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犬冠状病毒RT—PCR检测方法的建立和初步应用 总被引:9,自引:1,他引:9
根据Weseling发表的犬冠状病毒(CCV)K378株纤突蛋白(S)基因序列,设计合成了4条寡聚核苷酸引物P1(18bp,1520~1537bp)、P2(19bp,2072~2090bp)和P3(20bp,2621~2640bp)、P4(20bp,2944~2963bp)。以此为引物,以从美国引进的CCVNL-18参考株反转录产物为模板,在国内首先建立了CCVRT-PCR方法,并初步应用于国内CCV分离株的鉴定。结果表明,以P1、P2和P3、P4为引物,只能从CCVNL-18株反转录产物中扩增出大小分别为571bp和343bp核苷酸片段,与理论设计值大小一致,而正常CRFK细胞和狂犬病等5种对照病毒扩增结果为阴性。RT-PCR可检出1μL做105和103倍稀释的CCVNL-18株反转录产物,说明其具有很高的敏感性。初步应用试验结果,可从2株国内分离的CCV反转录产物中扩增出571bp和343bp核苷酸片段。通过本研究不仅建立了敏感、特异的CCVRT-PCR检测方法,也为其S基因的克隆和序列测定奠定了基础。 相似文献
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以大量提取的鹅副黏病毒(GPMV)HN基因真核表达载体pVAXⅠ-HN和空载体pVAXⅠ肌肉注射BALB/c小鼠。利用MTT法检测免疫小鼠的T细胞增殖活性,用ELISA方法检测小鼠血清中GPMV抗体,观察GPMV HN基因真核表达载体pVAXⅠ-HN在小鼠中的免疫效果。结果表明:试验组小鼠血清中GPMV特异性抗体水平显著高于对照组,ELISA试验结果OD492值分别为1.360 0±0.101 7和0.358 0±0.018 1;试验组与对照组的淋巴细胞增殖试验刺激指数(SI)差异不显著,其SI值分别为1.181 2±0.030 1和1.119 1±0.035 5。由此说明,GPMV HN基因真核表达载体可以诱导小鼠产生明显的体液免疫。 相似文献
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从吉林省不同地区鹅霍乱死亡鹅心血中分离出23株多杀巴氏杆菌.通过血清型的分析.采用强毒菌株C48-1(5:A)和分离强毒株JEH01(8:A)制备了蜂胶佐剂双价灭活菌苗.同时用弱毒株Vac制备了菌苗做为试验对照组.通过两种菌苗的攻毒试验.证明蜂胶佐剂双价灭活菌较弱毒苗免疫期长、保护率高、安全可靠. 相似文献
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核酸探针检测犬冠状病毒方法的建立和初步应用 总被引:2,自引:0,他引:2
以^32P标记犬冠状病毒特异性RT—PCR及产物制成核酸探针,与CCV NL-18株、犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒、狂犬病病毒反转录产物、正常CRFK细胞以及做10~10000倍稀释的CCV NL-18株反转录产物杂交,进行核酸探针的敏感性和特异性试验。结果表明,该探针仅与CCV HLl8株反转录产物呈阳性杂交,与对照病毒和正常细胞反转录产物均呈阴性反应。初步应用试验结果,该探针可与国内CCV分离病毒YSl、CI1株杂交,且可从8份腹泻犬粪便中检出5份CCV阳性病料。本研究为在我国开展犬冠状病毒感染的分子流行病学调查和临床诊断提供了一种敏感、特异的检测方法。 相似文献
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本研究通过鸭胚成纤维细胞(Duck Embryo Fibroblasts,DEF)cDNA文库的构建及酵母双杂交系统筛选,获得了能与鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)结构蛋白VP1互作的核糖体蛋白S12(RPS12)。RPS12是核糖体小亚基40S的组成部分,属于核糖体蛋白S17Ae家族,主要存在于真核生物中。本研究根据已报道的禽类及部分哺乳动物的RPS12基因相关信息设计引物,运用RT-PCR技术,从鸭胚成纤维细胞总RNA中成功扩增了RPS12基因的表达序列,对其进行克隆、测序及分析。结果表明,鸭胚成纤维细胞核糖体蛋白S12基因的开放阅读框(ORF)长399 bp,编码132个氨基酸,相对分子质量14.474 kDa,pI为7.121。进一步分析发现,鸭胚成纤维细胞RPS12基因与已报道的禽类及部分哺乳动物的基因序列及其编码的氨基酸序列都有很高的同源性。 相似文献
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1999年 1 1月 2 5日 ,长春某肉鸽养殖专业户饲养的白羽王肉鸽发生以咳嗽、结膜炎、排黄绿色稀便和死亡为主要特征的疾病 ,发病率 70 %,死亡率 7%。经临床症状、病理剖检和实验室检查 ,确诊为新城疫和霉形体混合感染。采用泰乐菌素和新城疫高免卵黄液治疗 ,收到良好效果。 相似文献