春兰基因组DNA提取方法的研究   总被引：20，自引：0，他引：20  

陈惠云  孙志栋  茅轶俊  王晓武  葛红 《分子植物育种》2006,4(1):135-142

本文以春兰(Cymbidiumgoeringii(Rchb.f.)Rchb.f.)为研究试材,对植物基因组DNA提取方法中的若干影响因子诸如药品、试剂配制方法、DNA取材部位、蛋白质去除次数、DNA析出时间、提取样品水浴时间等进行了比较分析,试图找出春兰基因组DNA提取的最佳方法。结果表明:采用进口的CTAB提取效果比国产的CTAB要好,特别适用于花药的提取,蛋白质去除效果很好;SDS提取缓冲液配制方法很重要,不同的SDS缓冲液配制方法,其提取效果差异较大。春兰花苞的DNA提取得率较叶片高,但是叶片DNA的纯度则相反,叶片较花苞高。在提取花苞基因组DNA过程中,增加氯仿/异戊醇抽提次数,对去除DNA中蛋白质、多糖及其它杂质有一定的作用,但是对DNA的损失也是很明显的。从实验效果来看,氯仿/异戊醇抽提次数以2次为宜。提取基因组DNA在异丙醇沉淀时,采取挑取絮状沉淀的方法,也可减少蛋白质、多糖等其它杂质的影响,从而提高DNA纯度。无论是叶片还是花苞材料,采用异丙醇沉淀5min,一般析出的以核酸基因组DNA为主,蛋白质为次,核酸析出量在80%以上。继续沉淀(15min)的产物中DNA含量明显较低,而且沉淀的纯度相对不高,因此异丙醇沉淀时间可以缩短到10min之内以提高DNA的纯度。使用CTAB法提取DNA时,水浴时间至少需要30min,过短的水浴时间会造成DNA得率的下降,同时过长的水浴时间,如超过1h,则可能会引起DNA的降解,或者最后产物中增加其他杂质,因此,适宜的水浴时间当为40￣60min。  相似文献   

大白菜回交导入系群体构建及其遗传分析   总被引：3，自引：1，他引：2  

汪骞  和江明  林良斌  庄木  王艳  王晓武  武剑 《园艺学报》2009,36(9):1305-1310

 利用大白菜栽培品种的DH系Z16和白菜型油菜自交系L144杂交的F1获得包括119个株系的DH群体。用相同亲本的F₁与Z16进行独立回交, 利用25个独立回交的BC₂分别得到这些株系的DH系,选择每个BC₂的4~6个DH系构建121个株系的BIL群体。进一步利用SSR和SRAP标记构建了DH群体遗传图谱, 由10个连锁群组成, 包括245个分子标记, 总长度714 cM, 平均遗传图距2.9 cM。再以此图谱为参照, 用锚定在染色体上的97个SSR标记研究供体亲本L144的染色体片段在B IL群体中覆盖基因组比率。在BIL群体中来源于L144的基因组片段占0.84% ~35.00% , 平均为11.31% , 接近理论遗传预期值12.50%。在25个BC₂的BIL株系中供体亲本L144等位位点占1.69% ～27.36% , 平均为11.03%。  相似文献   

大白菜DH群体TuMV抗性的QTL定位与分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

张晓伟  原玉香  王晓武  孙日飞  武剑  谢从华  蒋武生  姚秋菊 《园艺学报》2009,36(5):731-736

 利用已构建的包含287个标记位点的遗传图谱的大白菜DH群体,采用多模型QTL作图的方法,通过苗期人工接种TuMV-C₄株系对来自抗病亲本Y195 93和感病亲本Y177-12的DH群体的TuMV抗性进行QTL分析。共检测到3个QTLs,分别位于R03、R04和R06连锁群上,解释的表型变异在10.5%~21.9%之间,3个QTLs可解释40.0％的表型总变异。其中位于R04上命名为Tu-2的QTL解释的表型变异最高,为21.9%,其余两个位于R03和R06上的QTLs,分别解释10.5%和14.5%的表型变异。  相似文献   

小白菜小孢子培养再生植株的倍性与基因组DNA甲基化的关系     

姚军  武剑  王晓武  秦智伟 《中国蔬菜》2009,1(14):12-16

对小白菜品种进行游离小孢子培养,得到9株再生植株,其中2株为单倍体,7株为二倍体,二倍体自然加倍率为77.7 %。为 避免材料间差异,取单倍体和二倍体再生植株各2株,提取单株DNA,分别构建单倍体和二倍体DNA混合池。利用甲基化敏感性限制性 内切酶-PCR法,结合SRAP分子标记技术,对2个DNA混合池进行筛选,共筛选768对引物,只有在未酶切的单倍体和二倍体DNA池中SRAP 引物扩增无差异,而酶切后有差异的条带,才认为是单倍体和二倍体甲基化差异。试验共获得8对含有多态性的引物,试验结果证明 小白菜小孢子培养获得的再生植株的倍性与基因组DNA甲基化有关。  相似文献   

