苦马豆素对人食道癌Eca-109细胞体外生长的抑制试验   总被引：10，自引：0，他引：10  

陈绍淑  赵宝玉  莫重辉  童德文  王立红  王凯  曹光荣 《动物医学进展》2003,24(3):91-92

探讨苦马豆素 (SW)对人食道癌 Eca-10 9细胞生长的抑制作用 ,以揭示 SW治疗食道癌的作用机制。选用不同剂量的 SW与食道癌Eca- 10 9细胞共同培养不同时间后 ,用 MTT法观察 SW对食道癌 Eca- 10 9细胞生长的抑制作用 ;细胞 DNA经特异性荧光染色后 ,用流式细胞仪分析细胞周期变化。结果 :SW对食道癌Eca- 10 9细胞生长的半数抑制浓度 IC50 <2 .5μg/ m L;细胞周期分析 ,Eca- 10 9细胞 G1期细胞增多 ,S期细胞减少。结果表明 :SW可通过抑制人食道癌 Eca- 10 9细胞系生长达到抑制肿瘤的目的。  相似文献   

甘肃棘豆化学成分研究——Ⅰ．碱水氯仿提取部位成分分析     

童德文赵宝玉  廉士刚樊泽峰 《动物毒物学》2003,18(1):51-55

甘肃棘草粉用甲醇浸提，浓缩浸提液后，1mol／L的盐酸酸解，抽滤，所得酸水液首先用氯仿萃取8次后．然后用NaOH碱化，最后碱水液经氯仿萃取4次后所得氯化液减压浓缩即得碱水氯仿提取部位。取碱水氯仿提取部位22．6g，在氯仿-乙酸乙酯-甲醇洗脱体系下，柱层析梯度洗脱进行分离，每30ml收集1份，共收集72l份，TLC检测．合并同类，得晶体Ⅰ，对晶体Ⅰ进行了分光光度和TLC鉴定，具体结构需进一步鉴定。对碱水氯仿提取部位进行气质联用分析．共有20种成分，确定了结构的成分有10种，分别是生物碱1种、酯6种、醇1种、芳香烃1种、脂肪酸1种，其它10种成分的结构还待进一步分析确定。  相似文献   

非洲猪瘟病毒D250R蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备     

许春梅  邵明珠  王心悦  林佳迪  郭建雄  张祥胤  童德文  梁瑞英  赵晓民 《中国畜牧兽医》2022,49(12):4745-4755

【目的】分析非洲猪瘟病毒（Africa swine fever virus,ASFV） D250R蛋白潜在的生物学功能,制备其多克隆抗体,为ASFV D250R蛋白功能研究及相关诊断试剂的研发提供材料。【方法】应用生物信息学软件分析D250R蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构、磷酸化位点、生物功能及蛋白结构等。通过大肠杆菌表达系统表达重组D250R蛋白,采用镍亲和层析柱和分子筛纯化重组D250R蛋白,Western blotting检测纯化蛋白的反应原性,将纯化的D250R蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,用间接ELISA方法测定多克隆抗体效价,用间接免疫荧光试验（IFA）检测多克隆抗体特异性。【结果】生物信息学分析结果显示,D250R蛋白共由250个氨基酸组成,理论分子质量为29 822.54 u,理论等电点为8.96,为亲水性蛋白,无信号肽及跨膜区。修饰位点预测结果显示,D250R蛋白可能存在15个磷酸化修饰位点,其中丝氨酸（Ser）6个、酪氨酸（Tyr）6个、苏氨酸（Thr）3个;2个N-糖基化修饰位点,分别位于第61和197位氨基酸处。生物学功能预测结果显示,D250R蛋白含有Nudix序列,具有解水解酶活性。蛋白结构预测结果显示,D250R蛋白二级结构中α-螺旋、β-转角、延伸链、无规则卷曲占比分别为49.20%、7.60%、15.20%和28.00%,三维空间结构存在较多α-螺旋,与二级结构预测结果基本一致。将ASFV D250R基因克隆至pET-32a （＋）获得pET-32a-D250R重组质粒,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,在16℃、1 mmol/L IPTG诱导下,D250R蛋白以可溶性和包涵体2种形式表达,蛋白大小约44 ku,蛋白上清经镍亲和层析柱和分子筛层析纯化得到纯度较高的蛋白;Western blotting检测结果显示,重组蛋白具有良好的反应原性;间接ELISA检测结果显示,D250R蛋白抗体效价达到1：256 000,成功制备多克隆抗体;IFA检测结果表明该多克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本研究在分子层面分析了D250R蛋白的理化性质及蛋白结构,在大肠杆菌表达系统中实现了ASFV D250R蛋白的高效表达,纯化的D250R蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体具有较高的特异性,为深入探讨ASFV D250R蛋白的生物学功能及ASFV相关诊断试剂的研发奠定了基础。  相似文献   

