产低温碱性蛋白酶黄海黄杆菌YS-9412-130的复合诱变原生质体选育   总被引：7，自引：0，他引：7  

王跃军  孙谧  张云波  洪义国  阎晓玲  王春波  刘晓萍 《海洋水产研究》2000,21(4):20-25

以黄海黄杆菌YS－9412－130突变株SW1－104为出发菌,在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体,对原生质体进行复合诱变,对大量再生突变株进行筛选和淡水驯化,最终获得了高产、稳定的碱性蛋白酶产生菌SW2－104,在自来水培养基中能够大量产酶,产酶活力为3910U／ml。从而解决了黄海黄杆菌YS－9412－130低温碱性蛋白酶大规模工业化生产设备和产业化区域的局限性。  相似文献   

黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶多克隆抗体的制备   总被引：3，自引：0，他引：3  

洪义国  孙谧  王跃军  张云波  郑家声  郝建华  王瑞娟  王春波 《海洋水产研究》2000,21(4):41-45

利用纯化的黄海黄杆菌海洋低温碱性蛋白酶（Marine Low-temperature Alkaline Protease,MLAP),采用背皮内多点注射和皮下组织注射免疫相结合的方法对新西兰白兔进行免疫,制备了多克隆抗体,并对多克隆抗体进行了纯化。用ELISA的方法对其效价检测表明,其效价为128000。作者所做的Western印迹实验证明了抗原抗体的结合具有高度的特异性。  相似文献   

海洋低温溶菌酶的制备及酶学性质   总被引：17，自引：0，他引：17  

王跃军  孙谧  张云波  洪义国  郝建华  刘晓萍  王春波 《海洋水产研究》2000,21(4):54-63

对一株海洋杆菌产低温溶菌酶的分离纯化及理化性质进行了研究。20℃下将菌株在含有葡萄糖、酵母膏、胰蛋白胨的标准海水培养基中震荡培养40h。获得活性大约为150U/ml的溶菌酶上清液。上清液经SMB-20生物型错流超滤系统浓缩、透析及CM-Sepharose-FF阳离子交换层析（  相似文献   

海洋低温碱性蛋白酶亚慢性毒理学研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

于业军  仲伟珍  房丽华  万瑞香  綦淑芬  闫凤霞  王跃军  张云波  王春波 《海洋水产研究》2000,21(4):75-86

应用大鼠经口、经皮肤亚慢性毒性试验,对海洋低温碱性蛋白酶毒理学进行研究。120只Wistar大鼠,随机分为6组：对照组,海洋低温碱性蛋白酶1.2g/kg(经口）,1.2g/kg、0.135g/kg、0.015g/kg(经皮）和1.2g/kg(经皮追踪组）,用药周期90d,追踪组增加28d观察。记录和检测大鼠的一般状况和体质量增长、脏器系数、血常规、凝血时间、肝肾功、部分血液生化和离子浓度及病理检查。结果表明,海洋低温碱性蛋白酶各组（经皮、经口）大鼠的各项指标与对照组比较均未见明显异常（P均＞0.05）,提示大鼠能耐受长期给予1.2g/kg（经皮、经口）的海洋低温碱性蛋白酶。  相似文献   

一株产低温碱性蛋白酶嗜冷海洋细菌YS-9412-130的分离和培养条件研究   总被引：17，自引：0，他引：17  

孙谧  王跃军  张云波  洪义国  阎晓玲  陈毓桢  王春波  刘晓萍 《海洋水产研究》2000,21(4):1-5

自海水贝类中取样,经分离培养基和酪蛋白培养基复合培养,用检测蛋白酶产生水解圈和Folin-酚碱性蛋白酶活性测定相结合的方法从1000多份样品中初步筛到了产碱性蛋白酶活力高、性能优良的菌株YS－9412－130。对其初步研究结果表明,该菌只能利用有机氮源生长;在接近自然海水盐度、温度20℃、pH在7.0-9.0条件下,菌体生长和产酶较好。  相似文献   