一个用于甘蓝显性雄性不育基因转育辅助选择的SCAR标记   总被引：19，自引：2，他引：17  

王晓武  方智远  孙培田  刘玉梅  杨丽梅  庄木 《园艺学报》2000,27(2):143-145

一个与甘蓝显性雄性不育基因连锁的ＲＡＰＤ标记ＯＴＩＩ９００被转化为显性的ＳＣＡＲ（Ｓequence Characterized Amplified Region) 标记STII900,它可用于甘薯显性雄性不育基因转育辅助选择。  相似文献   

基于Gateway技术的拟南芥雄性不育GHF基因表达载体的构建     

胡金艳  张书祥  王晓武  武剑 《勤云标准版测试》2007,(12)

随着模式植物拟南芥全基因组测序工作的完成更多雄性不育相关基因功能需要阐明。利用拟南芥突变体库,从反向遗传学角度进行突变基因的功能研究需要构建相应的载体进行互补实验。Gateway技术是一种高效,快速的克隆系统。笔者利用Gateway克隆技术成功构建拟南芥GHF基因表达载体,并遗传转化拟南芥,为进一步阐明该基因功能奠定了基础。  相似文献   

蔬菜叶色突变体研究进展   总被引：3，自引：0，他引：3  

苗晗  顾兴芳  张圣平  王晓武 《中国蔬菜》2007,1(6):39-42

综述了蔬菜叶色突变体产生原因、来源、分类、遗传研究、发生机制、外界影响因素以及分子生物学研究进展,并对今后蔬菜叶色突变体的研究工作进行了展望。  相似文献   

rNP-ELISA检测抗猪流感病毒抗体工作条件的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

李曦  符芳  周艳君  王晓武  童光志 《中国兽医杂志》2007,43(10):21-22

猪流感是生猪养殖的国家普遍都会遇到的猪的呼吸道病[1]。虽然HI检测已经被作为可信赖的抗流感病毒抗体的检测方法[2]。但是,应用ELISA方法检测抗体具有明显的优势,对于待检血清不需要进行任何处理,而且也不必要对应用的抗原进行更换与选择[3]。试验采用的包被抗原为重组NP蛋白  相似文献   

番茄Cf-4-Avr4互作系统中信号转导基因的克隆与功能分析     

刘庆  冯东昕  王晓武  杜永臣 《园艺学报》2006,33(1):52-57

 通过基因序列分析从抗叶霉病的番茄(含Cf-4基因) 中筛选出1个参与植物过敏反应的基因RGL (Resistance Gene L ike) 。采用酵母双杂交方法, 从番茄cDNA文库中筛选出两个与该基因的编码蛋白发生互作的蛋白, 分别命名为RGLIP-1和RGLIP-2 (RGL Interacting Protein) 。RGLIP-1全长291个氨基酸, 与类囊体内腔蛋白同源性较高, RGLIP-2全长248个氨基酸, 与拟南芥转导素高度同源。利用病毒诱导的基因沉默(Virus-Induced Gene Silencing, VIGS) 技术进行了基因功能分析。结果表明, 这两个互作蛋白参与了与植物抗病相关的过敏反应(Hypersensitive Response, HR) 。  相似文献   

百合三种病毒的多重RT-PCR检测   总被引：14，自引：1，他引：13  

徐榕雪  明军  穆鼎  刘春  汤庚国  王晓武 《园艺学报》2007,34(2):443-448

根据基因库中黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、百合斑驳病毒（Lily mottle virus,LMoV）、百合无症病毒（Lily symptomless virus, LSV）的外壳蛋白基因序列,设计了3对特异引物,通过对扩增条件进行优化,建立了同时检测CMV、LMoV和LSV的多重RT-PCR检测方法。该方法可以从带有CMV、LMoV和LSV的样品中同时扩增出3条大小与试验设计相符的657 bp (CMV) 、428 bp（LMoV）、171 bp (LSV)的特异性多重RT-PCR扩增带。扩增产物测序表明,CMV、LMoV和LSV 3种病毒与GenBank中登录的亚洲和荷兰多数分离物核苷酸同源性在90%以上,地域差异不明显,外壳蛋白序列高度保守。  相似文献