青海省草地棘豆属有毒植物危害调查与防治技术研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

沈明华  赵宝玉  莫重辉  王凯  常建军  童德文 《黑龙江畜牧兽医》2009,(10)

豆科棘豆属(Oxytropis)和黄芪属(Astragalus)植物的某些种是目前危害我国草原畜牧业生产最为严重的毒草.在可食牧草缺乏的情况下,动物被迫采食这种毒草后可引起以慢性神经机能障碍为特征的中毒,能使动物发疯,故形象地把这类毒草统称为疯草(locoweed).  相似文献   

猪传染性胃肠炎病毒非结构蛋白3a和3b融合表达及对细胞周期的影响     

梁亚冰  张琪  常嵘  童德文  许信刚 《中国农业科学》2015,48(2):352-361

【目的】克隆及真核表达猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus ,TGEV）陕西分离株的3a和3b基因,研究表达蛋白在细胞中的分布及其对细胞周期的影响。【方法】利用软件Primer 5.0参照Genbank公布的序列设计两对分别针对TGEV非结构蛋白基因3a和3b的特异性引物。采用RT-PCR方法从TGEV 陕西分离株克隆3a和3b基因,再将其与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建真核表达质粒p3a-EGFP-N1和p3b-EGFP-N1。利用脂质体转染法将重组质粒转染猪小肠黏膜上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）,采用激光共聚焦显微镜检测转染细胞内融合蛋白的表达分布情况。通过RT-PCR检测细胞中目的基因的转录情况,Western blotting检测细胞中融合蛋白的表达情况。利用流式细胞仪检测表达蛋白对细胞周期的影响,采用实时荧光定量PCR检测融合蛋白的表达对内质网应激蛋白标志性分子GRP78和细胞周期蛋白Cyclin A的表达的影响,通过Western blotting试验检测细胞中蛋白表达后GRP78、Cyclin A和Cyclin B1表达量的变化情况。【结果】成功克隆出完整的TGEV陕西分离株的3a及3b基因,经过测序鉴定,3a基因的大小为213bp,3b基因的大小为732bp;经过与不同来源的TGEV毒株进行对比分析,3a基因的核苷酸序列与其他毒株同源性为97.4%-100%,氨基酸同源性为98.6%-100%;3b基因的核苷酸序列与其他毒株同源性为98.3%-99.9%,氨基酸同源性为100%。重组表达载体转染IEC细胞后,经Western blotting分析IEC分别表达出分子质量约为35kD的3a-GFP和54kD的3b-GFP的融合蛋白,与预期结果相一致。激光共聚焦显微镜观察到融合蛋白3a-GFP和3b-GFP在IEC细胞的细胞核和细胞质中均有表达,流式细胞仪分析TGEV非结构蛋白3b的表达能够使G2/M期的细胞增多,实时荧光定量PCR分析显示细胞周期蛋白Cyclin A的mRNA水平高于对照组细胞（IEC和IEC-GFP）,同时Western blotting分析结果显示表达3b蛋白的细胞中Cyclin A 蛋白水平表达量高于对照组,并且Cyclin B1的表达量低于对照组细胞,差异显著;TGEV非结构蛋白3a对细胞周期没有影响。实时荧光定量PCR分析结果显示,表达TGEV非结构蛋白3a的细胞中GRP78的mRNA水平高于对照组, Western blotting分析GRP78的蛋白水平高于对照组,差异显著,说明非结构蛋白3a可以使GRP78表达水平的上调;TGEV非结构蛋白3b对GRP78的表达没有影响。【结论】TGEV陕西株的非结构蛋白3a和3b在IEC细胞中成功表达,3a蛋白可以引起细胞内质网应激反应,3b蛋白通过使细胞周期蛋白Cyclin A表达上调并且使Cyclin B1表达下调引起细胞周期阻滞于G2/M期。  相似文献   

