表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建及动物免疫试验     

许信刚  赵红妮  童德文 《畜牧兽医学报》2011,42(7)

本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株.PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-ORF5.将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF5).鉴定重组菌GP5蛋白的表达;测定重组菌定居特性及安全性;检测免疫小鼠血清抗体;流式细胞仪检测重组菌对小鼠T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的影响;最后进行免疫猪血清抗体检测.结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;Western blot证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合;重组菌在体内可较稳定地定居于小鼠的肠系膜淋巴结和脾脏中,并在其中表达出GP5蛋白;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;重组菌口服免疫小鼠可以产生抗GP5蛋白抗体且抗体具有中和活性;重组菌株能不同程度地使CD4+、CD4+/CD8+升高,而使CD8+下降,表明重组菌对细胞免疫功能具有调节作用;淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱发小鼠产生较强的细胞免疫应答;重组菌口服免疫猪可以产生抗GP5蛋白抗体.本试验成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定基础.  相似文献   

丙型肝炎病毒囊膜蛋白基因疫苗的构建及其诱导小鼠体液免疫应答     

许信刚  胡建和  张彦明 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2005,33(4):1-4

将丙型肝炎病毒（HCV）H77株全长囊膜蛋白基因克隆到真核表达载体pcDNA4.0的CMV启动子下游，采用磷酸钙转染法将重组质粒转入293T细胞，用流式细胞仪检测细胞瞬时表达的目的蛋白。将构建的重组质粒肌注BALB/c小鼠，用表达HCV囊膜蛋白的SP2/0细胞作为抗原，用流式细胞仪检测小鼠血清HCV囊膜蛋白抗体。再用原核系统表达的E2蛋白作为抗原,Western Blot检测免疫小鼠血清抗体。试验结果显示,囊膜蛋白E1E2在293T细胞膜上进行了瞬时表达，基因疫苗免疫小鼠后产生了抗HCV囊膜蛋白的抗体，该抗体能与表达HCV囊膜蛋白的SP2/0细胞特异性结合，Western Blot表明该抗体也能与原核系统表达的E2蛋白结合。  相似文献   

猪瘟病毒DNA疫苗的构建及动物免疫试验     

许信刚  胡建和  张彦明 《勤云标准版测试》2005,(3)

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)C株E2囊膜蛋白全长基因克隆到真核表达载体pcDNA4.0的CMV启动子下游,采用磷酸钙转染法将重组质粒转入293T细胞,流式细胞仪(FACS)检测293T细胞瞬时表达了E2囊膜蛋白。将构建的重组质粒肌肉注射BALB/c小鼠,用流式细胞仪和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测证明成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体,为下一步利用DNA疫苗免疫小鼠研制抗猪瘟病毒单克隆抗体打下基础。  相似文献   

鸵鸟大肠埃希氏菌的分离鉴定     

许信刚  张琪  邢福珊  张耀相  黄超 《黑龙江畜牧兽医》2002,(11):26-27

从某鸵鸟养殖场发病的幼鸵鸟肝脏和脾脏分离到一种细菌，通过培养特性，菌体形态，菌落形态，染色特性，生化试验等一系列的系统鉴定，确定为大肠埃希氏菌，动物致病性试验表明该菌对小白鼠和雏鸡有较强的致病性，药敏试验证明该菌对常见的抗生素不敏感，经血清型鉴定该菌血清型为O1。  相似文献   

绵羊流产衣原体、立克次体与大肠埃希氏菌混合感染的实验室诊断     

徐海玲  李梦磊  高睿  许信刚  张琪 《动物医学进展》2022,43(6):131-135

  相似文献   

犊牛腹泻病原的分离鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

穆杨  柯霓霞  许信刚  董小静  张耀相 《黑龙江畜牧兽医》2007,(5):79-80

犊牛腹泻是由多种致病微生物引起的一种临床常见病,致命的腹泻多发生在犊牛出生后的2个星期内,该病的发生常常给养牛业带来极大的损失。2005年3月份,陕西省某牛场发生犊牛腹泻,笔者对送检的病料进行实验室诊断,现将结果报道如下。1材料与方法1.1材料被检材料,某牛场死亡牛的肝脏、脾脏、心脏、肠系膜淋巴结等;绵羊鲜血琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、普通琼脂培养基,自制;生化试验培养基和微量糖发酵管,购自杭州天和微生物试剂有限公司;药物纸片(批号为20050303),购自上海伊华医学科技有限公司;小白鼠(18~22 g/只),由西北农林科技大学实验动…  相似文献   

