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11.
鸭疫里默氏杆菌基因组文库的构建及免疫原性基因初步筛选 总被引：2，自引：2，他引：2
以血清1型鸭疫里默氏杆菌(RA)CH-1株为材料提取基因组DNA,采用限制性内切酶Sau3A进行部分酶切消化,纯化回收1.0~6.5 kb片段,用T4DNA连接酶将回收片段与经BamH酶切并去磷酸化的ZAP Express载体进行连接,用噬菌体包装蛋白包装。经测定包装滴度为5.23×106pfu/mL,蓝白斑筛选重组率为96.8%,表明已成功构建血清1型RA CH-1株部分基因组文库。在此基础上以RA抗血清为抗体探针进行免疫筛选,获得3个阳性克隆,经多次重复筛选后再体内删除,得到含有插入片段的质粒并测序。生物信息学分析结果显示,该序列(GenBank登录号:DQ151838)含有1个编码369个氨基酸的完整开放阅读框架,是尚未见报道的RA基因序列,并且存在多个预测的抗原表位。 相似文献
12.
基因枪轰击不同剂量小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在雏鹅体内的动态分布 总被引：1，自引：0，他引：1
本文开展了检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法的建立和基因枪轰击不同剂量(1、3和6μg)GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)在30日龄四川白鹅体内(心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠、胰腺、血液、脑及注射部位皮肤)分布规律的研究。结果表明:①建立的FQ-PCR特异性强、灵敏度高、重复性好,核酸模板数与FQ-PCR测定的Ct值相关系数达到0.999,具有很好的直线相关性;②pcDNA-GPV-VP3各剂量免疫雏鹅1 h即可在各组织中检测到,其中注射部位含量最高,肝、肾、淋巴器官(脾、法氏囊、胸腺、哈氏腺)含量较高;③到免疫后217 d时,1μg组免疫雏鹅各个组织器官内仍检测到pcDNA-GPV-VP3的存在,但多数组织器官中的含量比1 h时约少了4个数量级,其中免疫部位减少了7个数量级;④血液中pcDNA-GPV-VP3的含量较少,且免疫后1 h~217 d各时间点的差异不显著(P≥0.05);⑤不同剂量pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅各组织中的含量呈现的总体规律为6μg组>3μg组>1μg组,但差异不显著(P≥0.05)。因此,FQ-PCR是定量检测pcDNA-GPV-VP3在免疫雏鹅体内含量的可靠方法,pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后1 h时可分布至雏鹅体内各组织器官中并持续存在217 d以上。 相似文献
13.
用鸭病毒性肠炎病毒（DEV）CHv强毒株感染成年鸭复制鸭病毒性肠炎急性病例,分别于接种后不同时间,取心、肝、脾、肺、肾、胸腺、食道、十二指肠、胰腺、法氏囊和脑组织,制作切片,应用间接免疫荧光染色法（IFA）检测DEV在鸭体内的侵染过程和分布规律。结果显示：感染后4 h可在脾脏、胸腺和法氏囊中检测到DEV抗原;感染后6 h可在肝脏、食道、十二指肠、直肠及肺脏检测到DEV抗原;IFA对各组织器官中DEV的平均检出率为肝脏46/50、脾脏48/50、肺脏46/50、肾脏0/50、肠道46/50、法氏囊46/50、胸腺47/50、胰腺0/50、大脑0/50、食道44/50、心脏0/50。研究表明：在急性病例中,脾脏、法氏囊、胸腺、食道、肠道、肝脏和肺脏为DEV的主要靶器官;接种后,病毒首先在脾脏、胸腺、法氏囊中出现,然后病毒迅速传播到肝脏、消化道和肺脏中;IFA检测石蜡切片中DEV的方法具有直观、特异性强的优点,是对DEV进行检测和抗原定位的较好方法。 相似文献
14.
