抗C反应蛋白单域抗体噬菌体库的构建与初步鉴定     

张齐  张星星  钟发钢  王金泉  张小莺 《华中农业大学学报》2020,39(4):93-98

以CRP为免疫原免疫双峰驼后分离外周血淋巴细胞,提取总RNA后经逆转录制备cDNA,通过巢式PCR实验获得目的基因片段并克隆至噬菌体T7载体臂上,构建原始噬菌体库。随后进行4轮生物淘选,通过Phage-ELISA鉴定淘选后的噬菌体库,BamHⅠ、HindⅢ双酶切构建了pET-28a与阳性克隆的重组质粒,转化入BL21菌株中进行低温诱导表达。经过His-镍离子亲和层析柱纯化获得单域抗体,然后再用间接ELISA鉴定单域抗体与CRP的反应性。研究结果显示,试验成功构建了库容为1.08×10~8 cfu的抗CRP单域抗体噬菌体库,基因插入率为96.43%(27/28)。生物淘选获得了4株与CRP特异性结合的阳性克隆,4株阳性克隆表达载体构建成功,并在BL21细胞中成功表达单域抗体,分子质量约为22 ku。经ELISA鉴定,4个抗体均显示出高亲和力与特异性,其中V2与V3的抗体效价高达1∶3 200,证明该抗体能够适用于实际检测方法开发。  相似文献   

牛、羊油脂对小鼠脏器组织形态学及血液指标的影响     

孙宗扬  靳红娟  蒙建菊  王金泉  王俊丽 《中国农学通报》2019,35(2):116-121

旨在探究制备的牛、羊油脂对小鼠血液生理指标及脏器形态的影响及牛、羊油脂的部分免疫功能,为动物性脂肪产品的开发利用奠定基础。选择30 只体重28~30 g 的雄性昆明小鼠,分为生理盐水组（对照组）、羊油脂组以及牛油脂组,分别灌胃生理盐水、羊尾油脂及牛肾周油脂。30 天后眼球采血,测血液生理生化指标;采集心、肝、脾、胃、肾的组织样品称重,制作石蜡切片观察各脏器组织结构变化。羊油脂组的肝脏系数极显著高于生理盐水组(P＜0.01),胃脏器系数显著高于生理盐水组(P＜0.05),心、脾、肾脏器系数同生理盐水组无差异性(P＞0.05);牛油脂组心、肝器系数极显著高于生理盐水组(P＜0.01);脾、肾、胃脏器系数与生理盐水组无差异(P＞0.05)。2 种油脂均使小鼠血液白细胞显著增多,红细胞减少,羊油脂使血小板数目增加而牛油脂使血小板数目显著增加。在石蜡切片中观察到羊油脂组与牛油脂组心脏出现脂肪增加,少数心肌细胞发生脂肪变性,胃和肾周脂肪细胞增加,肝脏以及脾脏没有明显的变化。本试验结果表明牛、羊油脂具有一定的免疫功能。  相似文献   

乌鲁木齐生牛乳中金黄色葡萄球菌的肠毒素检测及分离株同源性分析     

赵琴  彭斌  黑孜哈提·斯叶提  朱亚磊  曹婉怡  王金泉 《动物医学进展》2023,(4):6-11

探究乌鲁木齐生牛乳中金黄色葡萄球菌经典肠毒素携带情况及分离株同源性差异，为金黄色葡萄球菌的防控提供参考。对乌鲁木齐地区采集的131份生牛乳样品采用特异性选择培养基结合PCR方法分离鉴定金黄色葡萄球菌，并通过PCR方法检测金黄色葡萄球菌5种经典肠毒素(sea、seb、sec、sed、see)携带情况和根据测序结果对分离株进行同源性分析。结果显示，共分离鉴定到金黄色葡萄球菌13株，总分离率为9.92%(13/131);13株金黄色葡萄球菌经典肠毒素阳性菌株5株，阳性率为38.46%;13株金黄色葡萄球菌的同源性在93.7%～99.7%之间，遗传差异在0.3～6.6之间。研究表明，该地区生牛乳中存在一定金黄色葡萄球菌的污染，经典肠毒素阳性率较高，不同来源的分离株同源性高、差异性小。  相似文献