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21.
22.
将豆类丝核菌菌株 7-1、7-3接种于改良 Czapek′s培养基 ,置 2 5~ 2 7℃培养箱培养 1 4d。收集菌丝体 ,自然干燥后乙醇索氏提取 ,回收乙醇至糖浆状 ,H2 O∶ CH2 Cl2 (3∶ 1 ,v/v)萃取 ,水层调 p H1 0后 ,再用 H2 O∶CH2 Cl2 (3∶ 1 ,v/v)萃取 ,水层调 p H7,浓缩后上 73 2型强酸性阳离子交换树脂 ,用 1 mol/LNH4 OH洗脱 ,收集氨洗液 ,调 p H7,浓缩后冻干 ,得到一种浅黄色粉末。取苦马豆素标准品 1 0 0 μg及浅黄色粉末提取物 1 0mg,分别用 1 ml吡啶溶解 ,取 0 .1 ml加 BSTFA0 .1 ml,5 0℃水浴 3 0 min。取反应液 1 μl,直接进样作 GC。结果表明 ,在相同的气相色谱条件下 ,在相同出峰时间 (1 .2~ 8min)内 ,标准品的峰形与总生物碱的峰形完全一致 ,可以判定生物碱中含有苦马豆素。根据计算得出菌株 7-1、7-3生物碱中苦马豆素含量为 5 .90 3 mg/g和 7.0 0 6mg/g。 相似文献
23.
通过PCR克隆出IBDV VP2基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-VP2。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-VP2)。进行重组菌VP2蛋白表达的鉴定;测定重组菌的稳定性、生长曲线、安全性以及小鼠免疫试验。结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE和Western blot证实重组菌表达的VP2蛋白能与鸡抗IBDV阳性血清特异性结合;重组菌株在体外营养选择压力下,可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾脏;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;口服重组菌免疫小鼠,ELISA检测产生了抗IBDV抗体;中和试验表明产生的抗体具有中和活性。本试验成功构建了能稳定表达IBDV VP2蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(pYA3341-VP2),为研究IBD口服基因工程疫苗奠定了基础。 相似文献
24.
旨在制备抗猪细小病毒(PPV)非结构蛋白共有氨基酸的NS多肽多克隆抗体。根据GenBank(MK993540)公布的PPV基因组序列,克隆其非结构蛋白NS1、NS2共有基因序列(NS基因),并进行生物信息学分析。进而将NS基因克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-NS,转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达,利用镍柱亲和层析技术纯化表达的重组多肽,用重组多肽免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,PPV杨凌株NS基因长258bp,编码86个氨基酸的多肽,是具有亲水性的非跨膜NS多肽,具有大量的B细胞线性表位。NS多肽在37℃、0.8mol/L IPTG条件下,诱导6h有大量的可溶性表达。免疫印迹试验结果显示,该多肽具有较好的抗原性。用纯化NS多肽免疫小鼠后获得鼠抗NS多肽的血清抗体效价为1∶12800。用制备的NS多克隆抗体检测纯化的NS重组多肽及真核表达的NS1蛋白,均能检测出相应特异性条带,为进一步研究NS蛋白在PPV致病过程中的作用奠定了基础。 相似文献
25.
对一只死亡的野生雌性大熊猫进行了系统的病理学检查。主要病变:右侧下颌有一洞创深达皮下结缔组织;咽部食道与颈椎间有一形态不规则的大脓肿,颈下结缔组织中散布多个小脓肿,脓液灰白糊状;颌下、肺门等处淋巴结肿大化脓;右后肢腓骨和右侧第9,10肋骨呈未愈合陈旧性骨折;肝门区有两个已钙化脓肿,肝细胞及间质局灶性变性坏死,少量炎细胞浸润;化脓性支气管肺炎,颈下皮下蜂窝织炎;多种组织器官内可见球菌样物质和微血栓。病理学诊断为脓毒败血性休克。 相似文献
26.
27.
为烟叶生产及分级人员提供高效、精确、方便和低成本的烤烟等级智能判别方法,采用开放环境下烟叶RGB图像识别方法,通过百分位区间估计,确定B2F和C3F等级烟叶外观质量的红色(Red)、绿色(Green)、蓝色(Blue)3个色彩通道及灰度图像叶色均值区间及叶型特征区间,并基于贝叶斯分类器,构建智能判别模型,通过系统固化后对烟叶样品进行等级识别判定。结果表明:红色(Red)、绿色(Green)、蓝色(Blue)通道及灰度图像的色阶均值25%分位点及75%分位点可作为B2F和C3F等级烟叶叶色判别区间的上限和下限;烟叶叶片长宽比及叶片有效面积占比不满足判别区间的条件,不选择叶型参数作为判别区间;构建的模型对B2F和C3F等级烟叶判别的准确率分别为92.86%和95.56%,总体准确率为94.21%,且不受干扰叶片的影响,判别精度较高。 相似文献
28.
甘肃棘豆化学成分研究Ⅱ.石油醚萃取部位成分分析 总被引:1,自引:0,他引:1
甘肃棘豆粉乙醇热回流,回收溶剂后,用1 mol/l HCl酸化,抽滤,滤渣用石油醚萃取,回收石油醚,得到石油醚萃取部位.取该部位硅胶层析柱,先用石油醚,石油醚:氯仿(v/v)50:1、30:1、20:1、15:1、10:1、8:1、5:1、2:1、1:4,氯仿洗脱,每20 m1收集一份.再用氯仿:乙酸乙酯(v/v)10:1、1:1,乙酸乙酯洗脱,每40 ml收集一份,共收集585份,TLC检测,合并相同部分.石油醚萃取部位作GC-MS,显示有93种化合物,确认了18种化合物的结构,其中酯13种,烷烃3种,羧酸2种. 相似文献
29.
对家兔进行了美丽马醉木叶毒素毒性试验。临床化验表明,红细胞数、白细胞数、血红蛋白含量、血清谷丙转氨酸酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、胆碱酯酶活性均有不同程度升高。 病理学检查发现,全身各组织器官出血、淤血、心脏扩张,肺严重淤血性水肿,心、肺、肝、肾实质细胞变性甚至坏死。 相似文献
30.
克隆猪细小病毒(PPV)VP2基因全长1 740bp,构建其原核表达载体后进行蛋白的表达与纯化,接种家兔制备多克隆抗体。用PCR方法扩增PPV VP2全长基因,扩增产物克隆至表达载体pET-32a并转化至E.coli BL21(DE3)感受态中。分别用不同诱导时间、IPTG浓度、温度诱导表达VP2重组蛋白,经SDS-PAGE电泳切胶回收纯化目的蛋白。对家兔进行3次免疫后,采集血清制备抗体。PCR扩增得到1 740bp的VP2基因片段;构建原核表达载体pET-32a-VP2,经37℃,IPTG浓度1.0mmol/L诱导表达4h可得分子质量大小约为82ku目的蛋白;间接ELISA检测抗体效价可达1∶12 800;Western blot证明所制备的抗体能够有效的应用于PPV VP2抗原的检测。本研究成功构建了表达PPV VP2基因的原核载体,获得了VP2蛋白,制备了兔抗多克隆抗体,为建立检测PPV VP2蛋白ELISA方法奠定了基础。 相似文献