畜禽疾病计算机诊断专家系统的研究进展   总被引：4，自引：0，他引：4  

许信刚 《中国动物保健》2004,(11):49-50

本文较系统的对计算机诊断专家系统的发展概况、基本结构、诊断原理、试验测试、专家系统优点及不足、在临床中的应用及未来展望等方面的研究进展作一综述。  相似文献   

IBDV诱导细胞凋亡的研究进展   总被引：4，自引：0，他引：4  

许信刚 《动物医学进展》1999,20(4):5-7

凋双称程序化死亡，细胞在形态学和生化特征的改变是其发生凋亡的有力证明。ＩＢＤＶ诱导细胞凋亡，细胞形态学表现为细胞浆膜失去联系，核膜对称性消失，染色质浓缩成为核体，并凝集成团，集于核膜旁，细胞拉长变形，最后细胞裂解成由膜包围着的小团，培养细胞贴壁能力减弱。  相似文献   

陕西省部分地区猪圆环病毒2型全基因组的遗传变异分析     

徐丽美  付明哲  何亚鹏  许信刚  于三科  张琪 《动物医学进展》2017,38(3)

为了解陕西省猪圆环病毒2型(PCV2)的遗传变异情况,根据GenBank登录的PCV2全基因组序列,设计1对引物,从陕西省部分地区规模化猪场疑似PCV2感染的病猪采集病料9份,应用PCR扩增PCV2的全基因,其中6份为阳性,并对扩增的6个PCV2全基因组序列进行测序和序列分析。基因测序表明,PCV2基因组全长为1 767bp;对6株病毒序列进行同源性比较,6个毒株全基因之间核苷酸同源性为98.3%~100%,与GenBank上已发表的国内外毒株全基因组比较,同源性为96.3%~97.8%;与近几年陕西株比较发现基因变异程度不稳定,与2013年分离株(KX352154.1)同源性最高,2015年分离株(KX352159.1)次之,反而与2014年分离株(KX068219.1)最低;对6个毒株的ORF1和ORF2基因进行同源性比较,6个毒株的ORF1和ORF2基因的核苷酸同源性分别为98.1%~100%和98.2%~100%,与GenBank上已发表的国内外参考株ORF1和ORF2基因进行同源性比较,同源性分别为97.6%~99.8%和91.5~96.0%。陕西省流行的PCV2基因组较为保守,变异不大,同源性很高。  相似文献   

猪瘟病毒Shimen株E2基因的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建     

刘建玲  苏正元  许信刚  李谱华  张彦明 《中国兽医学报》2006,26(3):238-239,242

根据已发表的猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）Shimen株的全基因组序列，设计2对引物P1／P2和B1／B2，在B1和B2的5’端分别加上EcoR 1和BamH 1位点，以CSFV—Shimen株脾毒为材料。一步法提取总RNA。并以此为模板采用反转录PCR（RT—PCR）和套式PCR（nPCR）。成功地扩增出约1．2kb的E2基因。将PCR产物回收后与pMD18-T载体连接并转化。经PCR和酶切鉴定获得重组质粒E2-T。将E2-T经EeoR 1和BamH 1酶切消化、回收目的基因后。与经BamH 1／EcoR 1酶切的逆转录病毒载体pBABE—puro连接并转化，经酶切鉴定获得重组质粒pBABE—puro—E2。序列测定表明，目的基因的插入位置、方向和读码框完全正确。  相似文献