山羊源贝氏柯克斯体抗体间接ELISA检测方法的建立与应用     

张锐铮  于皓同  王凯茸  张琪  许信刚 《动物医学进展》2024,(4):21-26

为建立山羊源贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)抗体间接ELISA检测方法,对贝氏柯克斯体的com1基因进行克隆及原核表达,以com1纯化蛋白作为抗原,建立间接ELISA检测方法,并对临床收集的血清样本进行检测。结果显示,重组蛋白大小为27 ku,经Western blot鉴定com1蛋白反应原性良好;ELISA检测方法抗原包被量为4μg/mL,血清的稀释倍数为1∶100,酶标二抗稀释倍数为1∶2 500,阴阳临界值为0.278。用该方法对流产衣原体、山羊支原体、牛支原体阳性血清进行检测,均为阴性;当C.burnetii阳性血清稀释至2 048倍时检测结果仍为阳性;批内、批间变异系数均小于10%。用该方法对陕西省部分羊场收集到的307份血清样本进行检测,样本阳性率为9.12%。成功建立了一种检测贝氏柯克斯体抗体的间接ELISA检测方法,这为C.burnetii引起的Q热的实验室诊断和流行病学调查提供了技术支持。  相似文献   

杆状病毒表面展示系统及其应用研究进展     

许信刚  童德文 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2009,37(8):36-42

杆状病毒表面展示系统是近年来发展起来的一种新的真核生物表面展示系统。通过与杆状病毒囊膜蛋白gp64融合表达或与特异性的锚定部位结合,可以将外源肽或蛋白质展示在杆状病毒表面,形成所谓的杆状病毒"假病毒",从而筛选出目的蛋白或活性肽。杆状病毒表面展示系统可用来展示需要磷酸化、糖基化、甲基化、乙酰化、羟基化、二硫键异构化等翻译后修饰,才能表现功能活性的复杂真核蛋白,以及用于构建多肽文库和抗体库、新型疫苗研制、基因治疗等方面。文章对杆状病毒表面展示系统的原理、特点和应用方面进行了综述,并对其发展前景进行了展望。  相似文献   

山羊海藻百伯史坦菌分离鉴定与药敏试验     

李梦磊  刘广阔  蒲鹏  张琪  高睿  许信刚 《动物医学进展》2022,43(2):139-141

为了对陕西省某羊场羊群发生呼吸道疾病进行确诊,取病死羊肺脏进行细菌培养、分离、纯化、生化试验、16S rRNA测序、动物致病性试验以及药敏试验.结果表明,分离株的培养特性与生化试验结果与山羊海藻百伯史坦菌符合;16S rRNA比对结果显示分离细菌与山羊海藻百伯史坦菌同源性为98％;致病性试验表明山羊海藻百伯史坦菌对小鼠...  相似文献   

小反刍兽疫病毒环介导等温扩增检测方法的建立     

徐滢  郝玉青  付明哲  张琪  李勤凡  许信刚 《动物医学进展》2019,(3)

为了建立适用于基层养殖场快速、可视化的小反刍兽疫病毒(PPRV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法,根据GenBank公布的PPRV F基因保守区核苷酸序列为靶序列,设计一组特异性LAMP引物,优化反应条件(时间、温度)和反应体系(dNTP、Mg2+、甜菜碱浓度),并进行特异性和灵敏性试验,最后用建立的方法对临床样品RNA进行检测。结果表明,所建立的方法在65℃时反应45min即可获得清晰的梯状条带;扩增物经10×SYBR GreenⅠ荧光染料染色,紫外线照射之后即可直接判定结果;灵敏性试验表明,该方法能够检出的PPRV核酸的最低浓度为8.63ng/mL,与常规RT-PCR方法相比,灵敏度增高100倍;该方法特异性良好,与山羊痘病毒(GTPV)、羊支原体(Mccp)、羊口疮病毒(ORFV)均无交叉反应;对16份临床样品RNA检测结果显示,该方法与传统RT-PCR检测结果一致。建立的LAMP检测方法的特异性、灵敏度均好,可用于临床小反刍兽疫病毒的检测。  相似文献   

奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验     

王理想  尹峥  沈聪  张琪  徐滢  黄加利  张淑霞  许信刚  丛日华 《动物医学进展》2019,40(10)

