中国野生华东葡萄抗白粉病转录因子VpRFP1基因原核表达、纯化及多克隆抗体制备   总被引：1，自引：0，他引：1  

余义和  徐伟荣  李树秀  黎涛  王跃进 《农业生物技术学报》2011,19(1)

为揭示中国野生华东葡萄抗病转录因子基因在与葡萄白粉病互作过程中的作用机制,本研究以中国野生华东葡萄(Vitis pseudoreticulata W.T.Wang)高抗葡萄白粉病株系白河35-1为材料,接种葡萄白粉病菌(Unicinula necator(Schw.)Burr.)病原菌诱导后7个不同时期的反转录产物为模板,用RT-PCR扩增得到V.pseudoreticulata RING-finger protein1基因(VpRFP1)的开放阅读框1053bp;将其克隆到pMD19-T载体经测序后,亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体并转化大肠杆菌(Escherichia.coli)BL21;经IPTG诱导表达出64kD的融合蛋白GST-VpRFP1,主要以包涵体表达形式存在;采用电透析法纯化融合蛋白,并以纯化产物免疫新西兰大白兔获得抗血清,Western blot检测免疫-抗原反应良好。本研究结果表明,在27℃、0.1mmol/L的IPTG诱导4h融合蛋白GST-VpRFP1的表达量最大,免疫大白兔获得的抗血清能够用于VpRFP1基因的功能分析。  相似文献   

葡萄抗病基因mRNA差异显示体系的建立及优化     

王跃进 《农业生物技术学报》2005,13(2):254-255

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老树     

王跃进 《中国林业》1997,(5)

老树文／王跃进摊开所有的日子用心读你读你干瘪的皱纹读你百年的孤独在你苍老容颜的背后有生活的热望有生命的成熟有无言的启迪□老树@王跃进...  相似文献   

猕猴桃雄性基因RAPD标记及其应用     

姚春潮  王跃进  刘旭峰  龙周侠王跃进 《农业生物技术学报》2005,13(5)

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中国野生葡萄芪合成酶基因原核表达与融合蛋白纯化*     

王跃进 《农业生物技术学报》2006,14(1)

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中国野生毛葡萄转录因子VqWRKY6与VqbZIP1互作调控抗白粉病功能分析     

张洁  姜长岳  王跃进 《中国农业科学》2022,55(23):4626-4639

目的 欧洲葡萄作为世界葡萄主栽品种,具有产量高、品质佳的优点,但对病害抵抗能力差。白粉病是严重危害葡萄栽培的一种真菌性病害,中国野生葡萄资源丰富,可为抗病育种提供充足种质资源。论文旨在筛选调控抗白粉病的葡萄转录因子基因,探究转录因子基因调控抗白粉病的作用机理,为选育葡萄抗病品种提供优质的基因资源。方法 从中国野生毛葡萄‘商-24’中克隆得到转录因子基因VqWRKY6,使用DANMAN和MEGA-X软件对序列进行分析。利用PEG介导转化拟南芥原生质体进行亚细胞定位分析发挥转录调控作用的位置,利用酵母双杂交和双分子荧光互补试验证明VqWRKY6能够和转录因子VqbZIP1互作形成转录复合体。以感病葡萄‘赤霞珠’叶片为试材,通过农杆菌介导法瞬时转化到‘赤霞珠’葡萄叶片,叶片进行白粉菌（Uncinula necator）接种后,观察发病症状,用台盼蓝染色在显微镜下观察菌丝发育进程,使用DAB染色观察活性氧积累,比较共同过表达VqWRKY6和VqbZIP1的葡萄叶片、单独过表达VqWRKY6的葡萄叶片、单独过表达VqbZIP1的葡萄叶片和对照组叶片的差异。使用实时荧光定量PCR技术对抗病基因在白粉菌诱导下的表达水平进行分析。结果 VqWRKY6定位于葡萄2号染色体,编码342个氨基酸,属于WRKY家族的group Ⅲ亚家族。亚细胞定位和酵母转录激活试验证明,VqWRKY6在细胞核内发挥转录调控功能且在酵母中有转录激活活性。‘赤霞珠’叶片共同过表达VqWRKY6和VqbZIP1后,叶片表面白粉菌菌丝扩繁速率显著慢于单独过表达VqWRKY6和单独过表达VqbZIP1的叶片,共同过表达VqWRKY6和VqbZIP1的叶片组织中活性氧含量显著高于单独过表达VqWRKY6和单独过表达VqbZIP1的叶片;此外,VqWRKY6和VqbZIP1的协同调控能够激活茉莉酸（JA）途径的PR3、PR4,基因表达量显著上调。结论 VqWRKY6和VqbZIP1协同作用可能通过激活JA抗病途径,促进活性氧产生,增强抗病基因表达,抑制白粉菌的生长,从而提高葡萄对白粉病的抗性。因此,中国野生毛葡萄‘商-24’是重要的抗病种质资源,而VqWRKY6与VqbZIP1可作为重要的抗病基因资源。  相似文献   

