广西草龟GH基因全序列克隆及测序分析     

郭晓萍  杨秀荣  陈时锦  郭亚芬  兰干球  蒋钦杨  蒋和生 《南方农业学报》2012,43(2):245-248

[目的]了解广西草龟生长激素(GH)基因全序列结构特点及其与其他物种间的关系,为进一步研究GH基因的结构、功能、遗传变异规律及其与生产性能的关系提供科学依据.[方法]根据GenBank上已公布的黄喉拟水龟GH基因序列设计合成9对特异性引物,以广西草龟基因组DNA为模板进行PCR扩增,所获得目的片段经纯化、克隆、鉴定和测序后,用Vector NTI Advance 10软件将各扩增序列拼接,获得草龟生长激素基因全序列,并用DNASTAR软件MegAlign程序中的Alignment Report和NCBI的BLAST对草龟GH基因全序列进行同源性比对分析及构建基于GH基因编码序列的物种间亲缘进化树.[结果]广西草龟GH基因全长8538 bp,与黄喉拟水龟GH基因全长8517 bp相比,二者的同源性高达98%,其中有118个碱基发生突变,插入37个碱基,14个位点发生碱基缺失;与鸡、鸭、鹌鹑、鸵鸟、红树林蛇的同源性分别为88%、83%、87%、86%和84%.[结论]GH基因编码序列具有较高的保守性.  相似文献   

水牛生精上皮细胞的冷冻保存     

谢炳坤  覃兆鲜  韦英明  蒋和生 《中国兽医学报》2009,29(9)

为探讨水牛睾丸生精上皮细胞冷冻保存的适宜冷冻保护剂及其浓度,在DMEM中分别添加不同浓度的冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)、甘油(G)、丙二醇(PG)和乙二醇(EG),以及10%的胎牛血清(FBS),对3～5月龄水牛生精上皮细胞进行冷冻保存,解冻后台盼蓝染色测定细胞活率.结果显示,当以0%,5%.10%,15%,20%DMSO添加时,10%DMSO组的细胞解冻后活率均显著高于其他各组(P<0.05);当以0%,20%,25%,30%,35%,40%G添加时,35%G组的细胞解冻后活率均显著高于其他各组(P<0.05);当以0%,5%,10%,15%,20%,25%PG添加时,15%～25%PG各组的细胞解冻后活率均显著高于其他各组(P<0.05),但以20%PG组为最高;当以0%,5%,10%,15%,20%EG添加时,5%～20%EG各组的细胞解冻后活率均显著高于0%EG组,但以10%EG组为最高;而对4种冷冻保护剂各最优浓度组的细胞解冻后活率比较,10%DMSO、35%G组的细胞活率均显著高于20%PG、10%EG组(P<0.05).结果表明,以添加10%DMSO或35%G于含10%FBS的DMEM冷冻液中,采用两步慢速冷冻,液氯保存,37℃水浴1 min解冻,是一种具有较高复苏率的冷冻保存水牛生精上皮细胞的方法.  相似文献   

水牛精原细胞的体外培养及分化     

谢炳坤  覃兆鲜  王新平  谢体三  蒋和生 《中国兽医学报》2009,29(5)

以探讨水牛精原细胞体外培养的发育潜能为目的,对3～5月龄水牛睾丸组织进行精原细胞与支持细胞的体外共培养.两步酶法消化睾丸组织来制备水牛生殖细胞悬液,接种于含10%FBS的DMEM培养液中,在37℃、5%CO2、饱和湿度下培养30 d,观察细胞的生长和形态变化,并对培养4周的细胞进行RT-PCR分析,以检测PRM-2和TP-1基因的表达情况.结果显示,水牛精原细胞体外培养24 h后,精原细胞(10.0～12.5μm)呈圆形并紧贴支持细胞上;养7～8 d后.精原细胞出现聚集状态;养10 d后,有细胞克隆形成;养30 d后,出现似长形精子细胞(8.0～10.0μm).对培养4用后的细胞进行RT-PCR分析,精子细胞特异表达基因PRM-2被检测出来.结果表明,采用本试验体外培养条件对水牛精原细胞进行培养,能够满足精原细胞体外长期培养的需要,并可以发生增殖与分化而形成似精子细胞.  相似文献   

广西巴马小型猪SLA-DQB 基因 的克隆及序列分析     

霍秋红  杨秀荣  黄光成  黄化平  顾浩  兰干球  蒋和生  蒋钦杨  郭亚芬 《广东农业科学》2014,41(5):187-189

利用RT-PCR 的方法从广西巴马小型猪肝脏组织中扩增SLA-DQB 基因的编码区序列,旨在为下一步构 建SLA-DQB 转基因广西巴马小型猪奠定基础。结果表明,克隆的广西巴马小型猪SLA-DQB 基因编码区长687 bp,与 GenBank 参考序列（NM_001113694）相比,共有15 个氨基酸发生突变（位点为10、14、19、27、29、38、39、48、58、61、68、 72、76、78、183）。与普通猪、其他小型猪、奶牛、人类及小鼠的同源性分别为95.8%、95.8%、88.1%、86.2%和80.0%。  相似文献   

广西巴马小型猪氟烷基因PCR-RFLP分析     

严雪瑜  黄云  严小东  蒋钦杨  郭亚芬  蒋和生 《湖北农业科学》2012,51(18):4144-4146

采用PCR-RFLP分析了广西巴马小型猪的氟烷基因类型.结果显示,PCR扩增获得广西巴马小型猪氟烷基因片段长452 bp,其碱基序列与GenBank公布的普通猪同源性为99.6％;采用Hha Ⅰ酶切检测广西巴马小型猪、巴长二元杂猪和长白猪氟烷基因的PCR产物,均产生2条电泳条带,未表现多态性;测序表明广西巴马小型猪氟烷基因第1 843位碱基均为C.猪氟烷基因PCR-RFLP分析技术为优质猪的培育提供了理论依据.  相似文献   

