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51.
为建立在临床样本能够同时检测猪种、牛种、羊种、绵羊种布鲁菌的多重PCR方法,根据NCBI已收录的布鲁菌全基因,设计并合成4对特异性引物,通过优化多重PCR的反应条件,建立能够同时检测4种布鲁菌的多重PCR诊断方法。特异性试验结果表明,可以从4种布鲁菌以及4种细菌混合物中扩增出大小分别为276、494、733和976bp的特异性条带,对照组的检测结果为阴性;敏感性试验结果表明,对4种病原菌基因组DNA的检出量为猪种32.2pg、牛种21.3pg、羊种27.5pg、绵羊种43.2pg;人工模拟感染样本检测结果表明,能从混合感染的病料中特异地检测出4种病原菌。应用该方法对200份临床奶山羊乳样进行检测,结果检出4份阳性。建立的多重PCR方法具有特异性强、敏感度高、稳定性好的特点,可以有效地检测4种布鲁菌的感染。 相似文献
52.
PCV-2陕西株ORF2基因的克隆、分析及原核表达 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】克隆猪圆环病毒2型陕西分离株(PCV-2SX株)ORF2基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的PCV-2ORF2基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV-2SX株ORF2全长基因,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。然后,将ORF2基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。【结果】扩增到了702bp的PCV-2ORF2全长基因。序列分析结果表明,PCV-2SX株ORF2基因与广西分离株(EF675237,ChinaGX)和巴西分离株(DQ861802,am21)的核苷酸序列同源性均达98.0%,氨基酸序列同源性均达98.3%,与其他毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在89.9%～97.9%和88.5%～98.0%。SDS-PAGE可检测到分子质量约为48ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。Western-blotting分析表明,重组蛋白可被PCV-2阳性血清所识别。【结论】成功克隆了PCV-2SX株ORF2基因,并进行了原核表达。 相似文献
53.
克隆、序列分析及原核表达鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因。根据GenBank已登录的IB-DV VP2基因序列,设计合成一对VP2基因特异性引物,应用RT-PCR技术从陕西省某鸡场分离的IBDV毒株中克隆VP2基因并进行序列分析。再将VP2基因亚克隆于原核表达载体pET-32a中,构建重组质粒pET-32a-VP2,经鉴定正确后转化大肠杆菌BL21菌株进行诱导表达,并进行SDS-PAGE检测。成功克隆IBDVYL毒株VP2全基因序列,核苷酸和氨基酸序列分析表明,YL株为IBDV超强毒株。经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析,在宿主菌BL21中成功表达约为53 ku的VP2蛋白。IBDV VP2基因克隆表达成功,为IBDV的分子生物学特性研究提供资料,其表达产物为进一步制备抗IBDV单克隆抗体奠定了基础。 相似文献
54.
"自杀性"DNA疫苗研究进展 总被引：2，自引：0，他引：2
核酸疫苗又称基因疫苗、DNA疫苗 ,是从基因治疗研究领域发展起来的一种全新的免疫防制剂。核酸疫苗具有许多优点 ,但是同时也有其不可避免的缺陷 ,这就使人们不得不把注意力集中在对传统的核酸疫苗进行改造以保持其优点 ,避免其缺陷上。“自杀性”DNA疫苗(suicidalDNAvaccine)就是基于常规DNA疫苗和“自主复制型”RNA疫苗 (self replicatingRNAvaccine)基础上发展起来的一种新型疫苗 ,不仅具有常规DNA疫苗易制备、运输、保存等方面的优点 ,而且还有“自主复制型”RNA疫苗的安全性与有效性 ,这使得其成为目前核酸疫苗研究的热点。文章就“自杀性”DNA疫苗的载体、构建、作用机理、优点以及研究现状作了综述 相似文献
55.
56.
病原微生物检验新技术研究进展 总被引：5，自引：1，他引：4
传统的微生物检验法的最大弱点是慢,难以适应诊断与治疗。传统的细菌分离、培养及生化反应,已远远不能满足对各种病原微生物的诊断以及流行病学的研究。随着现代科学技术的不断发展,特别是免疫学、生物化学、分子生物学及计算机技术的不断发展,新的微生物诊断技术和方法己广泛被应用。近年来国内外学者不断努力,已创建不少快速、简便、特异、敏感、低耗且适用的微生物诊断方法,尤其是DNA探针和以PCR为代表的分子生物学技术的发展及自动化仪器的应用已明显加快了微生物检验的速度,明显提高了微生物的诊断水平。本文就微生物诊断新技术研究进展作一综述。 相似文献
57.
58.
根据新城疫病毒（NDV）对鸡红细胞的凝集以及相应抗体对病毒血凝的抑制的原理设计出新城疫抗体监测试剂盒，主要用于鸡新城疫抗体水平的监测，为正确实施新城疫疫苗适时接种提供依据。试剂盒包括新城疫阳性血清、新城疫阴性血清、4单位新城疫抗原和10ml/L醛化红细胞。经对50多份血清检测结果表明，用于血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验的醛化红细胞与新鲜红细胞无显著性差异（P＞0.05），试剂盒能准确检测出鸡群新城疫抗体水平，具有操作简便，适用，易于保存等特点。 相似文献
59.
IBDV超强毒HZ株VP2基因的克隆和真核表达质粒的构建 总被引：3，自引：0，他引：3
利用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），扩增克隆传染性法低囊病病毒超强毒（ｖｖＩＢＤＶ）ＨＺ株ＶＰ２基因，并ＶＰ２基因进行全序列测定、序列分析和聚类分析，同时将ＶＰ２基因与真核表达载体ｐｃＮＤＡ３相连接。结果克隆到ＶＰ２基因全序列长１３５６ｂｐ，分析表明ＨＺ株与欧洲超强毒株ＵＫ６６１高度相似，同时将ＶＰ２基因正向插入ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游，得到了ＶＰ２基因的真核表达质粒。为ＩＢＤＶ分子流行病学和基因工程疫苗的研究奠定了物质基础。 相似文献
60.