  相似文献   

火鸡传染性法氏囊病病毒YL株VP2基因的克隆和序列比较     

李佩伦  许信刚  甘甲忠  陈清  卢景  冯超  黄宇  黎军 《中国农学通报》2005,21(4):35-35

参考GenBank发表的传染性法氏囊病毒(IBDV)基因组序列,设计并合成了一对特异扩增IB-DVVP2基因的引物。以广西玉林发病火鸡群分离的IBDV野毒YL株为材料,以其基因组为模板利用RT-PCR技术扩增出了1.5kb的cDNA产物,将VP2基因克隆于PUC119质粒上,得到重组PUC119质粒。并对VP2基因全序列测定、分析和聚类表明,YL株与欧洲超强毒株非常相似,而与经典强毒株、弱毒株和变异株相差较大。  相似文献   

逆转录病毒载体介导的猪瘟病毒E2基因在真核细胞中表达及动物免疫试验初报   总被引：3，自引：0，他引：3  

许信刚  胡建和  张彦明 《中国农学通报》2005,21(5):20-23

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒表达载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法将其转入293GP细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染SP2/0细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞技术(FACS)分析,结果表明CSFVE2基因在SP2/0细胞膜上成功表达。将表达E2蛋白的SP2/0细胞腹腔免疫BALB/c小鼠,用流式细胞仪检测证明,成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体。为下一步利用细胞免疫小鼠研制抗猪瘟病毒单克隆抗体打下基础。  相似文献   

山羊痘病毒LAMP检测方法的建立     

徐滢  张琪  付明哲  许信刚 《动物医学进展》2020,(3):12-16

为了建立适用于基层养殖场快速、可视化的山羊痘病毒(GTPV)环介导等温扩增技术(LAMP)检测方法,根据GenBank公布的GTPV ORF103保守区核苷酸序列为靶序列,设计并合成一组特异性LAMP引物,优化反应条件(时间、温度)和反应体系(dNTP、内外引物浓度比),并进行特异性和灵敏度试验。结果表明,所建立的LAMP方法在65℃时反应50 min即可获得清晰的梯状条带;扩增物经10×SYBR GreenⅠ荧光染料染色,紫外线照射或日光下即可直接判定结果;灵敏度试验结果表明,该方法能够检出的GTPV核酸最低浓度为1.287 ng/mL,与常规PCR方法相比,灵敏度增高100倍;该方法特异性良好,与小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊支原体(Mccp)、羊口疮病毒(ORFV)均无交叉反应;对10份临床样品检测结果显示,该方法与传统PCR检测结果一致。建立的LAMP检测方法可用于临床山羊痘病毒的检测。  相似文献   

产气荚膜梭菌菌落多重PCR方法的建立及初步应用     

董洁  杨晓静  苗承霞  沈晶  杨柳  姜艳芬  许信刚 《兽医大学学报》2013,(12):1842-1847

根据GenBank中已发布的产气荚膜梭菌α、β、ε、τ毒素基因序列,分别设计并合成针对4种毒素基因的特异引物,通过优化多重PCR反应条件,建立1种简单的产气荚膜梭菌定型菌落多重PCR方法。结果显示：A、B、C、D、E5型产气荚膜梭菌参考菌株均扩增出了相应的预期目的条带,而大肠杆菌、巴氏杆菌和芽孢杆菌则均未能扩增出相应条带;将单个菌落稀释100倍,仍能扩增出相应的目的片段,该方法对B型和E型参考菌株最低检测量分别为2．6×10^4cfu／mL、1．2×10^4cfu／mL。应用该多重PCR方法从106份样品中检测到30株产气荚膜梭菌且均为A型,其中病死鸡的盲肠内容物分离率为36．5％（19／52）,健康鸡群新鲜粪便样品分离率为20．4％（11／54）。本研究建立的多重PCR方法特异性强,敏感度高,重复性好,可以有效进行产气荚膜梭菌的快速检测及5种血清型的鉴别,对产气荚膜梭菌的感染及食品安全问题的研究均具有重要意义。  相似文献   

仔猪水肿病病原菌的分离鉴定   总被引：5，自引：0，他引：5  

许信刚  张琪等 《动物科学与动物医学》2002,19(11):15-17

从某猪场发生水肿病仔猪的脾脏中分离到一种细菌，通过菌体形态，菌落形态，染色特性，培养特性，生化试验等一系列的系统鉴定，确定为引起仔猪水肿病的大肠埃希氏菌，动物致病性试验表明该菌对小白鼠有较强的致病性，引起小白鼠死亡，毒素试验证明该菌产生致水肿病2型类志贺毒素（SLT－2e)，引起小白鼠发生水肿症状，该毒素对Vero细胞敏感，引起其死亡，药敏试验证明该菌对常见的抗生素不敏感。  相似文献