3种苦马豆素人工抗原的合成及其免疫原性研究     

苟晨  刘文明  童德文 《西北农业学报》2008,17(3):28-32

比较了3种苦马豆素(Swainsonine,SW)人工抗原对小鼠的免疫原性,筛选出最佳的蛋白载体,为制备疯草毒素疫苗奠定基础。活性酯法制备SW-OVA、SW-BSA、SW-HSA 3种SW人工抗原,冷冻干燥后,紫外分光光度法测定偶联率。将56只昆系小白鼠随机分为SW-OVA大剂量组(A组)、SW-OVA小剂量组(B组)、SW-BSA大剂量组(C组)、SW-BSA小剂量组(D组)、SW-HSA大剂量组(E组)、SW-HSA小剂量组(F组)和空白对照组(G组),每组8只。A~F组分别接种3种SW人工抗原,首次免疫抗原的大、小剂量分别为50μg/只和100μg/只,第15天进行第2次免疫,抗原量均为第1次免疫抗原量的1.5倍,第29天进行第3次免疫,抗原量均为第2次免疫抗原量的1.5倍,G组对照,注射等量生理盐水。第28天开始检测血清中SW抗体效价。紫外光谱测定结果显示,本试验制备的SW-OVA、SW-BSA、SW-HSA 3种SW人工抗原偶联率分别为13、10和19。ELISA测定结果显示,A和B组的SW抗体效价一直保持很高的水平,A和B组小鼠血清的SW抗体效价于第98天分别到达最高峰13(log2)和12(log2);C~F组的SW抗体效价较低。结果证实,SW-OVA作为理想的免疫原,能够刺激小鼠的免疫应答,诱导产生很高的SW抗体,在防治动物疯草中毒方面具有理想的应用前景。  相似文献   

Shiva 1a基因在杆状病毒中的表达及其表达产物抑菌活性的检测     

许丹  许信刚  王志昇  闫东东  童德文 《西北农业学报》2011,20(6):33-37

根据GenBank上公布的shiva-1a的成熟肽基因序列,人工合成shiva-1a基因并加入6×His标签.将shiva-1a基因克隆到杆状病毒转座载体pBacFast-Dual中,筛选重组质粒,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选得到重组杆状病毒DNA,以脂质体介导法转染Sf-9昆虫细胞,待细胞出现病变后,收集上清液从而获得重组杆状病毒.用此杆状病毒感染的Sf-9细胞,Western blot检测出分子量约5 ku的shiva-1a多肽,与预期结果大小一致.体外抑菌试验证明,表达的shiva-1a多肽对大肠杆菌(DE3菌株)具有抑菌活性.  相似文献   

表达PRRSV GP3蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建     

赵红妮  许信刚  童德文  罗小毛 《西北农业学报》2011,20(10):6-11

构建表达猪PRRSV GP3蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。将去信号肽序列的PRRSV ORF3基因插入到表达载体pYA3341(Asd+)中,构建重组质粒pYA3341-ORF3。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(Asd-、Cya-、Crp-),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF3)。体外鉴定重组菌表达的GP3蛋白、重组菌特性并进行小鼠免疫试验。酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功,SDS-PAGE电泳及Western blot检测有GP3特异性蛋白条带,小鼠免疫后可检测到GP3蛋白抗体。成功构建能稳定表达PRRSV GP3蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株。  相似文献   

参与式项目设计在世界银行贷款广西综合林业发展与保护项目中的应用     

童德文  莫祝平  杨小兰 《林业调查规划》2010,35(3):112-115

通过对参与式项目设计方法在广西综合林业发展与保护项目中的运用分析,详细介绍了参与式项目设计方法在项目实施过程中的程序、步骤.认为参与式项目设计方法是一种自下而上的方法,它使林农的自主决策权力得到充分体现,并保证所获得信息的真实性,但其设计过程复杂、工作量大、成本高,需要政府的大力支持才能完成.  相似文献   

杨凌地区家兔球虫种类与感染情况调查   总被引：2，自引：0，他引：2  

祖尼萨  童德文  于三科 《西北农业学报》2010,19(8):12-15

采用饱和食盐水漂浮法,对杨凌地区的部分养兔场球虫种类和感染情况进行调查。结果表明,杨凌地区家兔艾美耳球虫(Eimeria)感染率高达83.5%,且各月龄段的兔均有不同程度的感染,其中1~2月龄的幼兔最易感染,感染率为99.4%,3~4月龄的感染率为97.0%,5~7月龄的感染率为78.7%,而12~24月龄的成年兔的感染率为38.9%。检出11种兔艾美耳球虫,其中穿孔艾美耳球虫(E.perforans)、黄艾美耳球虫(E.flsvescens)、无残艾美耳球虫(E.irrestidua)和斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)为优势种,分别占总检出率的24.0%、17.0%、14.0%和12.8%。  相似文献