扇贝超氧化物歧化酶的纯化及性质研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

王跃军  孙谧 《海洋水产研究》1998,19(2):69-75

采用加热,盐析及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析的方法,从扇贝内脏团中分离得到一种高等电点的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）该酶由２８１个氨基酸组成,等电点为８．３０。纯酶的比活为２６１６．４Ｕ／ｍｇ蛋白,最大紫外吸收峰２７０．５ｎｍ,为Ｃｕ．Ｚｎ－ＳＯＤ,由二个亚基组成,亚基分子量为１５０００Ｄｒ。此外还研究了该酶其他的理化性质。  相似文献   

黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶性质鉴定   总被引：8，自引：3，他引：8  

孙谧  修朝阳  王跃军  陈丽芳  张云波  洪义国  阎晓玲  韩艳波  李晶  陈良 《海洋水产研究》2001,22(2):1-10

对黄海黄杆菌YS-9412-130菌株产低温碱性蛋白酶的理化性质研究表明，该酶由256个氨基酸组成，分子量为33000Dar，等电点pI为9.45，米氏常数Km为5×10-3mmol/L；酶的最适作用pH范围为9.5～10.5，最适作用温度30℃，具有一定的抗氧化稳定性。Ca2+、Mn2对酶有激活作用，而Hg2+、Ag+对酶有抑制作用。DFP、NBS严重抑制酶的活性,而同时该酶也能被EDTA抑制。结果表明该低温碱性蛋白酶为一新型的丝氨酸蛋白酶。  相似文献   

产低温碱性蛋白酶黄海黄杆菌YS-9412-130高产菌株的选育   总被引：6，自引：0，他引：6  

张云波  孙谧  洪义国  王跃军  阎晓玲  董美娜  桑玉泉  田杰  王瑞娟 《海洋水产研究》2000,21(4):14-19

以黄海黄杆菌YS－9412－130菌株为出发株,经亚硝基胍、硫酸二乙酯、紫外线（UV）与微波（MI）复合诱变和自然选育,获得1株产低温碱性蛋白酶高产稳定的突变株YS－9412－130－SW1－104,其产低温碱性蛋白酶为出发株的16倍。在摇瓶发酵培养条件下,酶活力达2320U／ml(20℃测定）,该诱变株具有Ref^r、Str^r、Amp^r和Met^-、Lys^-标记。突变株与出发菌株在细胞形态上比较,结果表明二者没有显著差异。  相似文献   

黄海黄杆菌YS-9412-130产酶发酵条件的优化   总被引：4，自引：0，他引：4  

张云波  孙谧  王跃军  洪义国  阎晓玲  田杰  谢峰  姜展军 《海洋水产研究》2000,21(4):26-35

以产低温碱性蛋白酶的黄海黄杆菌YS－9412－130突变株SW2－104为培养菌株,进行碳源、氮源、无机盐、起始pH值、培养时间、接种量和接种龄等发酵条件的优化实验。实验结果证明,在以1％葡萄糖为碳源,以3.5％豆饼粉为氮源,无机盐：0.4%Na2HPO4、0.03%KH2PO4、0.02%MgSO4、0.1%Na2CO3、0.2?Cl2,起始pH值7.0,接种12h种龄的种子4％,20℃、250r/min的条件下在旋转摇床中培养36h,菌株产酶活性最高。  相似文献   

海洋低温溶菌酶抗肿瘤活性的初步研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

张云波  孙谧  蔡勤  王跃军  洪义国  郝建华 《海洋水产研究》2001,22(3):24-31

通过观察海洋低温溶菌酶对体外培养细胞株增殖的影响、对角膜诱生血管的影响、对小鼠肉瘤S180（实体型）及对小鼠肝癌HAC（实体型）的抑制作用，探讨海洋低温溶菌酶抑制肿瘤生长活性。结果表明，该酶与蛋清溶菌酶在抑瘤作用机制上有很大区别，海洋低温溶菌酶具有血管生成抑制因子的活性，故对肿瘤生长具有明显的抑制作用。  相似文献