nsp2的Marc 145细胞系的建立及Nsp2蛋白对PRRSV复制的影响     

王凤雪  刘准  温永俊  冷雪  李真光  武华 《西北农业学报》2012,21(3):1-6

为探讨Nsp2蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的影响,采用体外克隆法构建表达高致病性PRRSV TJ株和其致弱毒TJM株Nsp2基因的真核表达质粒pEGFP-TJ Nsp2和pEGFP-TJMNsp2,含有增强式绿色荧光蛋白表达盒,瞬时转染重组质粒到Marc-145细胞系单层,利用G418抗性筛选建立细胞系,通过PCR和RT-PCR鉴定。PRRSV感染筛选的细胞系,检测病毒TCID50。结果建立稳定表达TJ株和TJM株Nsp2基因的猴肾细胞系Marc-145-TJ Nsp2和Marc-145-TJM Nsp2;在表达PRRSV TJ株和TJM株Nsp2蛋白的Marc-145细胞上感染PRRSV病毒,在复制早期病毒时增殖速度快,即Nsp2蛋白对PRRSV复制早期有正向调控作用,并且强毒的Nsp2此作用更明显。  相似文献   

布鲁菌Rev.1株eryA基因的原核表达及间接ELISA方法的建立     

程家海  宋前进  郭昊  侯丽娜  杨超  王凤雪  关平原  温永俊 《畜牧与饲料科学》2020,41(6):7-12

通过对布鲁菌优势抗原eryA基因进行原核表达,在获得目的蛋白的基础上建立以该蛋白为包被抗原的间接ELISA方法。构建原核表达载体pET-30a-eryA,并将其转入大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,镍柱亲和纯化eryA重组蛋白,SDS-PAGE 鉴定纯化蛋白,Western-Blotting检测反应原性后建立间接ELISA方法。反应条件优化后,抗原包被浓度为0.312 5 μg/mL,37 ℃包被2 h;封闭液为5%猪源明胶,37 ℃作用2 h;血清稀释度为1∶100,37 ℃作用1 h;酶标抗体稀释度为1∶8 000,37 ℃作用45 min。血清稀释度为1∶1 600时,仍然检测为阳性,证明建立的间接ELISA方法灵敏性良好;其他菌种及病毒经过特异性检测,均为阴性,证明建立的间接ELISA方法特异性良好;通过重复性检测,批间及批内变异系数均小于10%,证明建立的间接ELISA方法重复性良好。检测临床血清样品,建立的方法与试管凝集试验总符合率为95.7%,证明该方法可初步应用于临床诊断。  相似文献   

狐阴道加德纳氏菌病灭活疫苗免疫监测及效果评价     

闫喜军  柴秀丽  赵传芳  邵西群  王凤雪  姜莉莉 《特产研究》2007,29(3):5-7

应用RBPT和Dot-ELISA方法对狐阴道加德纳氏菌病灭活疫苗免疫狐狸进行抗体监测。结果表明,疫苗接种第7d血清抗体阳转,第21～30d抗体达到高峰,高水平抗体可持续180d。通过免疫抗体与攻毒保护相关性测试,RBPT检测抗体在1:16和Dot-ELISA检测抗体在1∶320可抵抗GVF强毒菌株攻击获得保护,两种方法可以作为狐阴道加德纳氏菌病灭活疫苗效力检验评价方法在生产中应用。  相似文献   

犬副流感病毒血清抗体流行病学调查     

闫喜军  夏咸柱  柴秀丽  田宏宇  王凤雪  邵西群 《黑龙江畜牧兽医》2007,(5):75-76

犬副流感病毒(CPIV)属副黏病毒亚科茹布拉病毒属成员,是引起犬窝咳和脑脊髓炎的主要病因。CPIV对犬、狐的神经系统有较强的感染力,病情严重可导致患病动物死亡。CPIV常与细菌、病毒、支原体混合感染,使病情加剧,对犬养殖业危害较大。En-glund L等[1]采用血凝抑制试验对犬进行流行病学调查,结果表明28%的犬呈现阳性。为了解我国犬副流感病毒的流行病学情况,2004—2005年,笔者对部分省区犬科动物犬副流感病毒血清抗体进行了监测,现将结果报道如下。1材料与方法1.1血清样品犬血清154份,分别从吉林、长春、延吉、哈尔滨、沈阳等地区兽医站…  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染相关受体的研究概况     

王凤雪  温永俊  武华 《黑龙江畜牧兽医》2010,(9)

  相似文献   

水貂肠炎细小病毒结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

闫喜军  张海玲  柴秀丽  吴威  易立  王凤雪  邵西群  罗国良 《特产研究》2007,29(4):1-3,6

对水貂肠炎细小病毒SMPV-11株结构蛋白VP2基因进行扩增,获得了基因序列全长为1755bp的SMPV-11株VP2基因,其编码584个氨基酸;应用DNAStar分析软件对该序列进行同源性分析发现,SMPV-11株VP2基因与其他6株水貂肠炎细小病毒株核苷酸和氨基酸均有较高的同源性,分别为99.2%～99.4%和98.6%～99.1%,与猫泛白细胞减少症病毒标准株CU-4株同源性为99.3%和99.1%,系统发生树分析表明它们属于同一个分支。本研究为水貂肠炎细小病毒分子流行病学调查和新型疫苗的研究奠定基础。  相似文献   

水貂肠炎细小病毒灭活疫苗抗体消长规律的研究     

闫喜军  柴秀丽  吴威  丛丽  罗国良  邵西群  王凤雪  赵春霏 《经济动物学报》2007,11(4):199-201

应用血凝抑制试验对水貂肠炎细小病毒灭活疫苗免疫水貂进行抗体水平动态监测,结果表明,疫苗接种14 d抗体达到保护,21~30 d抗体水平达到高峰;免疫180 d抗体仍在保护值以上。攻毒试验证实,免疫180 d后90%免疫水貂获得保护,确定水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗免疫保护期可持续6个月。  相似文献   

核酸水平检测犬副流感病毒方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

王凤雪  闫喜军  柴秀丽  张海玲  罗国良  易立  邵西群 《中国动物检疫》2007,24(12):24-25

根据GenBank中与犬副流感(CPIV)同源性较近的SV5病毒N基因保守序列,利用DNAStar软件设计了一对特异性引物,能扩增265bp大小的片段,并以此建立了检测CPIV的RT-PCR方法,实验证明该对引物特异扩增CPIV;不扩增犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒和狂犬病病毒犬的四种病原的核酸。检测临床病料20份,其中2分为CPIV阳性。此法敏感性较高。是检测犬急性传染性呼吸道疾病(CIRD)中CPIV的有效的方法。  相似文献