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31.
以pcDNA3．1-pIL-18为模板，采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18（IL-18）的成熟蛋白基因，通过KpnⅠ＋SacⅠ双酶切及连接反应，构建了pET32c—pIL—18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实，重组质粒中的基因片段连接正确。之后，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），于37℃、1．0mmol／L IPTG条件下诱导表达。菌体裂解产物经SDS—PAGE分析，在分子质量约为33ku处出现了预期的目的蛋白。用8mol／L脲对表达产物变性，经Ni^2＋NTA柱纯化，透析复性，得到了纯化的IL-18蛋白。Western—blot分析证实，纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性。上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础。 相似文献
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33.
猪白细胞介素-18基因表达及重组蛋白的纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18。将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。SDS-PAGE及W estern-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33 ku,与预期大小相符。将包涵体提取物用8 mol/L脲变性,经N i-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白。 相似文献
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35.
随着我国税费改革的实行,乡镇政府作为我国的基层政权组织,也陷入了困境.比如,与乡村社会关系的生疏、财政严重不足、债务负担加剧等,很大程度上对广大乡村社会的稳定发展产生了消极的影响.为此,无论作为乡镇政府自身还是国家都要帮助其寻找一条合理的出路,以免成为新农村建设的绊脚石. 相似文献
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38.
1病因 饲养密度过大,鸡舍寒冷潮湿、通风不良,缺乏维生素A以及管理不当是造成本病的诱因. 2症状 病鸡采食明显减少,颜面肿胀,鼻腔有浆液、粘液性分泌物,成年生长迟缓,蛋鸡产蛋量明显下降. 相似文献
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40.
<正> 山西省平遥县沿村堡乡钦贤村任国茂,去年春天,买了一头黑白花奶牛,买下一年半,配种十多次,屡配不孕,经检查患有先天性子宫颈畸形疾病,实难怀孕,既不产犊,又不产奶。九月份,用诱乳激素进行人工诱导泌乳,使该奶牛产奶。办法是:每天上下午间隔12小时分两次给这头牛共注射7支诱乳激素,连续注射七天,注射诱乳激素以后一周开始注射利血平,每五天注射一次,注射五 相似文献