壅菜水面浮床栽培技术     

沈学根  倪芳群  顾国明  蒋和金 《浙江农业科学》2011,(2):252-253

壅菜水上飘浮栽培选用泰国尖叶壅菜等抗性强的小叶品种,4月上旬育苗,培育根系发达的壮苗,大田用空心小竹制作固定浮床,水下施有机肥料以培肥水体,5月上旬定植,持水位50～60 cm,5月下旬到10月中旬采收茎蔓,生长期间保持行间操作道畅通,割蔓后须加强肥水管理,促进生长。  相似文献   

不同激素对高产荷斯坦奶牛超排效果的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

韦英明  韦精卫  蒋和生  蒋如明  孟凡丽  成俊萍 《广西农业生物科学》2005,24(3):191-195

比较不同激素对高产荷斯坦奶牛超数排卵效果的影响,结果发现:供试的3种促卵泡素(FSH)制剂中,加拿大生产的制剂(FOLLTROP IN-V)超排效果比中国科学院动物研究所、澳大利亚生产的FSH好,可用胚胎比率达94.2%,平均每头可用胚胎数达9.84±4.76枚;加拿大生产的FSH(FOLLTROP IN-V)进行荷斯坦奶牛超排处理效果好于美国S igm a公司生产的孕马血清(PM SG)(可用胚胎数,9.06±2.78枚/头vs 4.54±2.12枚/头);超排母牛授精后注射促排卵素3号(LHRH-A 3),Ⅰ级胚胎比率可达57.3%,明显高于促黄体素(LH)、绒膜促性腺激素(HCG)两组(Ⅰ级胚胎分别为17.4%和19.3%),表明LHRH-A 3可提高胚胎质量。  相似文献   

牛体外胚胎质量检测与评价     

蒋和生  卢克焕 《广西农业生物科学》1994,(1)

来源于体外成熟和体外受精的牛早期胚胎与不同细胞的单层细胞共同培养，以检测不同阶段胚胎的细胞数。本研究共检测了３１５３枚桑椹胚和囊胚。通过体外培养４～１０ｄ，不同阶段的胚胎，早期桑椹胚、紧凑型桑椹胚、早期囊胚、囊胚、待扩展囊胚、扩展囊胚、待孵化囊胚和孵化囊胚，经检测其细胞数分别为：４５，６９，７０，８８，１０３，１２７，１３９和１５１。第９ｄ的囊胚细胞数比第７ｄ或第８ｄ的囊胚细胞数无显著差异，然而，不同等级的囊胚的细胞数差异显著（Ｐ＜０．０５）；同时，细胞数少的胚胎发育也慢。通过囊胚免疫法检测，第７ｄ、第８ｄ和第９ｄ回收的扩展囊胚的细胞数分别为６６，６０和５２。此外，虽然在子宫内膜细胞或输卵管细胞－子宫内膜细胞的单层细胞上的囊胚发育慢，且发育率低，但其细胞数与在其它单层细胞上发育的囊胚相比无显著差异。试验结果表明，通过体外化培养出来的囊胚细胞数也能达到体内囊胚的水平。  相似文献   

水牛发情期唾液生殖激素和结晶与卵泡发育的关系     

贾银海  黄明光  徐文文  李芳芳  文信旺  李铭  杨秀荣  吴柱月  蒋和生 《中国畜牧兽医》2021,48(2):592-598

本研究旨在探明水牛唾液生殖激素、唾液结晶和卵泡发育变化的规律。应用ELISA试剂盒测定水牛唾液和血清中的生殖激素,制作唾液结晶,并分析生殖激素和唾液结晶与卵泡变化的关系。运用唾液结晶法、直肠检查法、唾液结晶+B超法、直肠检查+B超法4种方法在生产中进行验证。结果表明,水牛发情当天唾液雌激素（E₂）的水平为233.51 pg/mL,达到一个峰值,随后开始缓慢降低。水牛唾液中孕激素（P₄）水平在发情前2 d达到16.17 ng/mL,发情当天降到8.91 ng/mL。促卵泡素（FSH）在水牛发情前2 d逐渐下降,从37.91 ng/mL降到34.64 ng/mL,但在发情2 d后逐渐升高,达到61.20 ng/mL。促黄体素（LH）在发情前1 d逐渐下降,从5.15 ng/mL降至发情当天4.12 ng/mL,但在发情1 d后升至5.77 ng/mL。B超监测卵巢卵泡从发情前2 d迅速生长,到发情当天达到20 mm大小,直到破裂排卵卵泡的大小变化不显著。排卵后形成黄体,黄体期一直维持到下次发情前4 d左右,期间在发情后14~17 d的黄体最大,与水牛唾液中LH分泌峰一致。唾液结晶+B超鉴定方法判定的发情率最高（86.67%）,与其他几种方法比较差异显著（P<0.05）;妊娠诊断结果也表明,唾液结晶+B超鉴定方法判定的妊娠率（61.53%）显著高于直肠检查法、唾液结晶法和直肠检查+B超法3种方法鉴定的结果（P<0.05）。综上所述,卵巢上卵泡的发育与唾液中生殖激素的浓度显著相关,发情当天唾液结晶呈现典型的树枝状,唾液结晶+B超法的发情鉴定准确率最高。  相似文献   

脱水蔬菜生产技术     

蒋和体 《畜牧市场》1993,5(4):300-301

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