猪IL-2真核表达质粒构建及对PRRSV-ORF5基因疫苗免疫佐剂作用的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究应用真核表达载体pcDNA3.1（＋）和猪白细胞介素2（IL-2）基因成功构建了IL-2的真核表达质粒（pcDNA-IL-2）,探讨了pcDNA-IL-2作为分子免疫佐剂对猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）ORF5基因疫苗（pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5）免疫猪的增强作用。经间接ELISA法、MTT比色法及流式细胞仪分别对pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪、pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪、pcDNA3.1（＋）空载体和灭菌水免疫对照猪的血清抗PRRSV抗体IgG、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD4^＋和CD8^＋细胞比例进行检测,结果表明pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪的IgG含量、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD4^＋和CD8^＋细胞比例与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪相比有显著差异（P〈0.05）。说明pcDNA-IL-2能显著增强pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5基因疫苗免疫猪的体液和细胞免疫应答,可作为PRRSV基因疫苗的良好佐剂。 相似文献
15.
论述了疱疹病毒UL34基因的序列特点、编码蛋白结构特点、基本功能以及它与UL31蛋白、Us3蛋白、动力蛋白、核纤层蛋白的相互作用。表明，UL34基因对病毒的早期包装、成熟和出芽以及对UL31蛋白和核纤层蛋白在感染细胞中的正确定位都具有重要作用。 相似文献
16.
一种新发现的雏鹅传染病研究 总被引：17，自引：3，他引：14
１９９３年以来，四川省一些地区的３－３０日龄雏鹅发生一种传染病，死亡高峰期１０－１８日龄，发病率３０％－１００％，死亡率２５％－７５％有时可高达１００％，其临床症状和病理变化与小鹅曾有很多相似之处。利用原代鸭胚成纤维细胞培养及蚀斑克隆技术从不同地区分离到１０株病毒，分离病毒呈球形成椭圆形，无囊膜，直径７０－９０ｍｍ，不凝集鸡，鸭，鹅，鸽，黄牛，水牛及猪的红细胞，对氟仿不敏感，５６℃作用３－５ｈ不影 相似文献
17.
从四川省不同地区分离到２５６株鸭源多杀性巴氏杆菌，采用Ｃａｒｔｅｒ英膜群鉴定法和Ｈｅｄｄｌｅｓｔｏｎ热稳定抗鉴定法对其进行了血清学鉴定，并对原的部分特性进行了研究。 相似文献
18.
在32个月期间对10个牛群的14个月以上小母牛及成年母牛同时进行粪便细菌学培养和免疫琼扩(AGID)试验,以确定AGID试验诊断亚临床型牛副结核的效果。 在139头牛的粪样中有109头分离到副结核分枝杆菌,同时有28.8%(40/139)为AGID阳性,而在上述109头中有36头为AGAD阳性(33%)。如将屠宰时的结果包括在内,则培养法诊断为感染的117头,其中55头(47%)曾为AGID阳性。AGID假阳性最高上限为2.1%。 据培养的菌落数,AGID阳性的亚临床型感染牛粪中排菌数多(P<0.0001),对感染牛进行重复的细菌培养和AGID试验,均缺乏一致的阳性重复。 48头在犊牛期经副结核分枝杆菌菌苗免疫过的成年牛,有3头为AGID阳性,从其中1头粪便分离到副结核分枝杆菌,这表明在犊牛期免疫过的牛,其AGID假阳性率是低的。 程安春 摘译自 Am J Vet Res,1989,50(4):525～530 汪铭书校 相似文献
19.
免疫组化检测鸭疫里默氏杆菌（RA）方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
本文建立了间接免疫组化法（HRP-间接法）检测组织中的鸭疫里默氏杆菌，并从固定液、抗原修饰方法、洗涤液和洗涤方法、复染液、粘片剂几个方面进行了优化，其结果为以PLP为固定液，以ALES为粘片剂，以0.3％的甲醇-H2O2在湿盒中室温下孵育20min消除组织中的过氧化物酶及假过氧化物酶活性，免抗RAlgG与羊抗兔-HRP的稀释比例均为1：25，以4℃过夜作兔抗RAlgG的孵育条件，以10％白蛋白0．05％Tween-20pH7．4的PBS湿盒内室温孵育60min处理组织中非特异性染色因素；以TBST为洗涤液，空气振荡器70转／min摇洗2次，每次10min洗涤切片；以0．5％甲苯胺蓝作为复染液。此方法具有特异性强，无假阳性．经济，无需特殊仪器，简单易行的优点。 相似文献
20.