抗恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及竞争ELISA试剂盒的研制   总被引：1，自引：1，他引：0  

赵银丽  王建华  王自良  滕蔓  刘庆堂  邓瑞广  范国英  张改平 《核农学报》2008,22(6):898-903

利用合成的完全抗原(BSA-ENR)免疫小鼠,通过细胞融合技术和间接竞争ELISA筛选出了能分泌恩诺沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以此为基础研制恩诺沙星残留检测的竞争ELISA试剂盒(competitive ELISA ENR-Kit),并测定其性能。结果表明:筛选出的2株杂交瘤细胞,单抗亚类均为IgG1型,其中4G1-B3株的ENR mAb间接ELISA效价为1:1.024×106,亲和常数(Ka)为9×1010L/mol;竞争ELISA试剂盒的线性检测范围为0.05~101.6μg/L、灵敏度0.05μg/L、半数抑制浓度(IC50)1.1μg/L,与其他化合物的交叉反应率(CR%)均小于0.01%,鸡肉样、鸡肝样、鱼肉样和牛奶样的平均添加回收率分别为81.5%8、7.6%、84.3%和95%,不同基质添加恩诺沙星标准品做竞争ELISA对ENR-Kit检测结果影响小,试剂盒保存期6个月以上。结果说明该竞争ELISA试剂盒具有快速、敏感、特异、简便等特点,适用于ENR残留的快速检测。  相似文献   

大豆胰蛋白酶抑制因子的危害及其检测研究进展     

王耀  吴佳蓓  王珍玉  李燕虹  邓瑞广  胡骁飞 《饲料工业》2019,(13):61-64

大豆胰蛋白酶抑制因子是大豆中一类主要的抗营养因子,其主要危害表现在致使胰腺增生、肿大以及抑制动物生长等方面。近年来,针对大豆胰蛋白酶抑制因子的检测方法已成为研究热点。文章通过对大豆胰蛋白酶抑制因子的危害和现有的检测方法进行综述,旨在为大豆及其制品中胰蛋白酶抑制因子的监控以及建立大豆胰蛋白酶抑制因子快速、高效的检测方法提供参考。  相似文献   

H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立     

石建州  李青梅  王彦红  刘肖  李鸽  郭军庆  邓瑞广  张改平 《中国畜牧兽医》2019,46(9):2691-2698

本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验（immunoperoxidase monolayer assay,IPMA）筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒10^2.63 TCID₅₀/100 μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰ H₂O₂的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50 μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪瘟病毒（CSFV）阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1：3 200的HI=2^-9标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。  相似文献   

沙拉沙星单克隆抗体制备及鉴定     

刘儒彪  胡骁飞  张改平  王慧  王方雨  刘璐  刘玺  邓瑞广  宋照军 《华北农学报》2016,(2):87-91

为制备敏感性好、亲和力高、特异性强的抗沙拉沙星(Sarafloxacin,SARA)单克隆抗体,采用碳二亚胺法合成SARA人工抗原,通过免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高且敏感性好的小鼠,采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合,筛选分泌抗SARA单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备SARA mAb,通过间接ELISA和间接竞争ELISA对SARA mAb的免疫学特性进行鉴定。结果表明:小鼠经免疫原免疫后,小鼠多抗血清效价均达到1∶128 000。选择敏感性较好的2号小鼠进行细胞融合,经多次亚克隆后,筛选出1G3、3H3两株杂交瘤细胞株,其中1G3所产SARA mAb效价较高,为1∶512 000,IC_(50)为6.34 ng/mL,亲和常数为8.55×10~8L/mol,与诺氟沙星的交叉反应率为1.06%,与其他药物交叉反应率均低于0.50%。  相似文献   

二氟沙星残留检测直接竞争ELISA试剂盒的研制及其性能测定   总被引：1，自引：0，他引：1  

李彬彬  邓瑞广  侯玉泽  张改平  赵东  刘庆堂  柴书军  王自良 《农业生物技术学报》2009,17(3):403-408

应用抗二氟沙星单克隆抗体（DIFmAb）杂交瘤细胞株建立直接竞争ELISA分析方法,研制出DIF残留快速检测试剂盒（DIF-Kit）并对其性能进行了测定。特异性试验结果表明与达氟沙星的交叉反应率为0.32％,与其它氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应,该方法对DIF的检测限可达到0.1µg/L,半数抑制浓度IC50为2.2µg/L,线性范围0.1～128µg/L, 平均批内和批间变异系数小于<15%。对牛奶、鸡肉分别添加0.4、2.0、10.0、50.0µg/LDIF标准品,平均回收率分别为89.3%和83.9%。DIF-Kit性能稳定,在4℃可保存6个月。DIF-Kit准确度高、重复性好、特异性强,适用于DIF残留快速检测的推广应用。  相似文献   

磺胺喹口恶啉的危害及残留检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

屈艳南  侯玉泽  邓瑞广  宋春美 《上海畜牧兽医通讯》2009,(4):46-47

磺胺喹噁啉（sulfaquinoxaline,sQ）作为一种常见的抗球虫药,常与氨丙啉等混合使用,对禽类疾病有很好的疗效,但它有一定毒性,由于养殖场在饲养动物过程中向饲料或动物饮用水中添加SQ,而又未完全遵守国家兽药典规定的投药量、投药期和休药期的规定,导致其在动物源食品中大量残留。人食用这些动物源食品后,可能造成SQ在人体内富集,从而使人发生变态、过敏等反应,严重的还会产生致畸、致癌作用。为此,世界各国均制定了相对严格的兽药残留标准,目前,我国制定的磺胺类药物在动物源性食品中的总残留标准是300μg／L,欧盟、日本、美国等西方发达国家制定的残留标准是100ng／g。  相似文献   

三聚氰胺的毒害作用及其残留检测     

职爱民  邓瑞广  刘庆堂  张改平 《中国饲料》2009,(2)

三聚氰胺是塑料工业中一种重要的有机化工中间产品,本文就三聚氰胺的理化特性、代谢机理、毒害作用以及残留检测方法等进行简要阐述.  相似文献   

三棵针提取物在畜禽生产中的应用     

胡骁飞  邓瑞广  张改平  魏凤仙 《中国饲料》2009,(12)

本文对三棵针提取物改善畜禽生长性能、提高机体免疫力、提高抗氧化能力、改善脂类代谢等作用进行综述.  相似文献   

兽药残留的免疫学快速检测技术概述   总被引：2，自引：1，他引：1  

张改平  职爱民  邓瑞广  杨艳艳  邢光旭  杨继飞  刘庆堂 《河南农业科学》2009,(9)

简要阐释了免疫学快速检测技术在兽药残留检测中的应用,并对此领域中的研究进展进行了简单介绍。  相似文献   

动物疫病免疫试纸快速检测技术概述   总被引：4，自引：2，他引：2  

张改平  郭军庆  李青梅  邓瑞广  杨艳艳 《河南农业科学》2009,(9)

概述了免疫试纸检测技术的原理,并分别从抗原和抗体2个方面简述免疫试纸检测技术的应用及在此方面取得的成就。  相似文献