酥梨缺铁黄化症发生规律及防治技术的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

张朝红  王跃进  李琰 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2003,31(2):71-74

对渭北地区酥梨缺铁黄化症年周期发生规律和自流式树干注射防治缺铁黄化症技术进行了研究。结果表明 ,新梢速生期为黄化症迅速发生期 ,新梢完全停长期为缺铁黄化症的发病高峰期 ;在年周期内 ,防治时间愈早 ,防治效果越好 ;在试验注射量下 ,Fe SO4 以 5 g/ L的浓度为好 ,既能复绿又可避免药害 ;在不同含铁化合物中 ,有机铁、Fe2 +和 Fe3+都有一定的防治效果 ,以 Fe2 +最为理想 ;不同 p H注射液 ,其防治效果差异不明显。  相似文献   

潜在性缺铁条件下注射黄叶绿制剂对酥梨的影响   总被引：3，自引：1，他引：3  

张朝红  王跃进  张剑侠 《西北农业学报》2002,11(4):32-35

采用强力注射黄叶绿（YLG）注射专用肥对潜在性缺铁酥梨进行补铁试验。结果表明，施用YLG注射专用肥后，单叶面积增加13.23％，比叶重增加0.42干mg/cm^2，叶绿体各色素含量极显著增加，其中总叶绿素增加34.35％，净光合速率增加50.26％。叶片内N、P、Fe、Zn活性增加，其他金属元素下降，果实产量提高，品质变优，花芽分化率和花芽质量也明显提高。树干注射YLG可作为潜在性缺铁的一种补铁措施。  相似文献   

美国加州的葡萄生产与科研   总被引：9，自引：0，他引：9  

王跃进  万怡震 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2002,30(1):134-140

对美国加州的葡萄种质资源保存与研究、栽培技术、贮藏保鲜、病虫害防治、脱毒技术以及无核葡萄品种与育种等作了较为详细的论述 ;同时强调指出 ,我国进行葡萄引种时除重视经济性状外 ,还应特别注意病虫检疫。  相似文献   

缺铁黄化梨树根际土壤特性的研究   总被引：8，自引：2，他引：8  

张朝红  王跃进 《西北农业学报》2001,10(4):95-98

通过对酥梨正常树、轻度黄化树、重度黄化树的根际土和根丛土中 N、P、K、Fe、Mn、Cu、Zn、HCO3-及 p H的研究表明 :缺铁黄化使梨树根际 N、P、K、Mn、Cu明显富集 ,Fe在轻度黄化时亏缺 ,重度黄化时富集 ,Zn随黄化加重而亏缺值增大。根际土壤的 p H有下降趋势 ,缺铁黄化使这种趋势更加明显。HCO3-在根际和根丛土中含量均随缺铁黄化程度加重而增加。在高 p H和低有效 Fe的条件下 ,高 HCO3-是引起梨树缺铁黄化的主要因素 ,降低土壤中 HCO3- 含量是矫治黄化的关键措施  相似文献